p14ARF基因通过p53途径对肝癌细胞的生长的影响

目的　探讨 p14 ARF对含有野生型 p5 3(wtp5 3)的肝癌细胞生长的影响及其作用机制。方法　将含p14 ARF的基因转染到人肝癌细胞HepG2中 ,通过流式细胞仪及生长曲线观察其对HepG2细胞周期及细胞生长的影响。利用Western Blotting方法及 p2 1waf1启动子荧光素酶活性检测p14 ARF对HepG2细胞 p5 3蛋白表达的影响。 结果　转染p14 ARF基因的HepG2细胞的生长速度从第 3天开始较空载体 pcDNA 3组减慢 ,处在G0 G1期细胞数 ( 70 .6 6 % )与空载体组 ( 6 1.5 5 % )相比明显增加 ,转染 pcDNA3p14 ARF( 1.0 92 3± 0 .0 370 ) p2 1waf1启动子荧光素酶活性较空载体组( 0 .76 73± 0 .0 180 )明显升高 ( P <0 .0 5 )。Westernblotting结果表明 ,p5 3表达也明显增加。 结论p14 ARF基因通过上调HepG2细胞的 p5 3表达导致 p2 1waf1的表达升高使细胞阻滞于G0 G1期 ,从而抑制细胞的生长。     

HER-2基因原位杂交方法学探讨

目的 尝试用新型自动化原位杂交仪(HS400Pro)建立规范化、标准化操作步骤.方法 可有效降低实验所需探针浓度、提高杂交效率.对5例已知HER-2阳性的乳腺癌存档蜡块,采用动态杂交技术行2种不同DNA探针标记(DIG和FITC),分别用手工和HS400Pro全自动杂交检测系统对比检测结果.结果 探针用专利杂交液按1∶40稀释后,采用新型自动化原位杂交仪37℃杂交12 h与手工37℃杂交18h结果一致.说明该仪器可以基本替代手工开展ISH.结论 自动化原位杂交仪的使用是实现ISH自动化、标准化、规范化的好方法.但要继续扩大检测样本量,找出HS400Pro的最佳杂交条件.     

CK7、CK14、CK19和CK20在胃肠癌转移诊断中价值的新发掘

目的：重新评估CK7、CK14、CK19和CK20在胃肠癌淋巴结微转移中的诊断价值和意义。方法：采用组织芯片和免疫组化方法检测CK7、CK14、CK19和CK20在正常黏膜(n=112)、原发癌(n=112)、淋巴结转移癌(n=106)和肝脏转移癌(n=37)中的表达,比较它们在转移灶与原发灶间表达差异以及与临床病理参数之间的关系。结果：CK19在各种组织中的表达均为100%,原发癌和转移癌间呈一致性表达；而CK20和CK7的表达随肿瘤的发生和进展逐步下降,淋巴结转移灶中的表达水平显著低于原发癌中的表达水平(P＜0．05),CK20和CK7的下降表达与肿瘤的浸润深度有关(P＜0．05)；CK7的下降表达与肿瘤的远处转移有关(P＜0．01),胃癌中CK7的表达率高于肠癌中的表达(P=0．003),CK20正好相反(P＜0．001)。CK14在各种组织中的表达率较低,在胃肠癌的诊断中的价值不大。结论：CK19是检测胃肠癌转移的一个理想指标,而CK20和CK7在检测微转移中价值有待评估,其表达下调可能在胃肠癌发展至转移中起重要作用。     

抑癌基因ING1、p21/WAF1、P53蛋白在胃癌中的表达

目的　研究ING1、p2 1 /WAF1、p53基因蛋白在胃癌组织中的表达意义及相互关系。方法　对 71例胃癌组织应用Envision免疫组化法 ,检测 p33ING1 、p2 1 /WAF1、p53的表达情况 ,分析其相关性 ,结合临床病理因素 ,探讨胃癌发生、进展及预后的关系。结果　p33ING1 与p2 1 /WAF1、p53表达有相关性 (P <0 .0 5) ,p33ING1 表达率为 62 .0 % (44/71 ) ,与正常组织相比呈低表达 ,与胃癌的浸润、淋巴结转移、远隔转移、分化程度有相关性 (P <0 .0 1 ) ;p2 1 /WAF1表达率为54 .9% (39/71 ) ,与胃癌浸润相关 (P <0 .0 5) ;p53表达为 63 .4 % (45/71 ) ,与浸润及淋巴结转移相关 (P <0 .0 1 )。结论　ING1是抑癌基因 ,其蛋白p33ING1 在胃癌中低表达 ,对胃癌的发生、发展可能起重要作用 ,p33ING1 、p2 1 /WAF1、p53表达可作为判断胃癌恶性程度及预后的重要指标     

一株具有局部浸润和转移的裸鼠人体肝细胞癌组织模型的建立

我们建立的一株裸鼠人体肝细胞癌模型(s MMC一LTNM)的移植、传代情况已有报道(本刊1987;6:     

抗骨肉瘤单克隆抗体在骨肉瘤组织中的免疫组化定位研究

本文报道了用本室建立的2株抗人体骨肉瘤细胞株所分泌的单克隆抗体,采用ABC酶标法,对24种肿瘤组织和正常人体组织进行了免疫组化定位研究,发现OS-McAb_1和OS-McAb_2除对部分骨源性恶性肿瘤有阳性反应外,对其他部位的肿瘤均显示阴性反应;与所标记的正常成人及胎儿相应组织无交叉反应。提示OS-McAb对骨肉瘤有较高的特异性,在骨源性恶性肿瘤的免疫诊断方面有一定应用价值。     

p33ING1b真核表达载体的构建及其对肝癌细胞生长的抑制作用

目的构建pCDNA3/p33ING1b真核表达质粒并探讨其对肝癌细胞SMMU7721生长的抑制作用.方法将p33ING1b cDNA正反义亚克隆至pCDNA3真核表达载体上,并经磷酸钙共沉淀法分别转染至SMMU7721细胞中.转染后48h,用0.8g/LG418筛选出阳性克隆,检测转染后细胞的生长曲线和软琼脂克隆形成率的变化及应用流式细胞仪分析细胞凋亡率的改变.结果重组pCDNA3/p33ING1b正反义表达质粒构建成功.经正义p33ING1b质粒转染的SMMU7721细胞生长速度减慢,快速增长期比对照组推迟2d,软琼脂克隆形成率为(69.0±12.0)‰,较转染空载体(90.0±10.5)‰及反义表达质粒(149.0±15.0)‰的SMMU7721细胞减少,细胞凋亡率(22.53%)亦比空载体组(8.95%)及反义组(7.75%)上升.结论重组pCDNA3/p33ING1b质粒能在SMMU7721细胞内表达,且能抑制SMMU7721细胞的生长并促进其凋亡.     

β转化生长因子及其受体在增生性瘢痕退行性变过程中的表达

目的 探讨增生性瘢痕退行性变过程中不同时期哌β转化生长因子(transforming growth factorβ,TGF-β)及其受体(transforming growth factor β receptor,TGF-β-R)的表达变化规律和意义.方法 对8例烧伤后增生性瘢痕患者退行性变过程中的增生活跃期和成熟稳定期的瘢痕组织进行免疫组织化学,观察增生性瘢痕退行性变过程中TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3及TGF-β-R Ⅰ、TGF-β-RⅡ的表达.结果 免疫组织化学显示,增生活跃期的增生性瘢痕组织以TGF-βl、TGF-β2和TGF-β-R Ⅰ阳性表达为主,TGF-β3和TGF-β-RⅡ仅见弱阳性表达;成熟稳定期的增生性瘢痕中TGF-β3和TGF-β-RⅡ的表达强度明显强于增生活跃期,而TGF-B1、TGF-β2和TGF-β-RⅠ的表达强度为弱阳性或阴性.结论 TGF-β及其受体不同水平的表达与增生性瘢痕从增生活跃至成熟稳定的退行性过程密切相关.     

大肠癌CD15,CD44v6和nm23H1的mRNA表达与转移及预后的相关性

目的 探讨CD15,CD44v6和nm23H1的mRNA表达与大肠癌临床病理参数和预后的关系及相关性.方法 应用原位杂交检测90例大肠癌中CD15,CD44v6和nm23H1的mRNA表达及20例原发灶和转移灶大肠癌配对标本中CD15 mRNA表达,并结合53例5 a以上随访资料分析.结果 90例大肠癌中CD15,CD44v6和nm23H1的mRNA阳性表达分别为76例(84.4%),62例(68.9%)和60例(66.7%).CD15和CD44v6的mRNA高表达及nm23H1 mRNA低表达与大肠癌Duke's分期、浆膜浸润、淋巴结转移、肝脏转移均呈正相关.大肠癌中CD15 mRNA表达与CD44v6 mRNA表达呈正相关,与nm23H1 mRNA表达呈负相关.20例原发灶和转移灶大肠癌配对标本中,CD15 mRNA表达水平一致.结论 大肠癌的侵袭转移与相关基因协同作用密切相关.在大肠癌的侵袭转移中cDl5,CD44v6和nm23H1的mRNA表达具有正、负调节的协同作用可能.CD15 mRNA可作为一个新的准确预测大肠癌侵袭转移潜能,并客观评估患者预后的生物学指标.     

不同内固定材料对兔胫骨骨折局部转化生长因子β1信使RNA表达的影响

背景：转化生长因子β是一族多功能的蛋白多肽，在骨折愈合过程中起作用的主要为转化生长因子β1。不同的内固定材料对骨折愈合的影响不同，其影响程度如何是判定内固定材料优劣的一个重要评定指标。目的：通过不同内固定材料固定后骨折愈合不同阶段转化生长因子β1mRNA的表达，了解转化生长因子β1mRNA的细胞内定位，借此探讨不同内固定材料对骨折愈合过程中骨折局部转化生长因子β1mRNA的表达的影响。设计：随机对照观察。单位：解放军第二军医大学长海医院骨科、病理科。材料：实验于2000-03／2001-07在第二军医大学实验动物中心和骨科实验室完成。选用新西兰兔42只，所有动物均随机抽取，雌雄不限，按内固定物分成两组：矩形髓内钉组；不锈钢接骨板组，每组动物21只。方法：以矩形髓内钉与不锈钢接骨板固定兔胫骨制作骨折内固定模型，骨折内固定部位为兔左胫腓骨交界下2mm处。手术前后用市售动物颗粒饲料分笼喂养，饮用自来水，自由活动，不用外固定。每组动物于内固定手术后1．3．7，14，21，28d分别处死3只，取骨折端骨痂及周围组织标本，进行组织切片和原位杂交处理。主要观察指标：观测并记录组织切片中不同细胞内的转化生长因子β1mRNA染色阳性强度和阳性面积比，显示兔骨折愈合过程中骨痂中转化生长因子β1mRNA的分布和含量。结果：共用实验动物42只，腹泻死亡3只，伤口局部感染骨外露3只，共6只未纳入结果分析，矩形髓内钉组和不锈钢接骨板组各3只，进入结果分析动物数36只。①在骨折早期，矩形髓内钉组和不锈钢接骨板组局部的细胞和间质中转化生长因子β1mRNA均无表达；7d后间充质细胞、成骨细胞、成软骨细胞中有转化生长因子β1mRNA阳性表达。②矩形髓内钉组和不锈钢接骨板组转化生长因子β1mRNA阳性染色强度、阳性面积比及阳性指数术后14d最高（12．36&;#177;0．58，0．19&;#177;0．05，2．35&;#177;0．20：10．24&;#177;0．65，0．13&;#177;0．03，1．33&;#177;0．10），28d最低（4．24&;#177;0．57，0．06&;#177;0．02，0．25&;#177;0．08：3．31&;#177;0．27，0．03&;#177;0．01，010&;#177;0．02），同期比较除术后7d阳性面积比外，其余矩形髓内钉组均高于不锈钢接骨板组，组问差异显著（P〈0．05，P〈0．01）。结论：矩形髓内钉较不锈钢接骨板更能促进细胞分泌转化生长因子β1,有利于骨折愈合。