碱性成纤维生长因子和神经生长因子联合应用培养成年大鼠海马神经干细胞向神经元样细胞的分化

背景:影响神经干细胞向神经元分化的因素很多,各种营养因子可以不同程度地刺激神经干细胞向神经元分化,如何使神经干细胞大量分化为神经元是研究的热点问题。目的:观察联合应用碱性成纤维生长因子和神经生长因子对成年大鼠海马神经干细胞为神经元的影响。方法:无菌条件下分离大鼠脑海马组织,传至第4代克隆球直径约为200μm时,滴加DMEM/F12+2%B27+20μg/L表皮生长因子+20μg/L碱性成纤维细胞生长因子,进行单细胞克隆培养,传代的神经干细胞分成空白对照组、碱性成纤维细胞生长因子组、神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子+神经生长因子组。观察传代后的克隆球进行神经干细胞免疫细胞化学染色鉴定,计数神经元特异性烯醇化酶阳性细胞率,检测神经干细胞向神经元的分化情况。结果与结论:①单细胞克隆培养后,克隆球细胞表达巢蛋白,诱导分化后神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白均呈阳性表达。②与空白对照组神经干细胞分化为神经元的比例比较,碱性成纤维细胞生长因子组、神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组+神经生长因子组均明显提高(P<0.05),且碱性成纤维细胞生长因子组+神经生长因子组神经元的比例最高(P<0.05)。提示,碱性成纤维细胞生长因子可以提高神经生长因子诱和神经生长因子均可促进神经干细胞向神经元分化,且二者联合应用效果更佳。     

碱性成纤维生长因子和神经生长因子联合应用培养成年大鼠海马神经干细胞向神经元样细胞的分化

背景：影响神经干细胞向神经元分化的因素很多,各种营养因子可以不同程度地刺激神经干细胞向神经元分化,如何使神经干细胞大量分化为神经元是研究的热点问题。 目的：观察联合应用碱性成纤维生长因子和神经生长因子对成年大鼠海马神经干细胞为神经元的影响。 方法：无菌条件下分离大鼠脑海马组织,传至第4代克隆球直径约为200 μm时,滴加DMEM/F12+2% B27+20 μg/L表皮生长因子+20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子,进行单细胞克隆培养,传代的神经干细胞分成空白对照组、碱性成纤维细胞生长因子组、神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子+神经生长因子组。观察传代后的克隆球进行神经干细胞免疫细胞化学染色鉴定,计数神经元特异性烯醇化酶阳性细胞率,检测神经干细胞向神经元的分化情况。 结果与结论：①单细胞克隆培养后,克隆球细胞表达巢蛋白,诱导分化后神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白均呈阳性表达。②与空白对照组神经干细胞分化为神经元的比例比较,碱性成纤维细胞生长因子组、神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组+神经生长因子组均明显提高(P < 0.05),且碱性成纤维细胞生长因子组+神经生长因子组神经元的比例最高(P < 0.05)。提示,碱性成纤维细胞生长因子可以提高神经生长因子诱和神经生长因子均可促进神经干细胞向神经元分化,且二者联合应用效果更佳。     

条件培养液对Wistar大鼠海马神经干细胞单细胞克隆增殖的影响

目的探讨神经干细胞(NSCs)条件培养液对其单细胞克隆增殖的影响。方法采用无血清培养法体外培养Wistar大鼠海马神经干细胞并进行传代培养,然后收集神经干细胞条件培养液。第四代细胞进行单细胞克隆,并将单细胞克隆细胞分为条件培养液组、无血清培养液对照组。通过MTT法比较两组细胞的增殖情况。单克隆培养细胞行巢蛋白(nestin)免疫细胞化学染色,诱导分化后细胞行神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、半乳糖脑苷脂(Galc)免疫细胞化学染色。结果单克隆培养后克隆球表达nestin,诱导分化后细胞表达NSE、GFAP、Galc,条件培养液组细胞增殖速度高于对照组。结论条件培养液能提高Wistar大鼠海马神经干细胞单细胞克隆的增殖速度。     

表达miR-10α的重组腺病毒的构建与鉴定

目的构建表达miR．10a的重组腺病毒（adenovirus,Ad）载体。方法用红色荧光蛋白mCherry基因替换穿梭质粒pDC316-EGFP—U6的增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）报告基因。利用表达siRNA的策略,合成编码miR-10a的长链DNA序列,双链退火后克隆至pDC316,mCherry—U6获得pDC316-mCherry—U6-miR-10α。pDC316-mCherry-U6-miR-10α与骨架质粒pBHGlox△E1,3Cre共转染HEK293细胞,包装成复制缺陷型重组腺病毒Ad-miR-10α空斑形成实验纯化、扩增、滴定重组腺病毒。Ad-miR-10α感染HeLa细胞后在荧光显微镜下观察mCherry表达,用RT—qPCR检测miR-10α表达。结果构建的pDC316-mCherry—U6-miR-10α序列正确,荧光显微镜下可见mCherry的表达,重组腺病毒Ad—miR-10α滴度为1．8×10^7pfu／mL,感染HeLa细胞后miR-10α表达较mock高40倍。结论成功构建了表达miR-10α的首组腺病毒．siRNA表达策略可用于miRNA的人工表达。     

神经干细胞的生物学特性和体外培养鉴定

神经干细胞(NSCs)是具有自我更新和多向分化能力的细胞,存在于胚胎、胎儿和成人的脑室下区、齿状回、纹状体、室管膜下区等部位。通过机械分离或酶消化法能从其存在部位分离出NSCs。当培养基中表皮生长因子(EGF)和成纤维生长因子(bFGF)浓度均为20ng·mL-1时,NSCs能通过对称分裂和不对称分裂在体外增殖,当培养基中bFGF浓度为1～10ng·mL时,NSCs可向神经元和胶质细胞分化。目前,表达Nestin、自我增-1殖和多潜能分化能力是鉴定NSCs的三大条件,但还没有NSCs特异性的鉴定方法。     

表达海肾荧光素酶的重组柯萨奇病毒B组3型质粒的构建及鉴定

目的 构建能表达荧光素酶的重组柯萨奇病毒B组3型(coxsackievirus B3,CVB3),以实现定量检测CVB3.方法 将荧光素酶基因克隆至CVB3基因组开放读码框起始位置,重组病毒基因组DNA转染HeLa细胞以恢复病毒、测序,评价重组病毒的荧光素酶表达,扩增重组病毒并测定重组病毒株毒力.结果 成功构建2个重组病毒质粒,转染HeLa细胞,表达海肾荧光素酶(humanizedform of Renilla Luc,hRLuc)、荧火虫荧光素酶(firefly luciferase,Luc)的pCVB3-hRLuc和pCVB3-Luc转染后第1代均可检测到hRLuc和Luc活性,但只有pCVB3-hRLuc转染细胞有明显细胞病变.扩增和纯化的CVB3-hRLuc病毒感染HeLa细胞可见明显细胞病变及hRLuc活性.扩增的CVB3-Luc没有观察到明显的细胞病变,且从第2代病毒开始就未能检测到荧光素酶活性.用HeLa细胞经空斑形成试验进行毒力测定,CVB3-hRLuc的毒力为1.4(107 pfu/ml).结论 成功构建了表达hRLuc的重组CVB3毒株CVB3-hRLuc,为定量研究CVB3感染打下基础.     

BN对IL-1β致热的抑制作用及POA和血中cAMP的影响

目的　研究蛙皮素的降大鼠体温作用及与cAMP的关系。方法　选择SD雄性大鼠 ,侧脑室微量注射蛙皮素、白细胞介素 1β ,观察大鼠体温变化情况 ,并测定下丘脑和血浆中cAMP含量。结果　①在侧脑室注射IL 1β诱导发热大鼠中 ,下丘脑及血浆中cAMP含量显著升高 (P <0 0 1,P<0 0 1) ;②BN能降低大鼠正常体温 ,cAMP含量亦随之显著降低 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ;③预先侧脑室注射BN能明显抑制大鼠IL 1β性发热 ,且cAMP含量亦明显下降 (P <0 0 1,P <0 0 5 )。结论　提示蛙皮素能抑制IL 1β发热 ,其机制有可能是通过抑制cAMP合成实现     

透明质酸修饰山柰酚纳米结构脂质载体的制备及对非小细胞肺癌细胞NCI-H1299的抑制作用

目的:制备以相对分子质量为200 000与1 300 000的透明质酸(hyaluronic acid, HA)修饰的山柰酚纳米结构脂质载体，并考察其对NCI-H1299细胞的抑制作用。方法:建立山柰酚含量的测定方法并进行方法学考察，采用熔融超声法制备山柰酚纳米结构脂质载体(KA-NLC),在此基础上以静电吸附法制备透明质酸修饰的山柰酚纳米结构脂质载体(HA-KA-NLC),通过EdU染色法、克隆形成试验、Hoechst染色法、细胞划痕试验、Transwell法分别考察所得制剂对NCI-H1299细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的抑制作用。采用激光共聚焦显微镜观察NCI-H1299细胞在1,2,4 h对不同制剂的摄取情况，同时采用Westen blot法考察所得制剂对上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)过程中的关键性蛋白表达的影响，初步探讨其对NCI-H1299的干预机制。结果:相对于KA-NLC,经过HA修饰后的HA-KA-NLC在抑制肿瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用更为突出，且有更为良好的摄取效果和EMT干预作用，而以200 0...     

温经汤药材不同炮制方法组方对小鼠体质量及脏器指数的影响

目的 通过制备不同炮制品温经汤(温经汤原方组、温经汤全方炮制组、温经汤君药炮制品组、温经汤臣药炮制品组),观察各组对小鼠体质量及脏器指数的影响，初步探讨温经汤中药品炮制前后对脏器指数的影响。方法 将ICR小鼠随机分组并分别连续给予温经汤原方、全方炮制品、君药炮制品、臣药炮制品及蒸馏水14 d。末次给药第2天称取小鼠体质量，摘取小鼠心、肝、脾、肺、肾，观察小鼠体质量及脏器指数变化。结果 与空白对照组比较，给药14 d后，各给药组对小鼠体质量无影响；温经汤原方组、全方炮制组、君药炮制组、臣药炮制组对脏器指数均无明显影响。结论 温经汤中药品炮制后对小鼠体质量及脏器指数无明显影响，可能无明显毒性，常规临床剂量下用药后是安全可靠的。