沙眼衣原体临床分离株药物敏感性测定及耐药基因检测

目的检测本地区泌尿生殖道沙眼衣原体(CT)对四环素类、大环内酯类、喹诺酮类抗生素的体外药物敏感性,并从基因水平上探讨其耐药机制。方法将42株经细胞培养法证实有CT感染的临床株进行McCoy细胞培养,传代至感染率达90%以上,收集标本进行药敏试验。分别检测四环素耐药质粒tetM基因;大环内酯类耐药相关的23S核蛋白体RNA基因、核糖体蛋白基因L4,通过产物测序检测基因突变;限制性片段分析(RFLP)检测gyrA喹诺酮耐药决定区(QRDR)常见的基因点突变。结果药敏MIC(单位均为μg/mL)分别为红霉素0.5～2.0,克拉霉素0.008～0.032,阿奇霉素0.125～0.50,四环素0.157～0.625,多西环素0.063～0.125,米诺环素0.032～0.128,左氧氟沙星0.50～1.00,莫西沙星0.060～0.120,司帕沙星0.064～0.128,其中发现2株红霉素耐药株(MIC值2μg/mL),其23srRNA基因有C2452A,T2611C的突变(大肠杆菌序列编号),红霉素耐药株及敏感株L4基因均发现脯氨酸113(CCG)→亮氨酸(CTG)、脯氨酸156(CCC)→丙氨酸(GCC)两个位点的突变(GenBankNC000117.1),25株临床分离株中检测到tetM基因,未发现gyrA-QRDR基因中Ser83→Ile点突变。结论发现2株红霉素耐药株,未发现其它八种抗菌药的耐药株。克拉霉素显示了较高的体外抗CT活性。C2452A,T2611C的突变导致红霉素低水平耐药,L4基因的点突变可能与红霉素耐药无关。     

葛根黄芩黄连汤解析

葛根黄芩黄连汤是《伤寒论》中的一首名方,方中葛根升清阳、解表、生津,可宣达肺气使上焦通畅,体现“源清而流自洁”、“肺与大肠相表里”的理论;黄芩、黄连清热燥湿止利,体现“湿宜轻下”、“急下存阴”之思想。通过对葛根黄芩黄连汤的探讨,以期对后世医家诊治肺系、肠系疾病以及湿热病方面有重要指导意义。     

白细胞介素22对HaCaT细胞CCL28表达的影响

目的探讨白细胞介素(IL-22)对HaCaT细胞黏膜相关上皮趋化因子(CCL28)表达的影响。方法培养HaCaT细胞,将其分为6组:4个IL-22组(分别用12.5、25、50、100μg/L的IL-22进行干预处理);阻断剂组(50μmol/L PD98059阻断干预,2 h后加入50μg/L IL-22);对照组(用PBS处理)。24 h后,用CCK-8检测细胞的增殖;用实时荧光定量RT-PCR检测CCL28 mRNA的水平变化;用蛋白免疫印迹法、酶联免疫吸附法和免疫荧光检测CCL28蛋白水平的变化。结果CCK-8检测显示,上述浓度的IL-22作用于HaCaT细胞24 h后,对细胞的增殖有明显的促进作用,且这种促进作用能被PD98059抑制,差异具有统计学意义(P<0.05)。实时荧光定量RT-PCR检测显示,上述浓度的IL-22作用于HaCaT细胞,细胞中CCL28 mRNA逐渐升高,均较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.01);通路阻断剂组较50μg/L IL-22组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。用蛋白免疫印迹法和酶联免疫法检测到CCL28蛋白水平变化的趋势与实时荧光定量RT-PCR检测到的CCL28 mRNA的水平变化的趋势一致,且差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光检测显示,HaCaT细胞内CCL28蛋白主要表达在细胞质。结论IL-22可剂量依赖促进HaCaT细胞增殖和CCL28的表达,其可能通过MAPK-ERK1/2通路作用。     

承气汤类方与“肺肠同治”应用探讨

本文对"肺与大肠相表里"的理论渊源、方剂演变以及应用进行了归纳总结。"肺与大肠相表里"源自《黄帝内经》,是中医的重要基础理论之一。肺与大肠在经络上相互络属,生理上相互联系,功能上相互协调,进而在疾病方面也相互影响。对于肺系或肠系疾病的治疗,历代医家遵循"肺与大肠相表里"之论,多采用肺肠同治之法。同时,受到《伤寒论》中诸承气汤的启发,后世医家在此基础上化裁出诸多承气汤类方。其中尤以吴鞠通《温病条辨》所载宣白承气汤为首,是肺肠脏腑合治的代表方。凡证属痰热蕴肺、腑气不通者,均可用本方或其加减方,使腑气得通,肺气得以宣降,达肺肠合治之目的。     

降落PCR法与细胞培养法检测生殖器疱疹患者不同标本HSV的对照研究

目的比较降落PCR法与细胞培养法检测生殖器疱疹患者不同标本单纯疱疹病毒(HSV)阳性率,为临床医师选择检验方法提供参考。方法对生殖器疱疹患者每人取2个拭子,分别采用降落聚合酶链式反应(PCR)和VERO细胞培养法对临床株进行分离培养和鉴定。结果共检测41例患者,降落PCR方法32个标本阳性,均为HSV-Ⅱ;细胞培养方法7个标本阳性,经PCR鉴定为HSV-Ⅱ。降落PCR和细胞培养法HSV阳性率分别为78.0%和14.1%,差异有统计学意义(χ2=30.56,P<0.01)。结论检测生殖器疱疹患者标本中的HSV,PCR法优于细胞培养法,值得推广。     

衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1对沙眼衣原体的作用研究

目的 将原核表达纯化的衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1作用于沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct),以期发现该Vp1蛋白对Ct生长的影响.方法 原核表达并纯化噬菌体phiCPG1的衣壳蛋白Vp1,将纯化后的蛋白复性后与Ct的标准株或临床野生株(终浓度为53μg/ml)室温孵育3h后接种至单层致密McCoy细胞中,培养过程中均加入了了 Vp1蛋白,48 h后碘染色包涵体计数和透射电镜观察Vp1蛋白对Ct生长的影响;MTT法检测Vp1蛋白对McCoy细胞系的细胞毒性作用;液体培养基稀释法检测Vp1蛋白对大肠杆菌BL21和DH5α的抗菌作用.结果 衣壳蛋白Vp1对Q标准株E和D型的抑制率分别为78％和72％,对Ct临床野生株的抑制率为40％～70％,透射电镜结果显示Vp1蛋白能够抑制Ct的正常发育,使包涵体内出现异常增大的网状体.而该Vp1蛋白对非衣原体的其他生物体如大肠杆菌BL21、DH5α和真核细胞McCoy的生长没有影响.结论 噬菌体衣壳蛋白Vp1对Ct的生长具有明显的抑制作用,为临床上Ct感染的治疗提供了新的思路.     

抗菌药物对泌尿生殖道沙眼衣原体临床株培养的影响

【摘要】 目的 探讨抗菌药物对泌尿生殖道沙眼衣原体感染者衣原体培养结果的影响,并分析药敏变化。 方法 取临床经直接免疫荧光检测确定为衣原体感染者的尿道或宫颈拭子进行传代培养,碘染后发现包涵体者为培养阳性。分析患者临床用药与培养阳性及阳性代数之间的关系,并对阳性菌株进行体外药敏测试。结果 2010—2012年,共培养临床标本285份,阳性39份;未用药即培养的标本61份,阳性17份（27.87%）;用药后培养224份,阳性22份（9.82%）,两组阳性率比较,χ2 = 13.22,P ＜ 0.05。未用药组阳性的17例中,1代阳性4例,2代5例,3代5例,4代2例,5代1例;用药后组阳性的22例中,2代2例,3代3例,4代9例,5代6例,6代2例,未用药与用药后培养标本首次出现沙眼衣原体包涵体的代数经秩和检验,差异有统计学意义（P ＜ 0.05）,未用药标本出现阳性代数早于用药后的标本。对培养阳性的39份的标本进行体外药敏检测,结果发现,未用药患者的MIC值低于用药患者。 结论 与未用药患者的标本相比,用抗菌药物患者的标本在应用细胞培养法检测衣原体时阳性率低,出现阳性者需增加传代才能检出。 【关键词】 衣原体, 沙眼; 治疗结果; 培养技术; 微生物敏感性试验     

多次传代培养提高沙眼衣原体泌尿生殖道感染的检出率

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)所致的泌尿生殖系感染是目前世界范围内最为流行的性传播疾病,在某些西方国家已超过淋病占各种性传播疾病的首位~([1]).在我国,近年日益增加的Ct泌尿生殖道感染已受到重视.在Ct感染的诊断上,实验室一般以传统的细胞培养法、分子生物学技术的LCR和PCR法以及免疫学类的EIA、DIF和VIDAS-CHL法进行诊断.由于细胞培养法结果稳定、可靠,是评价其他方法的"金标准",也是世界卫生组织推荐的主要方法之一~([2]).我们研究Ct的传代培养和影响因素,有助于提高Ct的检出率.     

溶菌酶对体外培养的人成纤维细胞基质金属蛋白酶-1和12及赖氨酸氧化酶基因表达的影响

目的 探讨溶菌酶对体外培养的人成纤维细胞基质金属蛋白酶-1和12及赖氨酸氧化酶基因表达的影响。方法 采用酶消化法进行体外人皮肤成纤维细胞原代培养,然后将不同浓度的溶菌酶（0,1 × 10-8,1 × 10-7 mol/L）加入体外培养的人皮肤成纤维细胞中,待药物作用后,提取总RNA,通过逆转录反应获得cDNA并进行体外扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,根据条带的平均光密度A值的比值来判断人成纤维细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-1、MMP-12及赖氨酸氧化酶（LOX）mRNA的表达水平。结果 对体外培养的人成纤维细胞进行溶菌酶干预,经β肌动蛋白内参校正后,RT-PCR示对照组、低剂量组、高剂量组MMP-1、MMP-12 mRNA表达水平三组间差异具有统计学意义（F值分别为6.98和4.44,P值均 < 0.05）。SNK-q检验显示,低剂量组与对照组、高剂量组比较,差异均无统计学意义（P > 0.05）,高剂量组与对照组相比,差异有统计学意义（P < 0.05）。LOX mRNA表达水平三组间差异具有统计学意义（F = 5.24,P < 0.05）,SNK-q检验显示,低剂量组、高剂量组与对照组相比,差异具有统计学意义（P < 0.05）,低剂量组与高剂量组相比,差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 溶菌酶可以下调MMP-1和MMP-12及上调LOX基因的转录水平。     

低血清铁生殖道沙眼衣原体持续感染动物模型的研究

目的 创建低血清铁生殖道沙眼衣原体持续感染的动物模型。方法 用BALB/c雌性小鼠,通过缺铁饮食使其进入缺铁状态,小鼠阴道内注射衣原体标准株原体前1周肌内注射黄体酮,然后阴道内注射50 μl浓度约为3.4344 × 107 ifu/ml的E型沙眼衣原体标准株原体悬液。连续观察其阴道分泌物性状及免疫荧光镜检情况;并进行病理切片检测。进一步给予莫西沙星及铁剂干预,观察免疫荧光镜检情况。结果 与正常小鼠比较,低血清铁小鼠生殖道沙眼衣原体感染时间明显延长,超过18周;18周后小鼠子宫,输卵管,卵巢病理切片呈现明显慢性炎症,淋巴细胞浸润。在后续给予小鼠莫西沙星及补铁干预后发现,单纯给予莫西沙星或补铁的小鼠免疫荧光重复多次检测并不阴转,而补铁后给予莫西沙星组阴转率达到60%。结论 动物模型显示,低血清铁可能是生殖道沙眼衣原体持续感染的因素之一。