N-乙酰半胱氨酸对哮喘小鼠Clara细胞及CC16的影响

目的:观察抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预对小鼠支气管哮喘模型Clara细胞数量及其分泌蛋白CC16表达的影响.方法:卵蛋白(OVA)致敏、滴鼻激发建立BALB/c小鼠哮喘模型.将小鼠随机分为对照组、哮喘组、NAC干预组,每组10只.应用免疫组化方法检测各组小鼠肺组织Clara细胞数量及细胞内CC16含量.Western印迹法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中CC16含量.结果:哮喘组小鼠终末及呼吸性细支气管上皮Clara细胞分别占上皮细胞的(58.05±3.75)%及(63.70±1.79)%,与对照组的(74.54±5.81)%及(78.46±1.68)%相比差异有显著性(P＜0.01);NAC干预组为(62.74±1.72)%和(67.47±3.53)%,与哮喘组相比有所增加(P＜0.05).同时,哮喘组Clara细胞内CC16含量较对照组明显减少(P<0.01);NAC干预后,促进了CC16的合成(P＜0.05).哮喘组小鼠BALF中CC16蛋白水平为(35.6±4.0),与对照组的(54.7±5.0)比较差异有显著性(P＜0.01);NAC干预组CC16蛋白水平为(44.1±3.2),与哮喘组比较差异也有显著性(P＜0.05).NAC干预组BALF细胞总数及嗜酸粒细胞比例较哮喘组均下降,气道炎症较哮喘组减轻.结论:哮喘小鼠的气道炎症可导致Clara细胞数量及CC16的合成及分泌量减少,抗氧化剂NAC可通过促进CC16的合成和分泌抑制气道炎症反应.     

胃癌GST-pi, P-gp, Top Ⅱ和nm23H1表达的意义.

目的探讨GST-π的表达变化与胃癌生物学行为、P-gp,Top-Ⅱ和nm23H1表达的相关性方法应用免疫组织化学(IHC)-催化信号放大(CSA)系统法检测66例胃癌组织GST-π、P-糖蛋白、Top-Ⅱ和nm23H1的表达.结果其GST-π、P-糖蛋白、Top-Ⅱ和nm23H1的阳性检测率分别为82%,77%,50%和58%.GST-π和Top-Ⅱ表达与胃癌组织学类型密切相关(χ2=6.45和χ2=5,P＜0.05);GST-π和nm23H1表达与淋巴结转移密切相关,GST-π呈正相关(χ2=10.048,P＜0.01),nm23H1呈负相关(χ2=24.78,P＜0.001);GST-π和P-gp高表达与＜3a生存期相关(χ2=9.506,P＜0.01和χ2=8.439,P＜0.01),nm23H1高表达与≥3 a生存期相关(χ2=10.89,P＜0.01).结论 GST-π与P-糖蛋白、Top-Ⅱ一样可作为肿瘤耐药的标志物,还可作为肿瘤分化程度,淋巴结转移和患者预后差的标志物.     

CD15抗原在胃癌组织中的表达及免疫电镜研究

为探讨CD15与胃癌发生发展和转移的关系,我们应用免疫组化法检测了胃癌组织中CD15抗原表达,并进一步用胶体金免疫电镜技术对CD15在大肠癌细胞内的分布特征进行了观察.     

体表海绵状静脉畸形中内皮细胞及平滑肌细胞分布与表型对血管塑形的影响

目的:研究内皮细胞、平滑肌细胞在体表海绵状静脉畸形中的分布与表型,并分析其发病机制和研究结果对疾病治疗和功能康复的意义。方法:实验于1996-06/2000-08在第二军医大学整形外科实验室完成。畸形组织25根,正常中小静脉各12根。苏木精-伊红染色观察比较畸形血窦壁和中小静脉壁中内皮细胞、平滑肌细胞的分布并计数分析。Envision法免疫组化染色,观察CD31,α平滑肌肌动蛋白在畸形和中小静脉中的分布。结果:畸形血窦壁中平滑肌细胞数量少,排列紊乱,平滑肌细胞与内皮细胞的比例显著低于微小静脉壁。畸形中CD31表达与中小静脉相似,但α平滑肌肌动蛋白的表达明显低于中小静脉,排列紊乱。结论:海绵状静脉畸形血窦壁中内皮细胞和平滑肌细胞发育不均衡,平滑肌细胞表型异常,导致血窦壁薄弱而在血窦内血液的压力下不断扩张,引起血管塑形障碍,这可能是病变发生和进展的原因。闭塞病理性血窦、阻断病变进展过程从而尽可能保留功能是临床治疗的重点。     

乳腺癌HER2基因扩增检测方法——显色原位杂交法的应用及优化

目的:应用显色原位杂交技术(chromogenic in situ hybridization,CISH)检测乳腺癌组织人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)基因扩增情况,并对操作方法进行优化.方法:选择免疫组织化学(IHC)EnVision法检测结果2 及以上的60例乳腺癌组织作为研究对象,应用CISH技术检测其HER2基因扩增情况,分析二者结果的相关性;总结CISH操作经验,优化操作方法.结果:44例标本IHC检测HER2蛋白表达为3 ,其中40例CISH检测呈现HER2基因高倍扩增,4例无扩增;基因扩增与蛋白表达的符合率为91%.16例IHC检测HER2表达为2 标本基因扩增与蛋白表达的符合率为50%.IHC与CISH符合率为80%(48/60),二者明显相关(P＜0.01).操作过程中应严格控制切片厚度,一般要求4～5 μm;杂交变性一定要彻底,杂交后的洗涤温度和时间也很重要,最好控制在70～75℃;要严格控制苏木精衬染时间;每次实验最好有阳性对照片,可以有效进行质量控制.结论:CISH检测乳腺癌HER2基因扩增的结果与IHC检测的蛋白表达结果符合率较高,可作为乳腺癌HER2基因检测的一项新技术;但在具体操作时,应注意严格控制切片厚度、消化及杂交后洗涤温度与时间以及苏木精衬染时间等因素.     

胰腺癌中血管形成因子和细胞粘附分子的表达研究

目的　探讨CD3 4 和血管内皮生长因子 (VEGF)、细胞间粘附分子 (ICAM 1)在胰腺癌(pancreaticadenocarcinoma ,PAC)组织、慢性胰腺炎组织 (chronicpancreatitis ,CP)中的表达及病理意义 ,明确血管形成在胰腺癌演化过程中所起的重要作用。方法　应用免疫组化Envission方法对 2 4例胰腺癌组织、2 4例慢性胰腺炎组织、7例正常胰腺组织 ,进行了CD3 4 、VEGF、ICAM 1的表达情况的检测。对CD3 4 阳性血管进行MVD计数 ,并结合胰腺癌的病理特征进行分析。结果　癌组织 (4 7 2±9 4 )和慢性胰腺炎组织 (4 0 8± 7 93)中微血管密度明显高于对照组 (9 85± 2 86 ) (P <0 0 1)。VEGF在正常胰腺组织中不表达 ,在胰腺癌组织中VEGF主要表达于肿瘤细胞和导管细胞的胞质中 ,在慢性胰腺炎组织中VEGF在叶间及叶内导管细胞均高表达。细胞间粘附分子ICAM 1在正常对照胰腺组织中未见表达 ,仅见于某些内皮细胞着色 ,在胰腺癌组织及慢性胰腺炎组织中 ,除内皮细胞高表达外 ,肿瘤细胞阳性表达亦较高 ,慢性胰腺炎中ICAM 1亦在叶间及小叶内导管细胞中高表达。结论　我们发现微血管形成及其调控因子、细胞粘附分子与慢性胰腺炎、胰腺癌的生物学行为密切相关 ,在胰腺癌的演变中亦起了不可低估的作用 ,抗血管形成治疗无论是对胰腺癌抑     

肝细胞癌中唾液酸化的路易斯寡糖-X抗原和P16基因蛋白的表达及其意义

目的 :探讨唾液酸化的路易斯寡糖 X抗原 (sialylLewis X ,SLeX)和P16基因蛋白表达与肝细胞癌 (HCC)转移和预后的关系。方法 :应用免疫组织化学方法 ,检测分析 110例HCC组织中SLeX及P16蛋白表达 ,结合随访资料分析。结果 :在HCC中 ,SLeX和P16阳性表达率分别为 3 9.1%和 3 4.5 %。SLeX阳性表达的HCC转移率高 (P <0 .0 5 )、分化程度和患者 >5年生存率低 (P <0 .0 5 ) ;P16阳性表达的HCC转移率低 (P <0 .0 5 )、分化程度和患者 >5年生存率高 (P <0 .0 5 )。表达SLeX与P16表达呈负相关 (r =- 0 .5 6,P <0 .0 0 1)。结论 :SLeX和P16表达与HCC转移和患者生存期密切相关 ,检测SLeX和P16蛋白的表达可作为判断HCC预后的参考指标     

实验性兔髂动脉再狭窄血管内皮素免疫组织化学研究

目的：观察兔髂动脉再狭窄（ＲＳ）组织内皮素（ＥＴ）免疫组织化学变化，探讨ＥＴ与ＲＳ的关系。方法：２０只雄性新西兰兔经高胆固醇饲料喂养至少６周，采用血管内皮剥脱术造成髂动脉粥样硬化（ＡＳ）性狭窄，１５只兔经球囊血管成形术获得了成功。应用免疫组织化学技术评价ＲＳ动脉壁组织ＥＴ免疫反应性。结果：ＲＳ髂动脉血管壁内皮素免疫反应性（ＥＴ－ＩＲ）较未经血管内皮剥脱术的对侧髂动脉壁ＥＴ－ＩＲ明显增加。结论：ＥＴ在球囊血管成形术后血管收缩及ＲＳ发生发展中可能起一定作用。     

乳腺癌中bcl—2的表达与激素受体的相产性

目的 探讨ｂｃｌ－２估人原发性乳腺癌中的表达及与激素受体的相关性。方法 利用免疫组织化学（ＨＣ）方法，检测１８０例人原发性乳腺癌组织中ｂｃｌ－２的表达及与ＥＲ，ＰＲ激素受体的相关性。结果 乳腺癌中ｂｃｌ－２，ＥＲ和ＰＲ的阳性符合率分别为５７．７８％（１０４／１８０），５２．２２％（９４／１８０）和３８．８９％（７０／１８０）。     

免疫金银法在电镜原位杂交中的应用

免疫金银法用于光镜免疫标记显示已较广泛,而应用于免疫电镜尤其是原位杂交的示踪报道甚少.在亚细胞水平的抗原、受体、病毒DNA示踪等,采用电镜免疫金显示具有极大的优越性.但在免疫电镜制样过程中受锇黑的影响,常常使阳性颗粒与细胞结构之间的反差减少.尤其是在观察细胞核内的标记较为困难.免疫金银法的应用可以提高阳性检出率,而且便于在低倍电镜下观察结果,具有定位较准确,示踪清楚的优点.既可单独采用免疫金示踪,又可联合应用,方便灵