结直肠癌诊断标志物检测方法的研究进展

［摘要］　结直肠癌（CRC）是消化系统恶性肿瘤,起病隐匿,单靠症状和体征在临床上难以诊断,一旦确诊多数已经处于中晚期。CRC患者由于分期不同,预后有显著差异。CRC的早期筛查与诊断可以改善患者的生存情况,降低病死率。该文对粪便标志物、血液标志物和液体活体标志物检测诊断结直肠癌的研究进展进行综述。     

HOPX在肿瘤中的研究进展

恶性肿瘤严重危害人类生命健康,近年来研究认为同源域蛋白同源盒(homeodomain-only protein homeobox,HOPX)基因是一种新的抑癌基因,其甲基化程度与肿瘤的发生发展关系密切.然而,HOPX在不同肿瘤中的作用仍不十分明确,有待进一步研究探索.该文以HOPX在肿瘤中的最新研究进展为基础,就其在肿...     

人NKp44基因克隆及其在大肠埃希菌中的表达和纯化

目的:对人NKp44进行基因克隆及其在大肠埃希菌中重组表达,为进一步研究NK细胞抗肿瘤作用奠定基础。方法:提取人外周静脉血单个核细胞,培养并加入IL-2进行诱导后收集细胞,分离纯化外周血总RNA。用巢式PCR扩增hNKp44片段(约860bp),克隆至质粒载体pMD18-T,并对克隆的DNA片段进行序列分析。用限制酶EcoRⅠ和NcoⅠ消化pMD18-T-hNKp44重组质粒,分离hNKp44片段,并插入原核表达载体pET30a(+)的相应限制酶位点,酶谱分析鉴定重组表达载体pET30a(+)-hNKp44。转化菌株BL21(DE3)经IPTG诱导,用SDS-PAGE和WesternBlot鉴定表达的重组蛋白。采用His.BindPurificationKit对重组蛋白进行纯化。结果:巢式PCR扩增的DNA片段与hNKp44cDNA大小一致。重组质粒pMD18-T-hNKp44的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列与文献报道的hNKp44的cDNA序列一致。SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为35.4×103,其表达量达菌体总蛋白的40%左右。WesternBlot分析显示,重组蛋白能特异地与抗His.Tag抗体结合。纯化得到纯度为95%的重组蛋白,纯化回收率达40%。结论:已经成功地构建了表达重组hNKp44的工程菌株。