腺病毒E1A蛋白对大鼠肺泡上皮细胞及人肺腺癌细胞凋亡的影响

目的:探讨腺病毒E1A蛋白对大鼠肺泡上皮细胞(CCL149)及人肺腺癌细胞(A549)在致凋亡因素TNF-α诱导下细胞凋亡影响。方法:将含腺病毒E1A基因完全编码区的Pneo-E1A质粒分别转染CCL149、A549细胞,用G418筛选抗性细胞克隆,用RT-PCR、免疫组化方法对单个细胞克隆进行筛选鉴定;将经鉴定确定的稳定转染E1A基因的阳性细胞克隆、对照质粒转染细胞克隆用致凋亡因素TNF-α刺激,用Hoechest荧光染色分析及流式细胞仪结合膜联蛋白V-FITC标记法检测细胞凋亡情况。结果:稳定转染E1A基因的CCL149细胞(C-E1A+)在30μg/LTNF-α作用前、后细胞的凋亡率分别为(2.63±0.8)%和(25.38±0.9)%,明显高于对照质粒转染细胞(C-E1A-)作用前的(0.62±0.3)%和作用后的(6.08±0.2)%,两组相比差别有统计学意义(P0.01);稳定转染E1A基因的A549细胞(A-E1A+)在30μg/LTNF-α作用前、后细胞的凋亡率分别为(5.12±0.5)%和(19.82±1.6)%,明显高于对照质粒转染细胞(A-E1A-)作用前的(2.02±0.7)%和作用后的(9.15±1.2)%,两组相比差别有统计学意义(P0.01)。结论:E1A蛋白能够增加细胞对致凋亡因素的敏感性,上调TNF-α诱导下的细胞凋亡。     

4-羟基壬烯醛在疾病发生机制方面的研究进展

氧化应激是许多疾病的基本病理机制之一。越来越多的研究表明:氧化应激过程中产生的一些脂质过氧化产物是引起氧化性损伤的主要原因。4-羟基壬烯醛是细胞脂质过氧化反应醛基产物中最具代表性的物质,其通过与组织细胞内的蛋白、核酸、酶类等物质相互作用,引发一系列组织病理损伤。在疾病的发生、发展中发挥重要作用。     

缺氧影响erbB癌基因在大鼠肺内的表达

缺氧性肺动脉高压的确切发病机理目前仍不甚清楚。本文以原位杂交技术观察了癌基因erbB在缺氧大鼠肺内的表达情况，结果发现缺氧7天后，大鼠肺组织内erbBmRNA表达明显增加（P＜0．001），并一直持续至缺氧21天后，提示erbB癌基因可能与缺氧引起的肺血管结构的改建过程有关。     

醛酮类物质染毒对小鼠肺脏抗氧化能力的影响

目的:通过模拟生物燃料烟气中主要醛酮类物质染毒小鼠观察其对小鼠肺脏抗氧化能力的影响.方法:选用小鼠40只,随机分为2组:实验组和对照组,每组20只,雌雄各半.取甲醛(0.0663 mg)、乙醛(0.1181 mg)、苯甲醛(0. 147 mg)、丙酮(0. 609 mg)加水至1 000 ml,置于超声波雾化器中向已放入20只小鼠的染毒柜喷雾,每天喷雾1次,每次5 h,连续13 d.对照组放于另一柜中,除喷雾蒸馏水外,其它同实验组.以化学分析方法检测小鼠外周血和肺组织中丙二醛(MDA)含量、超氧歧化酶(SOD)与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力.结果:染毒小鼠肺脏MDA含量明显高于对照组[(17.88±2.08)nmol/mgprot vs (8.00±2.89) nmol/mgprot,P《0.001)]; SOD与GSH-Px活力明显降低[(24.08±2.04)NU/mgprot vs (38.77±8.95) NU/mgprot;(28.75±4.82) U/mgprot vs (34.76±1.43) U/mgprot],P《0.001),染毒小鼠外周血中MDA含量变化不明显[(6.06±1.91) nmol/mgprot vs (5.62±2.54) nmol/mgprot,P》0.05],但SOD与GSH-Px活力明显低于对照组[(81.78±8.83) NU/mgprot vs(108.63±14.13) NU/mgprot;(50.94±3.20) U/mgprot vs(60.46±4.14) U/mgprot,P《0.001].结论:模拟生物燃料烟气中主要醛酮类物质染毒小鼠可影响肺脏的抗氧化能力.     

E-box元件对大鼠γ-GCS催化亚单位基因调控作用的组织特异性研究

目的:探讨大鼠γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)催化亚单位 (GCLC)基因启动子 (-745～-705) 区段E-box元件对其转录调控是否存在组织细胞差异性.方法:分别将GCLC 5'端上游序列驱动的荧光素酶报道基因载体GCLC-Luc、E-box缺失的delE-box-GCLC-Luc及pGL3-enhancer空载体瞬时转染大鼠不同组织来源的细胞,测得荧光素酶活性;并经蛋白定量及pSV-β-半乳糖苷酶的活性测定,获得校正荧光素酶活性值,通过比较校正荧光素酶活性值差异间接判断E-box元件对GCLC转录活性的影响.结果:在大鼠心肌细胞H9C2(2-1),转染delE-box-GCLC-Luc组荧光素酶活性值较转染GCLC-Luc组明显升高(P＜0.001),说明E-box能使其GCLC转录活性下调;在大鼠肾小球细胞HBZY-1,转染delE-box-GCLC-Luc组荧光素酶活性值较GCLC-Luc组明显降低(P＜0.02),提示E-box具有上调该细胞GCLC转录活性的作用;而在大鼠神经胶质瘤细胞C6和小肠隐窝上皮细胞IEC-6,组间差异无统计学意义(P＞0.05),提示 E-box对其GCLC转录活性无影响.结论: E-box元件能组织特异性的调控大鼠GCLC基因的转录,该元件可能是决定GCLC基因存在组织差异性表达的重要顺式作用元件.     

神经肽Y1受体激动药诱导大鼠心肌细胞肥大的研究

 目的 探讨神经肽Y1受体激动药[Leu31,Pro34]NPY在诱导心肌细胞肥大中的作用.方法 用不同浓度[Leu31,Pro34]NPY刺激原代培养心肌细胞,采用放射性核素3H-leu掺入法检测培养心肌细胞蛋白质合成速率.应用荧光定量PCR方法检测[Leu31,Pro34]NPY对培养心肌细胞肥大相关基因ANF、β-MHC mRNA表达的影响.结果 [Leu31,Pro34]NPY(10-9 mol/L、10-8 mol/L、10-7 mol/L)作用心肌细胞24 h后可明显增加心肌细胞3H-leu的掺入量 (P＜0.01),并可诱导心肌细胞β-MHC表达增加(P＜0.01),对ANF表达的影响不明显.结论 神经肽Y1受体激动药[Leu31,Pro34]NPY可加快细胞蛋白质合成速率、促进心肌细胞β-MHC表达,直接诱导心肌细胞的肥大.     

肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）诱导肺癌细胞凋亡的研究

目的 研究肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）对肺癌细胞株（A549）的致凋亡作用及其作用机理,为临床应用TIL治疗肺癌提供依据.方法 从肺癌病人胸水中用淋巴细胞分离液分离提取出TIL细胞,在含1000U/mlIL-2的完全培养基中培养20天后,将TIL细胞与靶细胞（肺癌细胞株）共同培养24小时,将培养细胞制成细胞涂片,经福尔马林固定,用原位末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导的脱氧三磷酸嘧啶（duTP）末端标记法（TUNEL）原位的方法进行肺癌凋亡细胞的标记.结果 肺癌肿瘤细胞凋亡指数（%）：经TIL作用组的凋亡指数为8.56±0.84,对照组凋亡指数为2.10±0.86,两组之间差别有非常显著性（p<0.01）.结论 TIL细胞诱导肺癌细胞的凋亡可能是TIL细胞对肺癌细胞杀伤作用的机理之一.     

茶碱治疗慢性阻塞性肺疾病的随机双盲平行对照研究

目的观察长期口服小剂量缓释茶碱治疗稳定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)的疗效和安全性。方法采用随机双盲安慰剂平行对照研究方法,对2002至2003年广东韶关农村地区流行调查中筛选出符合入选标准的110例稳定期 COPD 患者进行简单随机分组,分别予缓释茶碱(每次100 mg,每天2次)和安慰剂口服治疗1年。评估肺功能、慢性阻塞性肺疾病急性发作(AECOPD)情况、生活质量、气促分数、治疗满意度和不良反应等。疗效比较采用优势检验。结果 85例(缓释茶碱组42例,对照组43例)完成1年随访。目标治疗(ITT)人群分析结果显示,缓释茶碱组 AECOPD总次数[(0.8±1.2)次/年]较安慰剂组[(1.7±2.6)次/年]减少(Z=-1.674,P=0.047),AECOPD总时间[(4.6±7.9)d]较安慰剂组[(12.5±22.8)d]减少(Z=-1.699,P=0.045);中度及以上AECOPD 次数[(0.4±1.0)次/年]较安慰剂组[(1.0±1.8)次/年]显著减少(Z=-2.136,P=0.017),扩张前的第一秒用力呼气容积(FEV_1)递减值[(0.006±0.180)L]较安慰剂组[(-0.503±0.169)L]显著减少(t=1.789,P=0.038),疗效总满意度(其中对疗效很满意的患者16例)较安慰剂组(对疗效很满意患者3例)高(Z=-2.198,P=0.014),首次 AECOPD 时间(中位数表示,365 d)较安慰剂组(276 d)延迟(X~2=3.880,P=0.049),但两组支气管扩张试验后的 FEV_1递减值(t=-0.012,P=0.495)和不良反应(P=0.076)比较差异均无统计学意义。符合方案(PP)人群分析结果显示类似的结果,缓释茶碱组的生活质量[(-28±20)分]较安慰剂组[(-20±23)分]显著改善(F=2.893,P=0.047)。结论小剂量缓释茶碱长期治疗稳定期 COPD 安全有效。     

腺病毒感染对生物燃料烟雾所致豚鼠肺部炎症反应的作用

目的 探讨腺病毒感染在生物燃料烟雾所致的豚鼠肺部炎症反应中的作用.方法 将46只雌性白化豚鼠用随机数字表法分为感染组(26只)和假感染组(20只),感染组鼻腔接种野生型5型腺病毒(Ad5),假感染组接种PBS作为对照.22 d后再用随机数字表法将每组各20只豚鼠再分为暴露于木材锯末和谷壳烟雾组与暴露于新鲜空气的对照组.21 d后检测豚鼠肺组织病理和BALF中白细胞介素(IL)-8、IL-6和细胞黏附分子-1(CAM-1)的含量.所有数据均以x±s表示,组间比较采用单因素方差分析.结果 生物燃料烟雾暴露和腺病毒感染均能使豚鼠BALF中白细胞总数明显增高[(37.1±5.5)×106/L和(16.8±2.3)×106/L],与对照组[(11.2±2.5)×106/L]比较差异有统计学意义(F值分别为208.947和22.687,均P＜0.01),且有交互作用.生物燃料烟雾暴露的豚鼠BALF中IL-8、IL-6和CAM-1浓度增高[(0.38±0.06)、(O.188±0.021)和(6.5±1.6) mg/kg],与对照组[(O.30±0.05)、(0.125±0.022)和(4.8±0.9) mg/kg]比较差异均有统计学意义(F值为13.525～69.021,均P＜0.01),腺病毒感染及豚鼠BALF中IL-8及CAM-1浓度增高[(0.37±0.05)和(8.2±2.1) mg/kg],差异均有统计学意义(,值分别为11.964和57.162,均P＜0.01),对IL-6[(O.126±0.023) mg/kg]无明显影响(F=0.667,P＞0.05).腺病毒感染及生物燃料烟雾暴露对豚鼠BALF中IL-8、CAM-1浓度增加有协同作用(F值分别为5.153和56.573,P＜0.05和P＜0.01).结论 木材锯末与谷壳烟雾可导致豚鼠肺部炎症反应,出现支气管炎及肺气肿样改变,腺病毒感染可加重生物燃料烟雾引起的豚鼠肺组织的炎症反应.     

香烟对气道上皮细胞表达4-羟基壬烯醛的影响以及银杏内酯B的干预作用

目的探讨香烟烟雾浓缩物(CSC)对人类支气管上皮细胞系(16-HBE)表达4-羟基壬烯醛(4-HNE)的影响以及银杏内酯 B 的干预作用;并观察4-HNE 对中性粒细胞的趋化作用。方法采用免疫细胞化学和 Western blot 方法。(1)不同浓度(1、10μg/ml CSC)CSC 刺激16-HBE 细胞4h后4-HNE 加成蛋白的表达水平,设正常对照组(无血清培养基代替 CSC);(2)10μg/ml CSC 刺激不同时间(1、4、8、12、24、30h)后,16-HBE 中4-HNE 加成蛋白的水平,设正常对照组(无血清培养基代替 CSC);(3)用100μmol/L 银杏内酯 B 孵育16-HBE 后,CSC 刺激1、4、8、12h,检测4-HNE 加成蛋白表达的变化,设正常对照组(无银杏内酯 B 孵育);(4)以趋化实验检测0.1、1、10μmol/L 4-HNE 对兔中性粒细胞的趋化作用。结果(1)1、10μg/ml CSC 刺激4h 后,16-HBE 细胞表达4-HNE 加成蛋白水平(免疫化学为2.12±0.38、2.69±0.42,Western blot 为100.2±6.3、72.3±6.1)均较正常对照组显著增加(免疫化学为1.25±0.37,Western blot 为122.4±4.2,P 均<0.01)。(2)10μg/ml CSC 刺激1、4、8、12、24、30h后,16-HBE 细胞表达4-HNE 加成蛋白(免疫化学为2.67±0.46、2.69±0.42、2.71±0.48、2.72±0.56、2.93±0.11、2.92±0.20,Western blot 为73.2±8.3,72.3±6.4,72.6±9.2,71.5±8.1,54.4±3.6,56.7±4.4)较正常对照组(免疫化学为1.25±0.35,Western blot 为122.4±4.1)显著增加(P 均<0.01),刺激24h 和30h,细胞内4-HNE 加成蛋白较其他时间点增加。(3)50、100μmol/L 银杏内酯 B 孵育后再以 CSC 刺激时,16-HBE 细胞内4-HNE 加成蛋白表达水平(Westernblot 为84.6±4.4、101.2±4.4)明显低于未以内酯 B 孵育组,但高于正常对照组(Western blot 为72.5±6.4,P 均<0.01)。(4)0.1、1、10μmol/L 4-HNE 对兔中性粒细胞趋化数目(92±12、104±16、131±12)较正常对照组(72±12)均显著增加,10 μmol/L 4-HNE 趋化数目显著高于0.1和1μmol/L4-HNE,差异均有统计学意义(P 均<0.01)。结论香烟所引起肺中性粒细胞趋化的结果可能与其促使4-HNE 产生增加有关,银杏内酯 B 可以抑制 CSC 对4-HNE 的诱生。