糖皮质激素受体阻断导致巨噬细胞易感化及其机制初探

目的 :观察糖皮质激素受体 (GR)阻断大鼠的腹腔巨噬细胞 (PM)是否处于易感化状态 ,并利用小鼠巨噬细胞样细胞系RAW2 6 4 7研究GR和糖皮质激素 (GC)在巨噬细胞易感化过程中的作用 ,进而从胞液游离钙离子 ([Ca2 + ]i)和蛋白激酶C(PKC)两方面探讨巨噬细胞易感化时细胞内重要信号转导分子的变化。方法 :以GR的竞争性拮抗剂RU4 86复制大鼠GR阻断模型 ,用Griess试剂法检测一氧化氮 (NO) ,Westernblot检测PKCα,荧光显微镜成像系统检测单细胞 [Ca2 + ]i。此外 ,由于我们过去的实验表明RU4 86注射能导致血浆GC反馈性升高 ,因此我们采…     

糖皮质激素对糖皮质激素受体α和β mRNA表达的调节作用

目的：研究糖皮质激素对人类糖皮质激素受体α和β mRNA表达的调节作用。方法：采用定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测受体mRNA。结果：人骨肉瘤细胞系、卵巢癌细胞系及外周血白细胞中除有糖皮质激素受体α mRNA表达外，还有糖皮质激素受体β mRNA的表达；糖皮质激素对糖皮质受体α和β mRNA的表达均具有明显的降调作用，且具有剂量依赖性和时间依赖性特点。结论：糖皮质激素受体β在人类多种组织细胞中均有表达，而且其表达受糖皮质激素的调节。     

利用载体介导的RNA干扰技术抑制人骨肉瘤细胞HOS-8603内维生素D3受体的表达及功能

目的:构建由载体介导的抑制人维生素D3受体(VDR)表达的RNA干扰载体,并在人骨肉瘤细胞中初步研究其对VDR表达及功能的影响.方法:通过在线筛选设计了两段针对人VDR的RNAi序列,并与载体pSilencer-2.1-U6连接,获得了表达载体pSilencer-2.1-U6-VDR1与pSilencer-2.1-U6-VDR2.利用脂质体转染法分别转入人骨肉瘤细胞系HOS-8603细胞中,通过Western 印迹法检测其对内源性VDR蛋白表达、对1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]激活PKC作用的影响,利用细胞计数和MTT的方法检测其对1,25(OH)2D3抑制HOS-8603细胞增殖作用的影响.结果:在分别转染pSilencer-2.1-U6-VDR1/2的HOS-8603细胞中,与对照细胞比较,内源性VDR蛋白的表达、1,25(OH)2D3对细胞的增殖抑制作用以及1,25(OH)2D3快速诱导PKC磷酸化的作用均有显著降低.结论:构建的表达载体pSilencer 2.1-U6-VDR1与pSilencer 2.1-U6-VDR2均能在细胞水平显著抑制内源性VDR基因的表达,并能有效阻断一些由VDR介导的1,25(OH)2D3生物学作用,为进一步研究VDR与维生素D3的功能提供了一个有用工具.     

地塞米松对人肝癌细胞系酪氨酸转氨酶mRNA表达的影响

目的:观察地塞米松 (Dex) 对人肝癌细胞系(SMMC-772 1细胞)酪氨酸转氨酶mRNA表达的影响.方法:采用定量逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测酪氨酸转氨酶mRNA.结果:Dex能够诱导S MM C-7721细胞酪氨酸转氨酶mRNA的表达,且具有剂量依赖性和时间依赖性特点,但诱导倍数偏低.结论:SMMC-7721细胞酪氨酸转氨酶基因的调控序列或GR的信号转导通路存在异常.     

ERK通路的激活状态对糖皮质激素抑制人乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖状态的影响

目的 观察糖皮质激素对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中丝裂原激活的蛋白激酶家族成员ERK1／2活性的影响。方法 Western Blot检测ERK1／2活性。结果 Dex(10^-7M)处理5min，出现ERK1和ERK2磷酸化程度的降低，且两者呈同步变化，最大作用出现在加入激素30min，ERK1和ERK2磷酸化分别被抑制42％和53％，4h恢复至处理前水平；同时GC抑制：ERK活性的作用具有浓度抑制性，GR拮抗剂不能逆转这些效应。应用ERK1／2上游激酶MEK1／2的抑制剂PD98059与Dex合用处理细胞，可以增强两者单独应用时的抑制效应。结论 Dex能够以不依赖GR的方式，快速抑制ERK活性，可能参与抑制细胞增殖的过程。     

地塞米松对PMA诱导CD18表达的抑制作用

目的:研究GC抑制CD18表达的作用。方法:选用PMA刺激下的U937细胞为实验模型,运用定量RT-PCR、Northern杂交检测U937细胞CD18 mRNA的表达水平。结果:Dex能明显抑制PMA诱导CD18 mRNA的表达,这种抑制作用具有明显的剂量依赖性,GR的拮抗剂RU38486能够明显扭转Dex的抑制作用。结论:Dex通过GR介导能在转录水平上抑制PMA诱导的CD18 mRNA的表达,该作用可能与糖皮质激素受体(GR)在转录水平拮抗NF-κB有关。     

稳定转染维生素D受体反义cDNA的人骨肉瘤细胞系的建立

目的：建立稳定转染维生素D受体（VDR）反义cDNA的人骨肉瘤细胞系,方法：构建VDR反义cDNA的真核表达载体,用Lipofectamine法转染人骨肉瘤细胞系HOS－8603,经G418筛选后获得稳定转染细胞株,并用免疫组化技术检测内源性VDR蛋白折表达情况,采用瞬时转染报告基因技术从靶基因水平检测VDRas3细胞内VDR的转录激活功能,结果“筛选出6株抗G418细胞克隆（VDRas1-6),其中VDRas3细胞内源性VDR蛋白的表达量低于对照细胞,激素作用72h后,对照组细胞的报告基因氯霉素乙酰转移酶（CAT）转录活性增加约3．5倍,而VDRas3细胞CAT的转录基本不受激素诱导。结论：获得了稳定转染VDR反义cDNA的细胞系,为今后进一步研究1,25（OH）2D3及其类似物调节细胞增殖分化的分子机制提供了一个良的细胞模型。     

糖尿病并发抑郁症的研究进展

抑郁症在糖尿病人群中的发病率显著高于非糖尿病人群,是糖尿病的重要并发症之一。抑郁与下丘脑-垂体-肾上腺素轴的活动相关,可导致升糖激素增多,胰岛素分泌水平降低。近年来,糖尿病并发抑郁症的潜在机制研究愈来愈受到医学界的重视。高血糖氧化应激状态下产生的过多自由基,以及与之伴随的高分子氧化损伤可能在糖尿病诱导抑郁的发生过程中起到重要作用。同时,炎症与线粒体的功能损伤可能也参与了抑郁在糖尿病患者的发生发展过程。糖尿病引发的神经系统的改变,包括神经递质的改变,重要区域的结构变化,神经细胞凋亡的发生等,都可能是其抑郁症高发的原因。本文主要阐述糖尿病并发抑郁症的研究进展。     

创伤患者p38MAPK活化和炎症因子表达的变化

目的 探讨不同创伤程度患者体内p38MAPK活化和炎症因子表达的变化及其意义.方法 不同创伤程度患者在创伤后6 h内和第1、3和7天分别采集外周血,采用蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测白细胞中p38MAPK的活化(磷酸化)水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血液中TNFα和IL-6水平.结果 创伤6 h内患者血液中p38MAPK的活化水平与正常人比较显著增加且达到高峰(P<0.01),并持续活化至第7天(P<0.05);创伤患者体内的TNFα和IL-6水平也显著增强(P<0.05),且都在创伤后第1天达到高峰(P<0.01),随后逐渐下降,在创伤后第7天逐渐恢复至正常水平(P>0.05);p38MAPK的活化程度及TNFα、IL-6水平都随创伤程度的增加而升高(P<0.05),p38MAPK的活化水平与TNFα、IL-6水平呈正相关(P<0.05),TNFα水平与IL-6水平也呈正相关(P<0.05).结论 创伤患者体内的p38MAPK信号通路被激活,p38MAPK活化引起炎症因子表达升高,表明p38MAPK信号通路在创伤后的炎症反应中发挥重要作用.