硫辛酸氨基酸盐对L02和AHH-1细胞辐射防护作用的研究

目的 通过对不同结构硫辛酸氨基酸盐进行抗辐射效应研究,为开发新型安全有效的抗辐射药提供实验依据。方法 通过芬顿体系利用电子自旋共振光谱(ESR)检测硫辛酸氨基酸盐清除自由基的能力;采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测其对γ射线照射后人肝L02细胞存活率的影响;流式细胞分析法研究其对γ射线照射后人淋巴细胞AHH-1凋亡变化的影响。结果 ESR清除自由基实验显示硫辛酸精氨酸盐清除自由基能力强于硫辛酸及其他硫辛酸氨基酸盐,IC₅₀值为8.40 μmol/ml。CCK-8法实验结果显示硫辛酸氨基酸盐与硫辛酸的抗辐射能力相当,且稳定性更好(P>0.05)。流式细胞分析法对AHH-1进行细胞凋亡检测,硫辛酸氨基酸盐均表现抑制凋亡作用,硫辛酸精氨酸盐作用最好(t=-6.67,P<0.01)。结论 硫辛酸精氨酸盐对L02和AHH-1细胞有较好的抗辐射作用, 其作用机制可能与其清除自由基的作用有关。     

从青年优秀论文看学科的发展

2008年5月4至8日,由中华医学会放射医学与防护学分会主办、第四军医大学军事预防医学系协办的"中华医学会放射医学与防护学分会第5次全国放射医学与防护青年学术交流会议",在西安市隆重召开.这是继2003年9月在重庆第三军医大学召开的"中华医学会放射医学与防护学分会第4次全国中青年学术交流会"以来的又一次盛会.     

M-FISH技术分析60Coγ射线急慢性照射诱发小鼠的骨髓染色体畸变

背景与目的:探索多色荧光原位杂交(Multicolorfluorescenceinsituhybridization,M-FISH)技术分析急慢性电离辐射照射诱发的小鼠染色体畸变的差异。材料与方法:建立用小鼠1、2和4号染色体端粒和着丝粒特异性人工细菌染色体(BacterialArtificialChromosome,BAC)的M-FISH方法,分析受到急慢性60Coγ射线整体照射1.5和3.0Gy的小鼠骨髓染色体畸变,确定剂量和剂量率因子(Doseanddoserateeffectfactor,DDREF)。结果:急性照射的小鼠骨髓染色体稳定性畸变和非稳定性畸变相同,慢性照射的小鼠染色体非稳定性畸变显著低于稳定性畸变。以染色体稳定性畸变为指标DDREF在1.5、3.0Gy分别为2.2±0.4和3.1±0.6。结论:M-FISH方法可用于分析电离辐射诱发的小鼠骨髓染色体畸变,DDREF低于文献中报道的数值。     

TGF-β1对UVB辐射诱导人角质形成细胞miRNA和环氧合酶-2表达 的影响及机制

目的：研究TGF-β1对UVB诱导的人角质形成细胞（HaCaT）中miRNA及炎症反应蛋白环氧合酶-2（COX-2）表达的影响,探讨TGF-β1与紫外辐射诱导的细胞损伤、炎症反应、肿瘤发生等的关系。方法：将10 ng/μL的TGF-β1加入HaCaT细胞培养基中,作用48 h后,利用实时荧光定量PCR检测0、10、20、30 mJ/cm₂ UVB照射后6 h,以及30 mJ/cm₂ UVB照射不同时间（4、12和24 h）后HaCaT细胞内miRNA-23a和let-7c的表达水平;采用Western blot方法检测30 mJ/cm₂ UVB照射不同时间（0、2、4、8、12、24和48 h）后HaCaT细胞中COX-2和caspase-3蛋白表达水平的变化。结果：TGF-β1预先处理可诱导HaCaT细胞在UVB照射后,细胞中miR-23a的表达增加,let-7c的表达受到抑制;TGF-β1预先作用细胞后,COX-2的表达水平明显增加（P < 0.05）,活化的caspase-3亚基自照射后12 h开始随时间延长而减少。结论：TGF-β可以调节紫外线照射后HaCaT细胞miRNAs的表达水平,诱导COX-2的表达增加,在细胞增殖和浸润、炎症反应及细胞抗凋亡中发挥作用。     

辐射诱导染色体畸变的快速FISH方法的建立

目的： 建立一种检测辐射诱导染色体畸变的快速荧光原位杂交(FISH)方法。方法：两步简并引物PCR法扩增人α-卫星DNA,制备荧光基团直接标记的泛着丝粒探针;对60Coγ射线照射后的人外周血淋巴细胞染色体标本进行FISH分析,荧光显微镜下检测着丝粒及染色体形态。结果：直接标记泛着丝粒探针杂交后显示所有染色体着丝粒均有较强的信号;应用制备的FISH探针检测到γ射线照射诱导的双着丝粒、着丝粒环和易位染色体畸变,37 ℃杂交5-12 h后经过简单的洗涤即可在荧光显微镜下检测到较好的信号。结论：本研究制备的直接标记泛着丝粒探针,可用于FISH快速检测辐射诱导的染色体双着丝粒体、着丝粒环和易位畸变。     

基于代谢组学方法筛选大鼠血浆辐射敏感代谢物

目的:筛选大鼠血浆辐射敏感代谢物并探索其代谢通路,为辐射损伤生物标志物研究提供科学依据。方法:用60Coγ射线对20只大鼠进行全身照射,照射剂量分别为0、1、3、5 Gy,剂量率为1 Gy/min,采用基于液相色谱质谱串联平台的非靶向代谢组学方法,检测大鼠受照7 d后血浆中代谢物的变化。结果:大鼠受照后,筛选出血浆中11个辐射敏感代谢物,主要涉及牛磺酸和亚牛磺酸代谢、烟酸和烟酰胺代谢、初级胆汁酸生物合成等代谢通路。十八二烯酰基肉碱、十八一烯酰基肉碱、十六酰基肉碱、牛磺酸、L-犬尿氨酸及胞嘧啶随受照剂量的上升而显著下降(P<0.05),具有明显的剂量-效应关系。结论:大鼠受到γ射线照射后,血浆中代谢物水平发生显著变化,有6个代谢物具备成为辐射生物剂量计的基础条件。     

褪黑素通过调控p53介导的细胞早衰抑制紫外线诱导的HaCaT细胞中黑色素合成

目的 探索褪黑素对中波紫外线（UVB）引起人永生化表皮角质形成（HaCaT）细胞黑色素合成的影响及机制,为褪黑素的皮肤保护机制提供理论基础。方法 80 mJ/cm² UVB照射10^-5 mol/L褪黑素预处理的HaCaT细胞,照后48和72 h,利用NaOH法检测细胞黑色素水平。照后72 h,利用β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测早衰阳性细胞并分析其比例,蛋白免疫印迹法检测衰老相关蛋白p53和酪氨酸酶（TYR）的表达变化。80 mJ/cm² UVB照射分别经毛细血管扩张性共济失调突变激酶/毛细血管扩张性共济失调Rad3相关激酶（ATM/ATR）抑制剂、p53抑制剂和褪黑素预处理的HaCaT细胞,照后72 h检测细胞早衰阳性比例和黑色素水平变化。结果 褪黑素抑制UVB诱导的黑色素水平增加（t=56.65、13.39,P<0.05）,同时抑制UVB诱导的TYR表达增加（t=16.46,P<0.05）;并可缓解UVB诱导的HaCaT细胞早衰（t=6.37,P<0.05）,抑制UVB诱导的p53表达增加（t=19.08,P<0.05）;ATM/ATR抑制剂、p53抑制剂和褪黑素预处理均可抑制UVB诱导的HaCaT细胞黑色素水平升高（t=13.88、7.86、8.96,P<0.05）。结论 褪黑素通过调控p53介导的细胞早衰,抑制UVB诱导的HaCaT细胞黑色素水平增加。     

60Coγ射线诱导人外周血淋巴细胞核质桥的剂量-效应关系研究

目的 确定核质桥判定标准,建立 ⁶⁰Co γ 射线诱导正常人外周血淋巴细胞中核质桥（NPB）的剂量-效应曲线。 方法 用 ⁶⁰Co γ 射线照射3名健康男性离体外周血,照射剂量分别为0、1、2、3、4、5和6 Gy,剂量率为1 Gy/min,采用胞质分裂阻滞微核（CBMN）法进行细胞培养、收获、制片、染色。在光学显微镜下分析双核细胞中NPB及微核（MN）。 结果 在0~6 Gy ⁶⁰Co γ 射线照射后,人外周血双核淋巴细胞中的NPB符合泊松分布,且NPB频率随吸收剂量增加而增加（H=19.51,P<0.01）,拟合回归方程为线性平方模式y=（1.39×10^-3）x² + （4.94×10^-3）x （R²=0.981,P < 0.01）。 结论 成功建立 0~6 Gy ⁶⁰Co γ 射线诱导正常人外周血淋巴细胞中NPB的剂量-效应曲线。