白藜芦醇对中波紫外线致人角质形成细胞损伤的防护作用

目的:研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对中波紫外线(UVB)照射体外培养的人永生化角质形成细胞(HaCaT)的损伤的保护作用。方法:体外培养HaCaT细胞,MTT法检测不同浓度Res对HaCaT细胞增殖活性的影响。UVB照射及Res处理24 h后,采用RT-PCR方法测定细胞中MMP-1,MMP-9和TIMP-1mRNA的相对含量。结果:UVB 30 mJ.cm-2照射后,HaCaT细胞产生的MMP-9 mRNA含量显著增加(P<0.05),TIMP-1 mRNA明显减少(P<0.05);UVB 90 mJ.cm-2照射HaCaT细胞后其MMP-1 mRNA增加(P<0.05)。与UVB照射组相比较,0.5 mmol.L-1Res能显著抑制UVB诱导的HaCaT细胞产生的MMP-1,MMP-9 mRNA含量增加以及UVB对TIMP-1 mRNA的抑制作用(P<0.05)。结论:Res可以显著抑制UVB照射诱导的HaCaT细胞产生的MMP-1,MMP-9及TIMP-1 mRNA含量的变化,对皮肤光老化可有一定的防护作用。     

聚合酶链反应相关技术对人乳头状瘤病毒的检测与分型

目的 鉴定和评估pcr联合限制性片段长度多态性(rflp)及基因测序技术对发生于外生殖器或肛周部位的5种皮肤病与性病进行hpv dna检测和分型的可行性.方法 应用hpv通用引物对(my09/11)检测组织中hpv dna,并对hpv dna阳性片段进行纯化和回收.利用4种限制性内切酶对hpv dna阳性的pcr产物进行酶切,聚丙烯酰胺凝胶电泳(page)对酶切产物进行分型,然后用pcr直接测序法验证分型结果并对难以分辨或少见图形进行检测.结果 50份经病理确诊的临床样本中,共有35份hpv dna阳性,其中26份来自尖锐湿疣患者,8份来自鲍温样丘疹病患者,1份来自鳞状细胞癌患者.hpv dna阳性样本中,hpv6型19份,hpv11型3份,hpv16型8份,hpv6合并hpv 11型4份,hpv62型1份.测序结果与pcr-rflp判读的hpv型别相符.结论 pcr-rflp方法可用于hpv dna检测与分型. abstract： objective to assess polymerase chain reaction(pcr)combined with restriction fragment length polymorphism(rflp)and gene sequencing technologies in the detection and typing of hpv dna.methods tissue specimens were collected from skin diseases and venereal disease in perianal or genitals.pcr was performed with hpv dna general primers(my09/11)in tissue samples. positive fragments of hpv dna were purified and digested by restriction enzymes.the digested fragments were typed by po]yacrylamide gel electrophoresis(page).the results were verified by direct sequencing.results in 50 clinical samples there were 35 hpv dna positive,including 26 from patients with condyloma acuminatum,8 from patients with bowenoid papulosis,and 1 from patients with squamous cell carcinoma.in hpv dna positive samples,19 were hpv6,3 were hpv11,8 were hpv16,4 were hpv6 and hpv 11,and i was hpv62.sequencing results were in accordance with the pcr-rflp results .conclusion pcrrflp method is effective in the detection and typing of hpv dna.     

络病学说的4次大发展

络病学说在几千年的发展中,共有4次大发展:第1次,在《黄帝内经》中首次出现了"络";第2次,张仲景针对络病提出了相应的治疗方法,出现了"络病证治";第3次,在前两次的基础上,清代叶天士阐明了相对较完善的络病体系,并且提出了"久病入络"、"久痛入络"等千古名论;第4次,近现代医家完善了络病学理论体系,并且不断的扩展络病学在临床和科研中的应用。     

“湿热阻遏膜原”证之刍议

通过介绍＂膜原＂的来源,内经诸家、温病学家对＂膜原＂的认识,认为＂膜原＂有广义与狭义之分,广义＂膜原＂泛指机体腔隙、筋膜所在之处,狭义＂膜原＂指中焦胃脘之筋膜,或空隙处,为上中下三焦必经之处,当属半表半里,为＂三焦之门户＂。而＂湿热阻遏膜原＂证为＂膜原＂病的代表证。其治疗宜辛开与疏利结合,宣透膜原、燥湿化浊,及时阻断病邪向下向内传变。同时应认真区分其与类似证疟疾、伤寒少阳证的区别。     

E型沙眼衣原体主外膜蛋白DNA疫苗和重组蛋白疫苗联合免疫诱导出的免疫效应

目的 研究沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)DNA疫苗和重组蛋白(rMOMP)疫苗联合免疫小鼠诱导出的免疫效应.方法 3～4周BALB/c雌鼠60只,分5组,每组12只,于第0、2、4周通过双侧股四头肌肌注免疫相应的疫苗.通过血清IgG抗体和IFN-γ含量、阴道冲洗液sIgA抗体含量、脾淋巴细胞增殖指数、迟发型超敏反应、阴道脱落细胞种植等指标进行小鼠免疫效应的测定.结果 DNA蛋白联合组小鼠血清IgG抗体水平A405值为0.629±0.052;sIgA,A450值为0.379±0.052;脾淋巴细胞增殖指数为5.682±0.484;淋巴细胞培养上清液中IFN-γ含量为(1265±128)ps/ml.DNA蛋白联合组小鼠的各项指标均好于EB阳性对照组除外的其他组(P<0.01).结论 沙眼衣原体DNA疫苗和蛋白疫苗联合免疫可以增强免疫保护效应.     

E型沙眼衣原体主要外膜蛋白多克隆抗体的制备、鉴定和初步应用

目的 表达E型沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)并制备其兔源多克隆抗体.方法 诱导表达实验室构建的MOMP/pGEX6p-1重组质粒,通过胶回收进行目的蛋白的纯化.MOMP免疫新西兰家兔制备多克隆抗体,ELISA法测定抗体效价,Western印迹、细胞免疫荧光方法鉴定抗体的特异性.结果 在大肠埃希菌中成功表达融合蛋白谷胱甘肽巯基转移酶(GST)-MOMP.ELISA法检测抗体的效价达到1∶12 800,Western印迹结果显示抗体可与原核表达的MOMP特异性结合,细胞免疫荧光检测结果显示抗体可与体外培养的沙眼衣原体特异性结合.结论 成功表达了E型沙眼衣原体的MOMP,并制备了高效价、高特异性的抗MOMP抗体,为沙眼衣原体的检测和临床研究提供依据.

Abstract：

Objective To express major outer membrane protein (MOMP) of Chlamydia trachomatis E and to prepare rabbit polyclonal antibody. Methods The recombinant plasmid MOMP/ pGEX6p-l prepared by our lab was introduced into E. coli. The protein was expressed and purified by gel recycling, then was injected into New Zealand rabbits to produce polyclonal antibodies. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect the titer of antibody. The antibody specificity was identified by Western blot and immunofluorescence. Results The fusion recombinant protein glutathione S-transferase (GST)-MOMP was successfully expressed in E. coli. The titer of antibody recombinant protein detected by Western blot and to the endogenous MOMP of Chlamydia trachomatis in vitro detected by immunofluorescence. Conclusions The recombinant MOMP is successfully expressed and the MOMP antibody with high titer and high specificity is obtained. which will be helpful for Chlamydia trachomatis detection and related clinical research.     

他扎罗汀和窄谱中波紫外线对银屑病基质金属蛋白酶13表达的影响

【摘要】 目的 检测基质金属蛋白酶13（MMP13）在银屑病患者中的表达,评估他扎罗汀和窄谱中波紫外线（NB-UVB）对银屑病样皮炎小鼠MMP13表达的影响。方法 收集2019年5 - 8月就诊于天津医科大学总医院的18例银屑病患者皮损组织和10例健康人正常皮肤组织及所有受试者血清。将25只SPF级BALB/c雄性小鼠随机分成对照组、咪喹莫特组、咪喹莫特 + NB-UVB组、咪喹莫特 + 他扎罗汀组和咪喹莫特 + 他扎罗汀 + NB-UVB组,每组5只。分别给予小鼠背部皮肤不同处理,除对照组外,其余各组进行银屑病样皮炎造模处理,造模时间为7 d,造模成功后,第8天早上取小鼠眼球血,并使用脱颈法处死后,切取背部皮损组织。HE染色观察皮损处表皮厚度和病理变化,免疫组化检测表皮MMP13表达水平,ELISA检测血清MMP13含量。两组比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较用LSD检验,计数资料采用χ2检验比较。结果 银屑病患者皮损处MMP13呈强阳性表达,表皮和血清MMP13水平［84.11 ± 17.16、（13.29 ± 3.95） μg/L］显著高于健康对照组［11.98 ± 4.08、（7.46 ± 1.58） μg/L,均P < 0.01］。与对照组表皮厚度［（1.26 ± 0.04） μm］、表皮和血清MMP13水平［25.40 ± 2.34、（185.76 ± 7.22） μg/L］比较,咪喹莫特组表皮厚度［（7.93 ± 0.59） μm］明显增加,表皮和血清中MMP13水平［147.14 ± 5.53、（215.98 ± 15.17） μg/L］也显著增加（均P < 0.01）。与咪喹莫特组比较,咪喹莫特 + 他扎罗汀组、咪喹莫特 + NB-UVB组、咪喹莫特 + 他扎罗汀 + NB-UVB组表皮厚度均下降［分别为（3.56 ± 0.37）、（3.83 ± 0.39）、（2.14 ± 0.34） μm,均P < 0.05］,表皮中MMP13表达减弱（分别为120.42 ± 3.23、91.08 ± 0.46、71.12 ± 7.11,均P < 0.05）,且血清MMP13含量下降［分别为（197.39 ± 3.92）、（196.13 ± 11.76）、（183.21 ± 14.99） μg/L,均P < 0.05］。结论 MMP13蛋白表达水平在银屑病患者皮损及血清中增高;他扎罗汀和NB-UVB治疗后银屑病样皮炎小鼠皮损和血清中MMP13下降。MMP13可能参与银屑病的发展,他扎罗汀和NB-UVB可能通过减少MMP13的表达而抑制银屑病发展。     

沙眼衣原体标准株不同型之间的差异性分析

目的鉴定从ATCC购买的标准株是否为正确型别并比较它们之间的差异。方法沙眼衣原体标准株连续多次传代培养,每次培养后用卢戈氏碘液染色观察并进行包涵体计数,提取基因组DNA进行PCR-RFLP分型鉴定。结果经分型鉴定后,从ATCC购买的标准株为相应的D型、F型、I型;同样的接种剂量400μL,D型随传代次数的增加包涵体数(反应感染率)直线增加,F型、I型随传代次数的增加包涵体数维持在一定的水平并没有明显增多,即感染率没有明显增加。结论从ATCC购买的标准株分型后均为正确的型别,但不同型之间感染率增长的差异明显,为理解沙眼衣原体不同型别致病性的不同提供了一定的理论依据。     

初发性和复发性生殖器疱疹患者尿道和宫颈排毒的临床研究

目的应用降落PCR法检测初发性和复发性生殖器疱疹患者尿道和宫颈HSV排放情况。方法对每位初发性和复发性生殖器疱疹患者均取1个拭子,采用降落聚合酶链式反应(TD-PCR)对临床标本进行鉴定。结果共检测38例生殖器疱疹患者,男性尿道口标本28个,初发性7个,复发性21个;女性宫颈管标本10个,初发性和复发性各5个。经降落PCR方法鉴定,均为HSV-Ⅱ。初发病例与复发病例的HSV-PCR阳性率分别为83%(10/12)和46.2%(12/26)(χ2=4.66,P<0.05),有显著性差异。结论初发性和复发性生殖器疱疹患者尿道和宫颈HSV排放的情况不同,初发性生殖器疱疹的排毒率高于复发性生殖器疱疹。