5-氨基乙酰丙酸介导的光动力学治疗胃癌的实验研究

目的探讨5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)介导的光动力学对人胃癌细胞MGC-803的治疗作用.方法将不同浓度的5-ALA加入细胞培养基中,随之给予相同剂量的激光辐射;之后用固定浓度的5-ALA处理细胞,并给予不同剂量的激光辐射.MTT法测定细胞生存率.结果在相同的辐射剂量下,经0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mmol/L的5-ALA处理的细胞生存率分别为(70.07±5.37)%、(50.04±4.99)%、(34.53±5.30)%、(26.89±4.44)%和23.90%±2.80%,除2.0和4.0 mmol/L5-ALA两组间外,其余各组间具有显著性差异(F=266.39,P＜0.001).在相同的5-ALA的浓度下,辐射剂量为6.25、12.5、25.0、50.0、100 J/cm2的细胞生存率分别为(83.50±10.43)%、(67.96±9.23)%、(33.80±8.26)%、(23.31±5.98)%和(14.96±3.50)%,各组之间有显著性差异(F=226.31,P＜0.0001).而单用5-ALA处理细胞,对应于其浓度为0.25、0.5、1.0、2.0,和4.0 mmol/L时的细胞生存率分别为(96.46±6.72)%、(97.48±5.27)%、(98.33±6.67)%、(99.47±6.97)%和(95.66±7.72)%,各浓度之间无显著性差异(F=0.79,P=0.5383).单纯激光辐射,其剂量为6.25、12.5、25.0、50.0、100.0 J/cm2时的细胞生存率也无显著性差异(F=0.61,P=0.6551).结论在较低的浓度范围内,5-ALA介导的光动力学治疗对人胃癌MGC-803细胞的杀伤作用随着5-ALA浓度的增加而增加,在较高浓度时则存在饱和现象,杀伤力与光剂量成正比.单纯激光不能产生光动力效应,5-ALA本身对细胞无毒性作用.5-ALA介导的光动力学治疗是很有希望的胃癌治疗方法.     

肛门失禁动物模型的构建及评价

目的 构建成年新西兰兔肛门失禁动物模型.方法 选取12只成年健康雄性新两兰兔,按随机数字表完全随机分为2组:实验组和对照组.功能性定位兔肛门外括约肌双侧支配神经,即第4骶神经,相当于人体解剖学中的骶神经,实验组局部注射50 g/L罗哌卡因,选择性破坏该神经,对照组注射生理盐水.检测操作前后肛管内静息压力的变化,观察第4骶神经及其效应肌的神经肌电图和组织病理学变化.结果 与对照组相比,实验组兔术后肛管内静息压力明显下降.神经肌电图显示术后实验组第4骶神经传导异常.透射电镜显示实验组第4骶神经轴索不可逆性改变.结论 局部注射药物破坏肛门外括约肌双侧支配神经可成功制作出紧迫失禁的动物模型,为进一步做人工肛门体内实验研究提供了参考.     

聚酰胺纳米分子介导survivin反义寡核苷酸诱导结肠癌细胞凋亡☆

背景：传统的病毒载体及非病毒载体在基因治疗中均存在明显的缺点,采用纳米材料作为反义寡核苷酸载体有望获得更好更安全的基因转导,提高基因治疗的有效性和安全性。实验拟采用聚酰胺纳米分子介导反义寡核苷酸阻断survivin表达,诱导大肠癌凋亡。 目的：探讨聚酰胺树形分子高聚合物介导survivin反义寡核苷酸(survivin antisense oligonucleotide,survivin-asODN)转染结直肠癌SW620细胞的可行性以及对结直肠癌SW620细胞survivin表达、细胞凋亡的影响。 设计、时间及地点：肿瘤基因治疗体外实验,于2007-09/2008-05在上海交通大学微纳米科学技术研究院生物纳米工程研究室及南方医科大学珠江医院中心实验室完成。 材料：人结直肠癌细胞株SW620购自中国科学院上海细胞研究所,聚酰胺树形分子由上海交通大学微纳米研究院生物纳米工程研究室崔大祥教授提供,转染试剂脂质体LipofectamineTM 2000购自美国Invitrogen公司。survivin-asODN由上海生工公司合成。 方法：采用300 µg/L survivin-asODN和4.06 µg/L聚酰胺制备聚酰胺反义基因复合物,同时制备阳离子脂质体反义基因复合物作为对照。透射电镜观察复合物的形态,激光散射粒径分析仪测定粒径,zeta电位分析仪测定zeta电位,离心法和紫外分光光度仪测定复合物的的包封率、载药率和体外DNA释放速度。将上述两种基因转染复合物转染结直肠癌细胞,测定其转染效率;Western blotting检测转染后细胞中survivin蛋白的表达;流式细胞术检测两组细胞的凋亡率。 主要观察指标：阳离子脂质体-survivin- asODN复合物及聚酰胺-survivin-asODN复合物的粒经,zeta电位,基因载药率,包封率,释放率,转染后survivin表达率及对凋亡的诱导率。 结果：聚酰胺-survivin-asODN复合物的粒径小于脂质体-survivin-asODN复合物的粒径(P < 0.01),但zeta电位高于后者(P < 0.05);基因载药率、包封率两组差异无显著性意义;聚酰胺对DNA持续释放14 d,但脂质体只持续5 d。聚酰胺-survivin-asODN 转染结直肠癌细胞的效果强于脂质体- survivin-asODN(P < 0.05)。转染后结直肠癌细胞survivin蛋白的表达低于脂质体复合物(P < 0.05),细胞的凋亡率高于脂质体复合物(P < 0.05)。 结论：聚酰胺能将survivin-asODN高效递送到结直肠癌SW620细胞,降低survivin蛋白表达并诱导结直肠癌细胞凋亡。 关键词：聚酰胺树形分子高聚合物;反义寡核苷酸;结直肠癌;Survivin; 凋亡     

纳米高聚合物转导Survivin反义寡核苷酸对大肠癌的体内杀伤作用*

背景：近年来纳米载体已被视为突破基因转移瓶颈最有前途的技术之一。聚酰胺-胺型树枝状高聚合物(polyamidoamine,PAMAM)是一种新型的纳米材料,体内外实验表明,PAMAM比其他阳离子载体的基因转染效率高、细胞毒性低。 目的：探讨PAMAM介导Survivin反义寡核苷酸(Survivin antisense oligonucleotide,Survivin-asODN)对结直肠癌裸鼠移植瘤的抑制作用。 设计、时间及地点：肿瘤基因治疗体内实验,于2008-02/08在上海交通大学微纳米科学技术研究院生物纳米工程研究室及南方医科大学珠江医院中心实验室完成。 材料：人结直肠癌细胞株SW620购自中科院上海细胞所,PAMAM树形分子由上海交通大学微纳米研究院生物纳米工程研究室提供,脂质体LipolifectmainTM2000购自美国Invitrogen公司。Survivin-asODN由上海生工公司合成。 方法：将PAMAM和阳离子脂质体分别与Survivin-asODN混合得到载反义基因转染复合物。透射电镜观察复合物的形态,激光散射粒径分析仪测定粒径,zeta电位分析仪测定复合物的zeta电位,离心法和紫外分光分度仪测定复合物的包封率和体外DNA释放速度。将对数生长期的人结直肠癌细胞SW620细胞接种于18只Balb/C裸鼠皮下建立结直肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机均分为脂质体组、PAMAM组和空白对照组。分别注射脂质体-survivin-asODN转染复合物、PAMAM-survivin-asODN转染复合物、血清培养液,观察两组移植瘤体积,Western bloting方法检测移植瘤组织中survivin基因的表达。 主要观察指标：阳离脂质体-survivin-asODN复合物及PAMAM-survivin-asODN复合物的粒经,zeta电位,基因载药率,包封率,释放率,转染后survivin表达率及对凋亡的诱导率,种植肿瘤生长抑制率,移植瘤细胞Survivin蛋白的表达及活性。 结果：PAMAM-survivin-asODN复合物的粒径小于脂质体-survivin-asODN复合物的粒径(P < 0.01),而zeta电位高于PAMAM- survivin-asODN复合物zeta电位(P < 0.05),基因包封率两组差异无显著性意义。PAMAM对DNA持续释放达14 d,但脂质体复合物只持续5 d。PAMAM- survivin- asODN复合物治疗组裸鼠移植瘤survivin蛋白表达低于脂质体-survivin- asODN复合物组(P < 0.05)。PAMAM- survivin-asODN复合物治疗组移植瘤体积低于脂质体-survivin-asODN复合物组(P < 0.05)。 结论：PAMAM能将Survivin-asODN高效递送到结直肠癌移植瘤细胞,降低survivin蛋白的表达,抑制移植瘤生长。 关键词：聚酰胺-胺型树枝状高聚合物;结直肠癌;反义寡核苷酸;Survivin doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2009.47.045     

健康教育在老年社区康复工作中的影响观察

根据世界卫生组织(WHO)的相关规定,不论专业、性别、宗教等,只要年龄＞60岁的人就可称为老年人.我国60岁以上老年人口的比例以每年3.2%的速度递增;按照国际上的规定,60岁以上的老年人口比例达到10%以上时,即属于老年人口型社会,我国社会正逐步进入老年化[1].社区卫生服务不仅仅是社区医疗服务,而是指医疗、预防、康复、保健、健康教育和计划生育技术指导六位一体的以预防为主,防治结合的综合性医疗服务.健康教育是社区卫生服务的重要内容之一,贯穿于社区卫生服务的全过程[2].在我国社区康复工作起步较晚,对老年人群、高危人群的相关健康教育较薄弱[3].作者观察了健康教育在老年社区康复工作中的影响,旨在探讨提高老年社区康复质量的措施,报告如下.     

改良减张缝合法在腹部切口的临床应用及对比研究

目的：研究改良减张缝合法对腹部切口愈合的影响。方法归纳经腹正中切口及腹直肌切口并行减张缝合的病例87例,按缝合方式分成两组：改良组（44例）采用改良减张缝合法;对照组（43例）采用传统减张缝合法。对两组患者的切口甲级愈合例数、切口裂开数、使用强阿片镇痛例数进行观察并作分析。结果改良减张缝合法与传统减张缝合法相比,前者切口甲级愈合情况优于后者,差异有统计学意义（P＜0．05）,两者术后切口裂开情况相比差异无统计学意义（P＞0．05）,改良组术后切口疼痛减轻,强阿片类镇痛药物使用率较对照组低,差异有统计学意义（P＞0．05）。结论改良减张缝合法在切口愈合上明显优于传统减张缝合法,可在临床应用中广泛推广。     

AdKDR-CDglyTK融合基因系统治疗胰腺癌的实验研究

目的 观察腺病毒介导的KDR启动子驱动的CD/TK融合双自杀基因系统(以下简称为AdKDR-CDglyTK)对胰腺癌的治疗作用.方法 采用培养细胞移植法,将人胰腺癌细胞系Capan-2接种于裸鼠背部皮下,建立裸鼠人胰腺癌移植瘤模型.将20只裸鼠随机分为4组,每组5只.分组方法:Ⅰ组:注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTK与前药5-FC与GCV;Ⅱ组:仅注射前药5-FC与GCV;Ⅲ组:仅注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTKⅣ组:空白对照,不施加任何处理.重组腺病毒AdKDR-CDglyTK采用瘤体内多点注射,5-FC与GCV给药方法采用腹腔内注射的方法,观察各组小鼠的生存状况及肿瘤体积、瘤重、肿瘤生长抑制率、常规病理等指标;应用透射电镜观察细胞超微结构,用TUNEL法检测细胞凋亡率,比较观察各治疗组的治疗效果;并对各组的肿瘤组织行RTPCR的检测,以了解有无双自杀基因CDglyTK的表达.结果 第Ⅰ组裸鼠移植瘤的生长显著受到抑制,第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肿瘤生长情况无明显差别.第Ⅰ组肿瘤细胞凋亡指数为(34.20±4.60)%,较对照组显著增加(P=0.00).结论 AdKDR-CDglyTK联合前药5-FC及GCV对人胰腺癌Capan-2细胞具明显的抑制作用,并且诱导裸鼠体内人胰腺癌Capan-2细胞的凋亡.其可能的机制是通过下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达.     

胃肠间质瘤精索转移一例

患者男性．72岁。无明显诱因反复右下腹隐痛不适1周而于2013年5月12日入院,疼痛无放射,持续十几分钟至数小时不等．自发缓解。患者曾于2011年4月22日因“左上腹腔肿物待查”而人院行“腹腔镜辅助胃壁肿物切除术加脾切除术”,术程顺利．术后恢复良好;当时病理诊断示：胃的胃肠间质瘤,高危险程度。免疫组织化学（免疫组化）检测示：     

"蓝碟"手助技术在腹腔镜腹部手术的应用——附78例报告

目的探讨“蓝碟”（Lapdisc）手助器辅助腹腔镜手术（hand—assisted laparoscopic surgery，HALS）用于腹部手术的可行性。方法建立CO2气腹，根据病变部位和手术的要求，放置trocar和“蓝碟”手助器，对78例腹部疾病施行HALS，观察“蓝碟”手助器在腹部HALSA的实施过程，术中效果及术后临床效果。结果经Lapdisc完成70例HALS，术中出血量100—300ml，平均186ml；手术时间60—240min，平均140min；住院时间9—15d，平均10．2d。8例因腹腔镜下操作复杂危险而中转开腹。结论“蓝碟”手助器使用简单、感觉舒适，对切口提供完美保护，术中能维持良好的气腹状态。“蓝碟”简化传统腹腔镜的操作，可应用于绝大多数腹部外科疾病的HALS，安全可行。     

KDR启动子驱动双自杀基因诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨KDR启动子驱动双自杀基因体系对胃癌细胞凋亡的诱导作用。方法以重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的SCG7901细胞株和不表达KDR的HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV和（或）5-FC,观察该体系对SCG7901细胞的杀伤效应。分别应用透射电镜、Hoechest33258／PI染色、流式细胞仪观察细胞超微结构、细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果携带双自杀基因（CDglyTK）和报告基因（GFP）的重组腺病毒载体转染后,95％以上SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达。表达KDR的SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性,不表达KDR的HepG2细胞对前药不敏感（P〈0．01）。两种前药联合应用优于任一前药单独应用的疗效（P〈0．01）。流式细胞术检测表明该体系可抑制SCG7901细胞DNA的合成,表现为s期细胞比例增高及G2期细胞减少。同时,Hoechest33258／PI染色和电镜下可见SCG7901有凋亡改变。结论KDR启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,并且该体系可以诱导胃癌细胞凋亡。