表达超抗原葡萄球菌肠毒素A的喉癌细胞的建立

目的:构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因真核表达载体并建立其稳定表达的喉癌细胞系。方法:根据标准葡萄球菌菌株ATCC13565中SEA基因序列,人工合成其编码区序列,然后亚克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP,构建pSEA-IRES-EGFP重组质粒,再将重组质粒转染至喉癌Hep-2细胞,G418筛选获得抗性单克隆,用RT-PCR和ELISA法鉴定SEA在喉癌细胞中的表达。结果:合成的SEA基因亚克隆至真核表达载体pires-EGFP后,测序证实克隆的SEA序列与GenBank中标准葡萄球菌菌株ATCC13565的编码区序列完全一致;重组质粒转染喉癌Hep-2细胞后,经筛选2周获得抗性单克隆,挑选单克隆,RT-PCR扩增获得特异的基因片段。经ELISA分析,发现细胞培养上清液中SEA蛋白的含量达pg级水平。结论:成功构建了超抗原SEA基因的重组真核表达载体,转染至喉癌Hep-2细胞后,SEA基因能够在细胞表达并持续分泌SEA蛋白。     

芳香烃受体核转位蛋白-991G﹥A多态性与慢性阻塞性肺疾病易感性研究

目的探讨芳香烃受体核转位蛋白(Aryl hydrocarbon receptor nucleartranslocator,ARNT)基因-991G﹥A多态性与慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)发病的关联。方法采用PCR-RFLP技术检测223例COPD患者和223例健康对照ARNT基因-991G﹥A基因型,用SAS9.13软件进行非条件Logistic回归分析该位点变异与COPD发病的关联。结果 ARNT基因-991G﹥A基因型频率和等位基因频率在COPD组和对照组间分布差异有统计学意义(P值分别为0.001,0.002);以携带GG基因型个体为参照,携带A(AG+AA)基因型个体发生COPD的危险性是GG基因型携带者的2.01倍(校正OR=2.01;95%CI=1.30～3.12;P﹤0.001);进一步分层分析显示,-991G﹥A基因型和等位基因分布频率差异在非吸烟者中更显著(P值皆为0.005)。结论 ARNT基因-991G﹥A位点多态性与COPD易感性有关,携带A基因型能增加COPD的发病风险。     

慢性阻塞性肺疾病防治研讨专题会议在北京召开

慢性阻塞性肺疾病 (ＣＯＰＤ)是世界范围内严重危害民众身体健康的常见病。在美国ＣＯＰＤ已成为第四大死因 ,预期至2 0 2 0年它将上升为第三大主要死因 ,因ＣＯＰＤ住院者达到全部住院人数的 13%。 1993年美国因为ＣＯＰＤ所造成的直接间接经济损失高达 2 40亿美元。世界卫生组织的资料认为 ,亚太地区ＣＯＰＤ的患病率约为 3 9% ,其中菲律宾为 6 3% ,新加坡为3 5 %。我国北部及中部地区 15岁以上人群ＣＯＰＤ的患病率为 3 0 % ,北京地区高达 4 5 % ,在全国 15岁及以上人群中ＣＯＰＤ患者估计约有 2 5 0 0万 ,其患病率之高是十分惊人的。我…     

尼古丁对大鼠气道平滑肌细胞的促增殖作用

目的：探讨尼古丁对大鼠气道平滑肌细胞增殖的作用。方法（1）不同浓度的尼古丁作用大鼠气道平滑肌细胞24、48 h,应用细胞计数法检测大鼠气道平滑肌细胞的增殖变化;（2）不同浓度的尼古丁作用大鼠气道平滑肌细胞24 h,应用流式细胞术检测细胞周期变化;（3）1×10-5 mol／L尼古丁分别作用大鼠气道平滑肌细胞12、16、20、24 h,Western blot检测Cyclin D1的表达水平。结果（1）尼古丁组细胞计数均明显高于对照组,且尼古丁的促增殖作用与浓度和作用时间具有相关性。1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7 mol／L尼古丁作用24 h,以对照组细胞计数值为1,则尼古丁组细胞计数分别为1.38、1.41、1.27、1.30,差异均有统计学意义（ P＜0.05）;尼古丁作用48 h,尼古丁组细胞计数分别为1.53、1.54、1.32、1.37,差异均有统计学意义（P＜0.05）。（2）各浓度尼古丁组S期的细胞分数均比对照组明显升高,差异有统计学意义（ P＜0.05）。以对照组S期的细胞分数值为1,1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4 mol／L尼古丁作用24 h,尼古丁组S期的细胞分数分别为1.53、2.35、3.83、2.86,差异均有统计学意义（P＜0.05）。（3）1×10-5mol／L尼古丁作用细胞12、16、20、24 h后,在12、20 h大鼠气道平滑肌细胞的Cyclin D1表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论尼古丁能够通过上调Cyclin D1促进大鼠气道平滑肌细胞的增殖。     

C-erbB-2、MMP2在乳腺癌中的表达及相互关系探讨

目的 :探讨癌蛋白 (C erbB 2 )和基质金属蛋白酶 (MMP2 )在乳腺浸润性导管癌中的表达及相互关系。方法 :应用免疫组织化学S -P法对 5 6例乳腺浸润性导管癌的C erbB 2和MMP2的阳性表达进行检测分析。结果 :5 6例中有 37例 (6 6 % )C erbB 2过表达 ,39例 (6 9.6 % )MMP2过表达 ,C erbB 2和MMP2同时阳性表达者 32例(5 7 1% )。两者阳性率均随组织学分级升高而上升 ,但各级间未见明显差异 (P >0 .0 5 )。在转移组中 ,88.9% (2 4 /2 7)的病例C erbB 2过表达 ,85 .2 % (2 3/ 2 7)MMP2过表达 ,两者的过表达与转移呈正相关关系 (PC erbB 2 =0 .0 0 1,PMMP2 =0 .0 15 )。C erbB 2和MMP2阳性配对分析表明 ,两者间阳性表达互为正相关 (P <0 .0 0 5 ,r=0 .5 1)。结论 :在乳腺浸润性导管癌中 ,C erbB 2和MMP2的过表达提示转移增加 ,可以作为乳腺癌的预后指标。     

AKT 信号转导途径在尼古丁促进大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的：探讨AKT信号途径在尼古丁诱导大鼠气道平滑肌细胞增殖中发挥的作用。方法（1） Western blot检测不同浓度尼古丁作用原代培养的大鼠气道平滑肌细胞不同时间段,AKT／磷酸化AKT、GSK3β／磷酸化GSK3β在气道平滑肌细胞上的表达水平;（2）细胞分析计数仪检测AKT抑制剂和GSK3β抑制剂对尼古丁促进大鼠气道平滑肌细胞增殖活性的影响。实验分组：对照组、尼古丁单独作用组、AKT抑制剂LY294002组、AKT抑制剂LY294002＋尼古丁组、GSK3β抑制剂SB216763组、GSK3β抑制剂SB216763＋尼古丁组;（3） EDU摻入法测定AKT抑制剂和GSK3β抑制剂对尼古丁处理大鼠气道平滑肌细胞DNA复制活性的影响,实验分组同上。对照组应用1％胎牛血清培养基,各抑制剂和尼古丁应用1％胎牛血清培养基配制,分别在尼古丁加入前30 min应用。结果（1）大鼠气道平滑肌细胞上有AKT和GSK3β的表达;尼古丁引起AKT和GSK3β的快速磷酸化,且尼古丁促进AKT和GSK3β的磷酸化作用具有时间依赖性;（2）细胞计数法显示,AKT抑制剂与尼古丁联合组细胞计数明显低于尼古丁单独作用组,差异有统计学意义（P＜0．05）;（3）EDU摻入法测定显示,AKT抑制剂与尼古丁联合组细胞DNA复制水平明显下降,与尼古丁单独作用组相比,差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论尼古丁促进大鼠气道平滑肌细胞的增殖作用依赖AKT／GSK3β信号途径。     

空气净化器处理后牛乳β乳球蛋白的免疫反应性研究

目的 通过检测牛乳β乳球蛋白免疫反应性,分析其空间结构的变化,以探讨过敏原免疫反应性下降的可能机制.方法 分别取牛乳β乳球蛋白置于空气净化器(接受1、12、24 h的作用,实验组)、与实验组相同温度和湿度的环境(12、24 h后取样,对照组)、4 ℃冰箱(正常组)中.用ELISA法检测牛乳β乳球蛋白免疫反应性,采用圆二色谱仪和荧光光谱仪检测空气净化器处理前后的牛乳β乳球蛋白,分析牛乳β乳球蛋白空间结构的变化.结果 实验组(作用24 h)的光密度值接近0.88,相对于正常组的光密度值1.27和对照组的光密度值1.25,降低了约30%.牛乳β-乳球蛋白在空气净化器作用前后,正常组和对照组的圆二色谱光谱曲线没有发生明显的变化,而实验组处理12 h和处理24 h负峰值与正常组相比有明显的升高,并且呈现一定的递增趋势.实验组在280 nm和295 nm处的荧光强度明显强于正常组和对照组,且随着处理时间的增加强度越强.结论 经过空气净化器处理之后的牛乳β乳球蛋白免疫反应性有所降低,圆二色谱光谱实验和荧光光谱实验结果表明其空间结构发生了变化,空间结构变化可能是使其免疫反应性改变的原因.     

吸入异丙托溴胺对慢性阻塞性肺疾病患者运动肺功能的影响

目的 评价吸入异丙托溴胺(ipratropium bromide,IPB)是否改善慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者的静态肺功能,运动通气功能和运动耐量.方法 随机抽取稳定期COPD患者12例,吸入IPB溶液2 mg,吸人前后分别进行静态肺功能和运动肺功能测定.结果 吸入IPB后,COPD患者最大运动功率(Wmax)、最大耗氧量(VO2max)、最大运动时每分钟通气量(Vemax)和比潮气量(Vtmax/IC),较吸人前均有显著增加;死腔通气(VD/VT)和二氧化碳通气当量(Vemax/VCO2max)无明显改变.Vtmax/IC的变化(⊿Vtmax/IC)与VO2max的变化(⊿VO2max)有显著相关性(r=0.598,P＜0.05);⊿Vtmax/IC与最大运动功率的变化(⊿Wmax)也存在显著相关性(r=0.743,P＜0.05).结论 吸入IPB能够增加COPD患者的运动耐量,COPD患者吸入IPB后,⊿Vtmax/IC可能是运动耐量增加机制中的一个重要环节.     

支气管肺泡冲洗液中β2微球蛋白检测对肺癌诊断价值的探讨

用放射免疫分析法检测了33例原发性支气管肺癌和28例肺良性疾病患者支气管肺泡冲洗液(BALF)中β_2-微球蛋白(β_2-MG)的含量。对10例肺癌和6例炎症病人同时冲洗了对侧健肺,另外检测了13例肺癌患者血清中的β_2-MG。结果表明,BALF中β_2-MG检测有助于肺癌的诊断,尤其对肺癌早期及周围型肺癌的诊断有不可低估的作用,其意义优于血中β_2-MG的检测。     

广州荔湾区COPD流行病学调查分析

目的:了解广州慢性阻塞性肺疾病(COPD)的发病情况及相关危险因素。为COPD的社区防治提供依据。方法:采用统一的流行病学调查表格,以整群随机抽样方法,调查年龄在40岁以上的人群,并进行肺通气功能检测。结果:(1)调查1000例,资料完整者894例,其中男328例,女566例,平均年龄59.49岁。(2)COPD总患病率为7.49％,其中男性患病率高于女性(12.80％ vs 4.42％,P<0.001);年龄越大,患病率越高。(3)COPD患者有咳嗽、咯痰、喘息、呼吸困难或活动时气短之一的占62.7％,部分病人无明显不适;只有极少数COPD病人以前被诊断过COPD和接受肺功能检查;49.3％的患者认为自己的健康状况影响日常生活和工作。(4)危险因素调查显示:70.1％的COPD病人主动吸烟,14.5％的吸烟者患COPD。结论:COPD的患病率很高,一部分没有明显不适的COPD病人易被漏诊。因此,应该早期预防和发现COPD病人。