光动力疗法对人胃癌细胞MGC-803的杀伤性干预

目的:观察5-氨基乙酰丙酸介导的光动力学疗法对人胃癌细胞MGC-803的干预作用,探讨光动力学疗法治疗胃癌的可能作用途径。方法:实验于2004-03/2004-12在全军神经医学研究所完成。试剂5-氨基乙酰丙酸购自美国Sigma公司;MGC-803人胃腺癌细胞株购于中山大学实验动物中心。①分别使用不同浓度的5-氨基乙酰丙酸培养MGC-803胃癌细胞,浓度分别为0.25,0.5,1.0,2.0,4.0mmol/L,给予相同剂量的激光辐照。②使用相同浓度的5-氨基乙酰丙酸培养MGC-803胃癌细胞,给予不同剂量的激光辐照,能量分别为6.25,12.5,25.0,50.0,100J/cm2。③使用不同浓度的5-氨基乙酰丙酸培养MGC-803胃癌细胞,浓度分别为0.25,0.5,1.0,2.0,4.0mmol/L,不予激光辐照。④给予不同剂量的激光辐照培养MGC-803胃癌细胞,能量分别为6.25,12.5,25.0,50.0,100J/cm2,不给予5-氨基乙酰丙酸。以上4个实验均以四甲基偶氮唑盐法检测细胞活力,以不加5-氨基乙酰丙酸、无激光辐照培养的细胞作为空白对照,细胞存活率=处理组细胞吸光度值/对照组细胞吸光度值×100%。⑤培养MGC-803胃癌细胞,随机分为4组,即单纯MGC-803胃癌细胞组、单纯5-氨基乙酰丙酸组、单纯给予激光组及光动力学治疗组,使用吖啶橙-溴化乙锭染色法检测细胞凋亡情况。结果:①5-氨基乙酰丙酸浓度不同、激光辐射剂量相同:随5-氨基乙酰丙酸浓度逐渐递增,MGC-803细胞的存活率逐渐下降,各组细胞存活率之间差异有显著性意义(F=266.39,P<0.01);但在浓度到达2.0mmol/L后,细胞存活率不再随着5-氨基乙酰丙酸的浓度的增加而下降。②激光能量不同、5-氨基乙酰丙酸浓度相同:随着激光剂量的增加MGC-803细胞存活率显著下降,各组细胞存活率之间差异有显著性意义(F=226.31,P<0.01)。③5-氨基乙酰丙酸浓度不同、不给激光辐射:各组细胞存活率之间差异均无显著性意义(F=0.79,P=0.54)。④激光辐射剂量不同、不给5-氨基乙酰丙酸:各组细胞存活率之间差异均无显著性意义(F=0.61,P=0.66)。⑤只有光动力学治疗组出现细胞凋亡现象,而其他细胞组基本无凋亡细胞。结论:在较低的浓度范围内,5-氨基乙酰丙酸介导的光动力疗法对人胃癌MGC-803细胞的杀伤作用随着5-氨基乙酰丙酸浓度的增加而增加,在较高浓度时则存在饱和现象,而且杀伤力与光剂量成正比。单纯激光不能产生光动力效应,5-氨基乙酰丙酸本身对细胞无毒性作用。5-氨基乙酰丙酸介导的光动力学治疗能够有效的治疗胃癌,光动力学疗法诱导肿瘤细胞凋亡是其可能作用途径之一。     

101例手术切除的结直肠癌组织介电特性的探讨

探究采用开端同轴线射频技术测量得到的结直肠癌组织和正常结直肠组织的介电特性是否具有显著差异,探讨能否应用该技术判断结直肠癌的病理类型。101例手术切除的新鲜离体结肠／直肠癌标本来自南方医科大学珠江医院手术室,应用开端同轴线仪器在170～500 MHz频率段分别检测癌组织和正常组织的相对介电常数和电导率。粗略选取170．32、212．90、255．48、298．06、383．22、468．38、500．00 MHz几个频率点的介电特性纳入统计分析。术后对标本行病理切片检查。结直肠癌组织的相对介电常数和电导率均比正常结直肠组织高（P＜0．01）,粘液腺癌组织的电导率在170．32、212．90、255．48、298．06、383．22 MHz时比腺癌组织高（P＜0．05）,结直肠癌高、中、低分化三种不同分化程度的介电特性无统计学意义（P＞0．05）。应用开端同轴线仪器可以快速而准确地辨别结直肠癌组织和正常结直肠组织,同时可以判断结直肠癌的病理类型。     

双自杀基因联合Survivin反义寡核苷酸对结肠癌裸鼠的体内抑瘤作用

目的 研究VEGF启动子驱动的双自杀基因(Ad-VEGFP-CDglyTK)联合Survivin反义寡核苷酸对裸小鼠体内结肠癌移植瘤的抑瘤作用.方法 建立裸小鼠人结肠癌模型,将24只成瘤后的裸小鼠随机分为4组(n=6):空白对照组,不施加任何处理;重组腺病毒组,注射重组腺病毒Ad-VEGFP-CDglyTK与前药氟胞嘧啶(5-DC)、更昔洛韦(GCV);Survivin反义寡核苷酸(SurvivinASODN)组,注射Survivin ASODN;基因联合治疗组,注射重组腺病毒Ad-VEGFP-CDglyTK与前药5-FC、GCV,同时注射SurvivinASODN.治疗后测定瘤重并计算肿瘤生长抑制率;将瘤组织进行HE染色;免疫组化检测微血管密度(MVD).结果 各组最终瘤重及肿瘤生长抑制率分别为:空白对照组516.58±10.58mg,0%;重组腺病毒组238.74±15.77mg,53.78%±3.12%;Survivin ASODN组225.61±13.47mg,56.23%±2.60%;基因联合治疗组63.70±3.41mg,87.66%±0.70%.空白对照组与其他3组有显著差异(P<0.05),基因联合治疗组与重组腺病毒组、SurvivinASODN组比较亦有显著性差异(P<0.05).常规病理检查可见肿瘤细胞生长受抑制,特别是基因联合治疗组抑瘤作用最明显,肿瘤组织切片中可见片状坏死区,而且这些区域可见大量炎性细胞浸润.空白对照组、重组腺病毒组、Survivin ASODN组和基因联合治疗组MVD分别为19.25±3.19、11.33±2.46、10.42±2.35、3.33±1.56,空白对照组MVD明显高于其他3组(P<0.05),重组腺病毒组及Survivin ASODN组MVD均显著高于基因联合治疗组(P<0.05).结论 VF/3F启动子驱动的双自杀基因和Survivin ASODN均具有一定的体内抑瘤作用,两者联合应用具有协同作用,对于肿瘤的抑制作用更加显著.     

重组腺病毒介导的KDR-CDglyTK基因靶向杀伤胃癌细胞的体外实验研究

目的探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的双自杀基因体系对人胃癌细胞SCG7901靶向杀伤作用以及是否存在旁观者效应。方法用MOI=100时,将携带融合基因重组腺病毒Ad-KDR-CDglyTK及Ad-CMV-CDglyTK体外感染SCG7901、ECV304和HepG2细胞,检测细胞的感染效率以及转基因肿瘤细胞在mRNA水平上融合基因的表达;在前药5-氟胞嘧啶(5-FC)和/或更昔洛韦分别按不同浓度、不同作用时间和方式下,观察双自杀基因体系对SCG7901细胞的靶向杀伤作用和旁观者效应。结果携带双自杀基因(CDglyTK)和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SCG7901、HepG2和ECV304细胞中有GFP表达。感染腺病毒Ad-CMV-CDglyTK的各细胞以及感染腺病毒Ad-KDR-CDglyTK的SCG7901及ECV304细胞对单一前药具有较高的敏感性,细胞的存活率各随单一前药浓度的增加而递减;而感染腺病毒的Ad-KDR-CDglyTK的HepG2细胞对前药不敏感。感染腺病毒Ad-KDR-CDglyTK的SCG7901及ECV304细胞分别在同一浓度前药的作用下,...     

双自杀基因系统对乳腺癌细胞体外特异性杀伤作用

目的: 探讨腺病毒介导VEGF启动子驱动的CD/TK双自杀基因体系(Ad-VEGFP-CD/TK)对乳腺癌细胞MCF-7的体外靶向杀伤作用。 方法: 用重组腺病毒Ad-VEGFP-CD/TK体外感染表达VEGF的MCF-7细胞和不表达VEGF的原代培养的乳腺上皮细胞,荧光显微镜观察其感染率,并以RT-PCR、Westernblot方法检测受感染细胞CD/TK的表达,然后给予前药GCV和5-FC,用MTT法观察该体系对细胞生长增殖的影响;电镜观察细胞的病变;用流式细胞术观察细胞内DNA含量的变化;分光光度法检测细胞内Caspase-3活性。 结果: 腺病毒对两种细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的增高而递增。RT-PCR和Westernblot检测发现转染Ad-VEGFP-CD/TK的MCF-7细胞有目的基因和蛋白的表达,而乳腺上皮细胞无表达。MTT法检测显示表达VEGF的MCF-7细胞对前药具有较高的敏感性,而不表达VEGF的乳腺上皮细胞对前药不敏感。在感染复数为100时,电镜下可见用药组MCF-7细胞有凋亡改变。用流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰;且随着前药浓度的升高转基因细胞内Caspase-3活性逐渐升高。 结论: VEGF启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤人乳腺癌细胞MCF-7并诱导细胞凋亡,细胞内Caspase-3活性升高可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。     

AdKDR-CDglyTK融合基因系统治疗胰腺癌的实验研究

Objective To investigate the curative effect of the adenovirus-mediated fusion gene system driven by KDR promoter (AdKDR-CDglyTK) on a model of pancreatic cancer. Methods By using transplantation of the cultivated cells, human pancreatic cell line Capan-2 was injected subcutaneously on the back of nude mice to establish the animal model of the pancreatic cancer. Twenty nude mice were divided randomly and equally into four groups. The mice in group Ⅰ were injected with AdKDR-CDglyTK and 5-FC/GCV, those in group Ⅱ were injected with 5-FC/GCV, those in group Ⅲwere injected with AdKDR-CDglyTK and those in group Ⅳ received no any injection. AdKDR-CDglyTK was injected directly into the tumor and 5-FC/GCV was given by intraperitoneal injection. The observing parameters included common status, tumor bulk, tumor weight, inhibition rate of tumor growth, pathology, immunohistochemistry and treatment effect in each group. Electron microscopy was performed to observe the pathological changes of cells. The apoptotic cells in tumor were detected using the TUNEL assay. The expression of CDglyTK in tumors from each group was examined by RT-PCR. Results Tumor growth was dramatically inhibited in group Ⅰ. Tumor growth has no significant difference among groupⅡ , group Ⅲ and group Ⅳ. The apoptotic rate (34.20±4.60)% was significantly increased in group Ⅰ (F= 243. 22, P= 0. 00) and it had no significant difference among groupⅡ , group Ⅲ and group Ⅳ (P＞0.05). Conclusion AdKDR-CDglyTK with 5-FC/GCV can obviously inhibit the growth of human KDR-expressing pancreatic cell line Capan-2 and induce the cell apoptosis in vivo. The probable molecular mechanism lies in the facts that the system can cause a decline in the level of Bcl-2.     

恶性腹膜间皮瘤的诊治体会

目的 探讨恶性腹膜间皮瘤的诊治方法。方法 回顾分析16例恶性腹膜间皮瘤临床表现、实验检查及治疗方法。结果 16例中术前确诊3例,剖腹探查10例,急诊手术1例,腹腔镜探查2例。随访12例,半年内死亡2例,2年内死亡7例,1例生存超过2年。另2例为近1年内患者,继续治疗中。结论 恶性腹膜间皮瘤无特异性症状,诊断困难,误诊率高。诊断主要依据脱落细胞检查、腹腔穿刺活检、腹腔镜及剖腹探查。预后差,综合治疗有望延长患者生存期。     

f血管内皮生长因子受体介导的双自杀基因重组腺病毒联合Survivin反义寡核苷酸对血管内皮细胞的特异性杀伤作用

目的探讨腺病毒介导血管内皮生长因子受体(KDR)启动子驱动的CDglyTK融合基因体系联合Survivin反义寡核苷酸(ASODN)对血管内皮细胞的特异性杀伤作用。方法将质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK在293细胞内包装、扩增后,体外感染表达KDR的ECV304细胞株,同时用Survivin ASODN转染同一细胞株,应用逆转录-聚合链反应(RT-PCR)和Western blot检测CDg- lyTK和Survivin基因的表达,观察两者联合应用对细胞株的杀伤效应和旁观者效应。结果Sur- vivin ASODN可转染重组腺病毒感染的细胞,并对两者的转染及感染效率无明显影响,CDglyTK可在ECV304细胞株高效表达,Survivin ASODN可明显降低Survivin蛋白表达。单独导入IC50的Survivin ASODN基因,细胞存活率为(55．90±3．61)％,与AdKDR-CDglyTK基因联用后,在GCV 60 mg／L、5-FC 500 mg／L时,细胞存活率明显低于单用AdKDR-CDglyTK或Survivin ASODN(P< 0．05),但在GCV 100mg／L、5-FC 2 000mg／L时,联合基因治疗组细胞存活率略低于单用AdKDR- CDglyTK,两者间差异无统计学意义(P>0．05)。联合基因较单一基因对ECV304细胞具有更明显的旁观者效应。结论KDR启动子调控的CDglyTK融合基因体系和Survivin ASODN基因联合,较单一基因具有更强的特异性杀伤血管内皮细胞的作用。     

健康教育管理缓解普通外科患者候诊期间焦虑情绪的实践

目的探讨健康教育管理缓解普通外科病患者候诊期间焦虑情绪的方法和效果。方法选取来普通外科就诊的90例患者,随机分成两组,其中对照组45例行常规护理管理,实验组45例在此基础上结合健康教育管理。随访3～5d,比较两组患者焦虑干预总有效率,采用SAS焦虑自评量表和Venham临床焦虑及合作行为级别评定量表评价患者焦虑变化。结果两组间比较,实验组患者的总有效率为95.6%,高于对照组的77.8%(P<0.05);SAS和Venham改变亦均优于对照组(P<0.05)。结论护理结合健康教育管理能有效缓解普通外科患者候诊期间的焦虑情绪,增强满意度。     

胰十二指肠切除术的应用体会

胰十二指肠切除属于切除范围广泛、创伤大、操作复杂的手术,我科近4年共施行胰十二指肠切除术12 3例,取得良好的治疗效果,总结如下。床资料1.一般资料:本组12 3例中男72例,女5 1例;年龄2 3～87岁。其中严重胰十二指肠损伤行胰十二指肠切除术9例其余患者入院前病程最短7d ,最长5个月。以黄疸为主诉79例,其中无痛或伴轻微右上腹痛5 3例,伴明显上腹或右上腹痛34例,伴中度以上发热2 5例,均有不同程度体重下降。临床发现上腹部包块17例,胆囊肿大5 0例,肝大5 5例,均有上腹部或右上腹部压痛。2 .手术方法:术中全面探查腹腔,对于平诊患者均按三部探…