反义及小干扰RNA对大鼠肝星状细胞金属蛋白酶组织抑制因子-1表达的抑制作用

目的观察以腺相关病毒（AAV）为载体，含有针对大鼠金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP）-1的反义RNA及小干扰RNA（siRNA）的重组AAV（rAAV／ANTI-TIMP—1／neo及rAAV／siRNA—TIMP—1／neo）感染大鼠肝星状细胞系HSC—T6后，TIMP—1表达的受抑制情况。方法经聚合酶链反应（PCR）扩增及酶切后连接，将针对TIMP—1的反义RNA片段及甄RNA片段分别构建于AAV载体中并测序鉴定，将其包装成重组病毒后感染大鼠肝星状细胞系HSC—T6，同时设空白对照组。经G418以400ug／m1的浓度筛选30d后，分别应用荧光定量PCR技术及Westernblot检测重组病毒感染组及空白对照组HSC-T6 TIMP-1的基因转录及蛋白质表达水平。结果经PCR、酶切及序列测定证实，两种重组AAV载体质粒（pd16-95／ANTI—TIMP-1／neo和pd16—95／siRNA-TIMP-1／neo）克隆成功。将重组质粒包装成病毒感染HSC—T6细胞30d后，通过荧光定量PCR技术及Westernblot分析显示，重组病毒rAAV／siRNA-TIMP-1／neo组与对照组细胞相比，HSC—T6中的TIMP-1基因的转录被抑制（P〈0．01），且表达水平与对照组相比约下降60％。而rAAV／ANTI—TIMP—1／neo组及空载体组与对照组相比TIMP—1基因的转录及表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论通过AAV载体技术重组病毒rAAV／siRNA-TIMP—1／neo可有效地抑制TIMP-1基因的表达，而针对TIMP—1基因全长的重组病毒rAAV／ANTI—TIMP—1／neo对体外培养的HSC—T6细胞TIMP—1基因的转录与表达无明显抑制作用。     

喘息与非喘息型病毒性肺炎患儿淋巴细胞亚群的研究

目的了解喘息与非喘息型病毒性肺炎患儿淋巴细胞亚群的改变。 方法对2002—2004在北京友谊医院就诊的急性期喘息型病毒性肺炎患儿37例及非喘息型病毒性肺炎患儿32例，采用流式细胞仪对其外周血淋巴细胞亚群进行检测。并以30例健康儿童作为对照组。 结果喘息组与非喘息组病毒性肺炎患儿急性期外周血T辅助淋巴细胞亚群Th1细胞百分率分别为(12.61±7.19)%及(17.32±9.92)%，与对照组\[(9.16±9.90)%\]比较差异均有显著的统计学意义(P<0.001)；喘息组与非喘息组患儿Th1/Th2比值均高于对照组(P<0.05，P<0.01)。此外与非喘息组比较，喘息组CD+4/CD+8较高(P<0.05)，但其他各项指标差异均无统计学意义。 结论病毒性肺炎时不论是否发生喘息，均呈现Th1应答优势。喘息型病毒性肺炎患儿除CD+4/CD+8较非喘息型病毒性肺炎高外，其他各项淋巴细胞亚群差异无明显统计学意义。     

以腺相关病毒为载体的小干扰RNA对肝星状细胞中金属蛋白酶组织抑制因子的抑制作用

目的 观察以腺相关病毒（AAV）为载体含有针对大鼠金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP）-1具有较强抑制作用的小干扰RNA（siRNA）感染大鼠星状细胞系HSC-T6后TIMP-1的表达抑制作用。方法 针对大鼠TIMP-1mRNA基因序列挑选一段22bp片段，在体外构建为短发夹siRNA（short hairpin siRNA，shRNA）表达载体后，将其包装为重组AAV并感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6后，于感染后30d及90d应用荧光定量PCR方法及Westem blot方法分别检测TIMP-1 mRNA及蛋白质表达情况，同时通过PCR技术以感染后细胞的基因组DNA为模板扩增外源基因验证其长效表达。结果 经PCR、酶切及序列测定证实含有siRNA-TIMP-1基因的重组AAV载体质粒已成功克隆。将重组质粒包装成病毒后感染HSC-T6细胞，与对照组细胞相比，感染后30d及90d细胞TIMP-1 mRNA水平明显降低（P〈0．01），感染后30d TIMP-1蛋白表达水平较对照组细胞相比下降约60％，而感染后90d，TIMP-1蛋白表达几乎下降90％。PCR结果显示在重组病毒感染后90d细胞基因组DNA中仍可扩增出外源基因，证实外源基因可长期表达。结论 重组病毒rAAV／siRNA-TIMP-1／neo可长期有效地抑制TIMP-1基因的表达。     

术后早期炎性肠梗阻40例护理体会

术后早期炎性肠梗阻（early postoperative inflammatory ileus,EPII）是发生于腹部外科手术后早期,由于对肠管广泛分离粘连、长时间暴露及其它原因造成的肠管损伤和腹腔内无菌性炎症等原因导致的一种机械性和动力性因素并存的粘连性肠梗阻,是腹部外科手术后的严重并发症之一,其病程较长,病人身心负担重。本文总结了对收治的20例EPII病人的治疗体会。     

带有HBV基因的腺相关病毒为载体的重组病毒感染树突状细胞的研究

目的探讨腺相关病毒（Adeno-associated virus，AAV）为载体的含有HBV—S、C或X基因的重组病毒（rAAV—HBV—S，C，X）感染正常人树突状细胞的效率。方法分别构建含有HBV-S、C和x基因的从v质粒，在293细胞中包装成重组病毒，测定病毒滴度。从正常人外周血中分离出单核细胞进行体外培养，在培养的第1天分别用rAAV—HBV—S、C、X和作为对照的293细胞裂解液感染刺激单核细胞，感染后的单核细胞在GM-CSF、IL-4和TNF-α作用下继续培养7d获得成熟的树突状细胞。用RT-PCR及流式细胞仪细胞内染色检测HBV基因的RNA和蛋白的表达。结果重组rAAV—HBV—S、C、X的病毒滴度可以达到10^7拷贝／ml，用重组病毒分别感染树突状细胞。与对照组相比，感染的树突状细胞可表达相应的HBV基因RNA，流式细胞仪检测显示约90％的树突状细胞有相应HBV蛋白的表达。结论rAAV-HBV可有效感染树突状细胞，提示可以通过该途径刺激树突状细胞提呈抗原。     

术后早期炎性肠梗阻20例护理体会

术后早期炎性肠梗阻(earlv postoperative inflammatory ileus，EPII)是发生于腹部外科手术后早期，由于对肠管广泛分离粘连、长时间暴露及其它原因造成的肠管损伤，和腹腔内无菌性炎症等原因导致的一种机械性和动力性因素并存的粘连性肠梗阻，是腹部外科手术后的严重并发症之一，其病程较长，病人身心负担重。本文结合我科2000年1月-2004年1月收治的20例EPII病人谈谈治疗体会。     

病毒性肺炎淋巴细胞亚群、T淋巴细胞亚群状况研究

目的探讨病毒性肺炎急性期、恢复期外周血淋巴细胞亚群及辅助性T淋巴细胞亚群Th1、Th2百分率,血清免疫球蛋白改变,了解病毒性肺炎的免疫病理状况 方法 采集急性期(43例)、恢复期(18例)及正常对照组外周抗凝血,采用流式细胞仪检测T细胞、T辅助/诱导细胞亚群(CD4 )、T抑制/毒性细胞亚群(CD8 )、B细胞、自然杀伤(NK)细胞的百分数及CD4/CD8 值;同时检测CD4 细胞中Th1、Th2细胞百分比结果 患儿急性期、恢复期B细胞百分率及急性期Th1细胞百分率与对照组比较有显著差异(P<0.05)肺炎组Th1/Th2值较对照组显著增高(P<0.05),血清免疫球蛋白正常或稍高 结论 病毒性肺炎时外周血B细胞增加,体液免疫被激活;急性期Th1细胞百分率增加,Th1型细胞免疫反应性增强,随病情恢复百分率随之下降     

呼吸道合胞病毒及其他病毒性肺炎患儿血淋巴细胞亚群的变化

目的了解不同病原所致病毒性肺炎时血淋巴细胞亚群的改变。方法对2002~2004年确诊为病毒性肺炎的住院患儿,采用流式细胞仪对其急性期血淋巴细胞亚群进行检测。其中呼吸道合胞病毒(RSV)性肺炎组34例,非RSV肺炎组23例。同时与30例健康对照组比较。结果非RSV组Th1细胞百分率为[(15.89±7.88)%],RSV肺炎组为[(11.76±7.31)%],均较对照组显著增高(P=0.011,0);两者亦有显著差异(P=0.026);Th1/Th2在非RSV肺炎组较RSV肺炎组及对照组均明显增高,有非常显著差异(P=0.006,0)。结论病毒性肺炎时呈现Th1应答优势,并以非RSV感染最为明显。与非RSV肺炎相比,RSV感染具有潜在的相对Th2反应倾向。     

穴位注射治疗支原体肺炎100例疗效观察

近年儿科支原体肺炎临床有上升趋势，而且应用多种抗生素大多无效。笔者自１９９６年３月跟随导师卢芳自拟肺炎Ⅱ号加穴位注射治疗儿科支原体肺炎１００例均收到满意疗效，报告如下：１　临床资料　　我们自１９９６年３月至１９９９年８月共治疗支原体肺炎１００例。患儿年龄均在８个月至１２岁，其中３至６岁占总人数的２／３。病程均在１至６个月之间。患儿普遍静点过多种抗生素无效。临床主要症状均为刺激性咳嗽。无发热、肺部叩诊大都无罗音。化验血常规正常，支原体阳性。Ｘ线表现肺纹理增强或片状阴影。２　治疗方法　　基本方：连翘…