大鼠Cx43基因慢病毒表达载体的构建及转染骨髓间充质干细胞表达的观察

目的:构建大鼠缝隙连接蛋白43(Cx43)基因的重组慢病毒表达载体,并转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),观察Cx43的表达。方法:采用RT-PCR技术获得大鼠Cx43基因,并将其连接到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒表达载体pGC-FU中,重组获得慢病毒质粒pGC-FU-Cx43,将其与辅助包装质粒(pHelper1.0、pHelper2.0)一起共转染293T细胞,包装生产病毒并测定滴度。所获慢病毒感染大鼠BMSC后,采用荧光显微镜和Western blot方法检测Cx43的表达。结果:酶切证实Cx43基因已定向连入目的载体,测序结果显示,所构建的pGC-FU-Cx43重组慢病毒质粒序列与目标序列完全一致。获得的病毒滴度为2×109TU/ml。经分离、纯化得到BMSC;pGC-FU-Cx43转染BMSC后,可见大量EGFP表达,Cx43的表达量明显增加。结论:成功构建并包装获得较高滴度的重组慢病毒pGC-FU-Cx43。pGC-FU-Cx43可高效转染BMSC,Cx43表达增加,且实现稳定转染。     

白藜芦醇对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　观察白藜芦醇 (resveratrol,Res)对体外培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞 (VSMC)的增殖、DNA合成及细胞凋亡的影响 ,并探讨其机制。方法　体外培养大鼠主动脉VSMC ,分为不同浓度的Res组及对照组。观察细胞生长曲线 ;四甲基偶氮唑盐 (MTT)微量酶反应法检测细胞活性 ;3H 胸腺嘧啶脱氧核苷 (3H TdR)掺入法观察其对DNA合成的影响 ;HE染色 ,DNA梯带检测及流式细胞术检测细胞凋亡。结果　与对照组比较 ,本研究各浓度Res组VSMC计数均有不同程度的减少 ,3H TdR掺入率明显降低 ,细胞增殖受抑制 ,VSMC凋亡增加 ,并呈浓度依赖性。结论　Res对体外培养的大鼠主动脉VSMC增殖有明显的抑制作用 ,可能是通过抑制细胞DNA合成 ,诱导细胞凋亡等途径发挥作用     

缺氧再复氧对心肌细胞缝隙连接通信影响的研究

目的研究不同缺氧再复氧时间心肌细胞缝隙连接(Gap junction,GJ)通信改变情况,以及庚醇(Heptanol,HT)对GJ通信的影响。方法利用荧光染料Lucifer yellow CH(LY)不能透过细胞膜,但可以经过细胞GJ在细胞间进行传递的特点,采用细胞划痕技术,在倒置荧光显微镜下直观地观察不同组别、缺氧再灌注不同时间LY经过GJ流通情况,及HT干预后GJ通信改变情况。结果在缺氧30min时心肌GJ通信明显下降,荧光仅传至划痕附近第二列细胞,正常细胞荧光则传至四列以外的细胞。再供氧1h时恢复到第三列,以后逐步恢复到正常。运用HT后传导明显减慢荧光仅传至第二列细胞,缺氧和再供氧时传导也无明显变化。培养7d的心肌细胞搏动频率为(120±18)次/min,缺氧30min时,搏动减弱,次数为(56±16)次/min,再供氧1h时,搏动次数为(118±22)次/min,两者差异显著(P(0.01)。当运用HT后心肌细胞搏动明显减弱,约为(64±20)次/min,差异显著(P(0.001)。在缺氧再灌注过程中,HT搏动次数变化不大。结论心肌细胞在缺氧时GJ通透性减低,HT也有不同程度的降低GJ通信的作用。     

卡维地洛与庚醇减少低氧再供氧心肌细胞凋亡及坏死的研究

目的 研究卡维地洛（carvedilol,CVD）、庚醇（heptanol ,HT）对不同时间低氧再供氧心肌细胞坏死、凋亡的影响。方法 利用锥虫蓝染色技术和流式细胞仪分别观察低氧后不同时间再供氧细胞坏死、凋亡情况,观察CVD、HT对其的影响。结果 对照组（未给药）正常和低氧30 min时凋亡指数差异无显著性（P>0.05）,再供氧1 h凋亡指数为27.4%,与正常时比较差异有极显著性（P<0.01）。坏死的心肌细胞在再供氧2 h后差异有极显著性（P<0.01）。运用CVD、HT后凋亡指数在再灌注1 h时分别较对照组减少了55.11%和21.53%。结论 HT和CVD通过不同的作用可以减少低氧再供氧心肌细胞的死亡和凋亡.     

粉防己碱对高脂饮食兔血清白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α及血管壁细胞核因子-κB表达的影响

目的观察中药粉防己碱对高脂饮食兔血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及血管壁细胞核因子-κB表达的影响,进一步探讨粉防己碱抗动脉粥样硬化的机制。方法将18只雄性日本大耳白兔随机分为正常对照组(普通饲料)、高脂模型组(高脂饲料)和粉防己碱组(高脂饲料+粉防己碱)。喂养12周后处死动物,放射免疫法检测血清IL-1β,TNF-α含量;采用逆转录聚合酶链式反应对血管壁细胞核因子-κBmRNA表达定量分析;Western杂交定量分析血管壁细胞核因子-κBp65蛋白亚基。结果高脂模型组血清IL-1β,TNF-α显著高于正常对照组和粉防己碱组(P<0.05),正常对照组和粉防己碱组差异无显著性意义(P>0.05);高脂模型组(1.414±0.106)NF-κBmRNA显著高于正常对照组(0.085±0.062)和粉防己碱组(0.453±0.034),而高脂模型组NF-κB蛋白亚基p65(10.08±5.75)显著低于正常对照组(35.90±3.07)和粉防己碱组(35.91±4.38)(P<0.001)。结论粉防己碱有抑制炎症因子IL-1β,TNF-α合成和分泌的作用;高血脂激活NF-κB,p65易位入胞核促进转录而降解,而粉防己碱对其有抑制作用,这可能是粉防己碱抗AS作用的机制。     

酒精性心肌病患者临床研究

目的 探讨酒精性心肌病(ACM)的早期诊断、处理及预后。方法 将42例酒精性心肌病患者分为亚临床期(5例)和临床期(37例)，并分析其临床表现和实验室检查结果。结果 经2年的随访，该病患者心电图异常发生率较高，但特异性差；胸部X线敏感性和特异性均不佳；左心室肥厚、斑点状回声增强及早期舒张功能受损是酒精性心肌病患者较为特异的心脏超声改变；戒酒后大多数患者症状得到控制，且亚临床期患者预后明显好于临床期患者。结论 酒精性心肌病的预后关键在于早期诊断和彻底戒酒。     

蝙蝠葛碱治疗预激综合征合并心房颤动一例

蝙蝠葛碱系从防已科植物蝙蝠葛根茎中提取的一种酚性生物碱,经动物及临床实验证明,它具有显著的抗心律失常作用,属Ⅰ类抗心律失常药。但该药对预激综合征合并心律失常的疗效目前尚不了解。最近,我们用蝙蝠葛碱治疗1例预激合并房颤患者,疗效显著。患者,男,40岁。B型预激综合征并发阵发房室反复性心动过速(AVRT)反复发作20余年,     

美托洛尔对大鼠急性心肌梗死后交感神经重构的抑制作用

目的探讨大鼠心肌梗死后交感神经重构现象以及美托洛尔对重构的抑制作用。方法心肌梗死模型成功后的48只大鼠随机分为心肌梗死组(A组)和美托洛尔治疗组[B组,10mg/(kg.d)]。各组分别在3个不同的时间点(3d、7d、30d)进行观测。各时间点配以相同只数的大鼠,只穿线不结扎作为对照组。测定大鼠心电图,并计算QT离散度(QTd)。连续记录大鼠心电图,并对心律失常进行评分。用免疫组化的方法检测各组大鼠心肌梗死周边区交感神经密度。结果A组7d、30d时心肌梗死周围区交感神经密度与对照组比有明显增加(P<0.05)。B组在第30天时,梗死周边区交感神经支配密度要明显低于同时间点的A组(P<0.05)。美托洛尔治疗后各时间点QTd和心律失常评分均比相应A组显著降低(P<0.05)。结论美托洛尔能抑制心肌梗死后交感神经的重构,降低QTd和心律失常,第30天时,美托洛尔对降低心律失常的作用部分是通过抑制交感神经重构介导的。     

福辛普利对X综合征患者冠脉血流储备的影响

目的应用彩色多普勒超声仪检测冠状动脉血流储备(coronary flow reserve,CFR),观察福辛普利对X综合征患者CFR的影响. 方法选取26例X综合征患者,比较福辛普利(5mg或10mg)治疗前后患者血压、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、内皮素(ET-1)、静息状态时患者冠状动脉的基础血流速度(bFV)、潘生丁注射后的最大血流速度(mFV)及冠状动脉血流储备(CFR)的变化. 结果福辛普利治疗6个月后,X综合征患者的SBP、DBP、TC、LDL-C、TG水平轻度下降(P＞0.05),ET-1水平显著下降,从(103.5±9.7)pg/ml到(77.5±12.0)Pg/ml(P＜0.05);患者的bFV改变不明显(P＞0.05),而mFV从治疗前的(57.2±8.4)cm/s上升到(72.1±7.6)cm/s(P＜0.05),CFR从治疗前的2.52±0.56上升到3.32±0.44(P＜0.01). 结论应用福辛普利治疗X综合征患者可有效改善患者的内皮功能和CFR.     

血管平滑肌细胞中Survivin的表达和咖啡酸苯乙脂的干预效应

目的 观察脂多糖(LPS)激活血管平滑肌细胞(VSMC)后,咖啡酸苯乙酯(CAPE)对细胞表达存活素(Survivin)的影响.方法 MTT法检测LPS及CAPE对VSMC增殖能力的影响.分别用免疫细胞化学法和实时荧光定量RT-PCR法检测细胞Survivin蛋白和mRNA的表达.结果 0.1～10.0 mg/L的LPS刺激VSMC生长并诱导细胞表达Survivin,而5、10、20、40、80 mg/L CAPE呈剂量依赖性地抑制激活的VSMC生长,同时降低细胞中Survivin的表达水平.结论 CAPE可能通过降低激活的VSMC中表达的Survivin,增加细胞的凋亡而抑制其增殖.