在大鼠关节滑膜细胞表达人白细胞介素10的基因转移系统的建立

目的 建立一个在大鼠关节滑膜细胞表达人白细胞介素１０（ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１０,ｈＩＬ－１０）的重组逆转录病毒载体基因转移系统,为下一步的研究工作做准备。方法 构建表达人白细胞介素１０的 转灵病毒重组体的ｐＬＸ（ｈＩＬ－１０）ＳＮ,经ＰＡ３１７细胞包装,Ｇ４１８筛选,ＮＩＨ３Ｔ３细胞进行病毒滴度测定,选滴度最高的克隆（６×１０＾８集落形成单位／Ｌ）作为感染大鼠关节滑膜细胞的感染细胞;     

生殖支原体脂质相关膜蛋白诱导宫颈上皮细胞表达人β防御素2

目的观察生殖支原体脂质相关膜蛋白(LAMP)能否诱导宫颈上皮细胞表达人β防御素2(hBD-2),并探讨其可能的调控机制。方法体外培养End1/E6E7人宫颈上皮细胞,用不同浓度的LAMP作用细胞48 h,反转录PCR检测hBD-2 mRNA的表达,Western blot法检测hBD-2蛋白的表达;用Toll样受体2(TLR2)和TLR6中和抗体孵育End1/E6E7细胞,并用TLR2、TLR6和MyD88负显性突变体转染细胞,以明确TLR2、TLR6和MyD88在介导hBD-2表达中的作用;Western blot法检测核因子κB(NF-κB)p65亚基核转位情况,电泳迁移率实验(EMSA)分析LAMP处理前后NF-κB的DNA结合活性;采用NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)处理,观察对hBD-2表达的影响。结果生殖支原体LAMP可诱导End1/E6E7细胞表达hBD-2mRNA和蛋白。TLR2和TLR6中和抗体以及其负显性突变体转染后,能降低hBD-2表达;MyD88负显性突变体也能显著抑制LAMP诱导的hBD-2表达。Western blot结果显示,LAMP处理后可诱导p65核转位,并能增强NF-κB的DNA结合活性。而NF-κB抑制剂PDTC处理后,hBD-2表达降低。结论生殖支原体LAMP可诱导End1/E6E7细胞表达hBD-2,可能受TLR2、TLR6/MyD88/NF-κB调控。     

抗T细胞单克隆抗体对再生障碍性贫血患者TNF和IL—2水平的影响

为探讨抗Ｔ淋巴细胞克隆抗体对再生障碍性贫血患者免疫功能的调节作用，采用放射免疫检测２５例ＡＡ患者ＭｃＡｂ－Ｔ治疗前后血清肿瘤坏死因子和白细胞介素－２（ＩＬ－２）水平及其中１０例周围血单个核细胞体外诱生ＴＮＦ和ＩＬ－２水平的变化。     

抗生素诱导的肠道菌群失调加重小鼠肺炎支原体感染

目的初步探讨抗生素诱导的肠道菌群失调对肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)呼吸道感染的影响。方法C57BL/6J小鼠口服万古霉素和庆大霉素21 d后滴鼻感染Mp。实时荧光定量PCR(qPCR)分析抗生素处理前后小鼠粪便中5个主要菌门的菌量;qPCR检测感染后3 d和7 d肺组织中Mp载量;病理切片和HE染色分析肺组织炎症病理改变;流式细胞术分析小鼠脾脏T淋巴细胞分泌的IFN-γ和IL-4;间接ELISA检测Mp特异性IgM和IgG。结果口服万古霉素和庆大霉素后小鼠粪便中拟杆菌门菌量显著减少,厚壁菌门菌量增多,δ,γ变形杆菌门、放线菌门和软壁菌门菌量亦发生改变;口服抗生素小鼠感染Mp后3 d和7 d肺组织Mp载量和炎症病理评分增加,7 d小鼠脾淋巴细胞中分泌IFN-γ的CD4+T细胞减少。结论抗生素诱导的小鼠肠道菌群失调可加重Mp呼吸道感染。     

用PCR分析30例急性淋巴细胞白血病的克隆演化

为了解急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ基因重排情况，应用ＰＣＲ技术对３０例急性淋巴细胞白血病初诊时及其中１０例复发后进行研究分析。结果表明：１５例Ｂ－ＡＬＬ中１３例具有ＩｇＨ基因重排，其中３例存在２条重排带，８例合并ＴＣＲγ基因重排；８例Ｔ－ＡＬＬ中６例具有ＴＣＲγ基因重排；３例Ｔ．Ｂ－ＡＬＬ具有ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因双重排；４例Ｎｕｌ－ＡＬＬ中２例具有ＴＣＲγ基因重排。１０例复发后，７例具有相应的ＩｇＨ或ＴＣＲγ基因重排，２例丢失ＩｇＨ基因重排，１例获得ＴＣＲγ基因重排。以上事实表明在ＡＬＬ病程中存在白血病细胞克隆演化     

急性白血病非系限性分化抗原的动态研究

为探讨仅表达非系限性分化抗原的急性白血病的细胞起源，采用单克隆抗体免疫酶标和聚合酶链反应技术分析了１２例初诊时仅表达非系限性分化抗原的急性白血病化疗后免疫表型及免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ基因重排的变化。结果表明：初诊时仅表达ＣＤ３８抗原的５例急性白血病，化疗后３例出现Ｔ细胞相关抗原表达，并伴ＴＣＲγ基因重排；５例初诊时仅表达ＨＬＡ－ＤＲ或ＣＤ９的急性白血病，化疗后４例出现Ｂ细胞相关抗原表达，均伴有ＩｇＨ基因重排；２例无任何抗原表达者，化疗后１例表达Ｂ细胞相关抗原，另１例表达骨髓细胞相关抗原。提示免疫标志的动态研究，有助于初诊时免疫学无法分类急性白血病细胞起源的确定。     

胫骨平台骨折的现代治疗探讨

目的总结近年来治疗胫骨平台骨折的经验教训，为临床选择更好的治疗方法、提高胫骨平台骨折手术疗效提供参考。方法回顾分析自2001-2007年收治的胫骨平台骨折89例，其中按照Schatzker分型复杂胫骨平台骨折（Ⅴ型，Ⅵ型）67例，男性75例，女性14例。均行切开复位，严格按照内固定原则分别采用螺丝钉和／或外固定架、钢板、微创内固定系统固定骨折进行治疗，必要时辅以关节镜探查镜下手术。结果75例得到随访，最短6个月，最长6年，平均31个月。骨折均愈合，疗效评定参照Merchant标准，术后6个月优良率为81．6％，术后1年优良率为89．3％。结论胫骨平台骨折应当考虑手术治疗，周密的术前计划、妥善处理软组织损伤、正确选择切口、灵活应用内外固定物及关节镜辅助均是手术成功的重要因素。     

应用噬菌体展示肽库筛选生殖支原体黏附蛋白的模拟表位

目的 利用纯化的兔抗重组生殖支原体黏附素蛋白(rMgPa)的多克隆抗体(pAb)从噬菌体展示随机12肽库筛选MgPa的模拟表位.方法 用纯化的兔抗rMgPa的pAb对噬菌体随机12肽库进行生物淘洗,随机挑取噬菌体克隆进行DNA测序与分析,并用MIMOX对噬菌体克隆所展示的肽序列进行生物信息学分析.用ELISA、竞争性结合试验和Western blot检测噬菌体与pAb结合的特异性.结果 4轮生物淘洗后特异性噬菌体克隆得到了明显的富集.依据氨基酸组成的不同,74个噬菌体克隆所展示的肽序列可大致分为3组.经对肽序列进行比较分析以及用MIMOX进行生物信息学分析,结果表明这3组的核心序列分别为:P-S-A-A/V-X-R-F/W-E/S-L-S-P、A-K-I/L-T/Q-X-T-L-X-L和K-S-L-S-R-X-D-X-I.ELISA、竞争性结合试验和Western blot方法检测的结果表明噬菌体能与pAb发生特异性结合,说明其可能是MgPa的模拟表位.结论 成功筛选到MgPa的3个可能的模拟表位,为研制基于Mg抗原表位的诊断试剂与多肽疫苗奠定了一定的实验基础.     

藏红花水提取物通过调控ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达影响人卵巢癌细胞HO-8910增殖北大核心CSCD

目的:探讨藏红花水提取物调控ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达对人卵巢癌细胞HO-8910增殖、凋亡、侵袭的影响。方法:以人卵巢癌细胞HO-8910为研究对象,给予不同浓度(0、0.4、0.8、1.0 mg/L)藏红花水提取物进行培养,MTT法检测细胞HO-8910的增殖活力;流式细胞术观察细胞HO-8910的凋亡率;划痕法检测细胞HO-8910的迁移情况;Transwell法检测细胞HO-8910的侵袭情况;Western blot法检测细胞HO-8910的ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:人卵巢癌细胞HO-8910的增殖活力、迁移能力及侵袭能力受藏红花水提取物的影响,随藏红花水提取物剂量增加,人卵巢癌细胞HO-8910的增殖活力、迁移能力及侵袭能力减弱;而人卵巢癌细胞HO-8910的凋亡率则相反,随藏红花水提取物剂量增加,人卵巢癌细胞HO-8910的凋亡率逐渐增加;受藏红花水提取物影响,人卵巢癌细胞HO-8910中ERK、Bcl-2蛋白的表达降低,Bax蛋白的表达增加,且藏红花水提取物剂量越高,ERK、Bcl-2蛋白表达越低,Bax蛋白表达越高。结论:藏红花水提取物能够降低卵巢癌细胞的增殖活力、迁移能力及侵袭能力,并诱导卵巢癌细胞凋亡,这可能是通过调控ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达来实现的。     

逆转录病毒载体介导的同种MHC基因在小鼠胸腺的表达

目的:通过胸腺内注射质粒 PXN(N2—B19—H—2K~b),表达外源性主要组织相容性抗原复合物(major histo-compatibility complex,MHC)抗原,为下一步诱导异基因小鼠器官移植耐受作准备.方法:通过 BALB/C 小鼠胸腺内注射质粒 PXN(N2—B19—H—2K~b),将外源性的编码 C57BL/6小鼠MHCI类抗原的H—2K~bcDNA转移到 BALB/C小鼠胸腺,用聚合酶链反应(PCR),反转录聚合酶链反应(RT—PCR),单克隆抗体免疫萤光染色流式细胞仪检测BALB/C小鼠胸腺细胞DNA,mRNA和MHC蛋白质表达,结果:BALB/C小鼠胸腺表面有外源性MHC分子表达,转染效率为5.1%结论:通过胸腺内注射逆转录病毒载体PXN(N2—B19—H—2K~b),小鼠胸腺能表达同种MHC基因,为下一步行异基因小鼠器官移植耐受打下了物质基础.