口服携带人血小板第四因子的减毒沙门氏菌对放射损伤的保护作用

目的以减毒沙门氏菌SL3261为载体研究通过口服途径血小板第四因子(plateletfactor4PF4)对小鼠放射损伤的保护作用。方法将携带PF4基因的真核表达载体pIRES2EGFP转化减毒沙门氏菌SL3261,通过口服途经1×108个3d个菌株的剂量饲服小鼠,在第3次饲服后12h小鼠接受700cGy剂量60Co全身照射。以绿色荧光蛋白(greenfluorescenceproteinGFP)、外周血象及流式的检测、骨髓集落培养、小鼠生存期的观察研究PF4对造血系统的保护作用。结果照射后SL3261PF4治疗小鼠的肝脏、脾脏、肾脏、小肠、外周血及骨髓分别检测到绿色荧光蛋白的表达。照射后第7和14天SL3261PF4组小鼠骨髓细胞总数(marrowmononuclearcellsMNC)、粒巨集落细胞形成细胞(granulocytemacrophagecolonyformingunitCFU-GM)和高增殖潜能集落形成细胞(highproliferatingpotentialcolonyformingcellsHPP-CFC)数量与对照组有明显差异(P<0.05),生存期明显延长。结论本研究首次证实以减毒沙门氏菌SL3261为载体,口服PF4基因治疗可以保护小鼠免受放射损伤,并促进放射损伤后小鼠的造血恢复。     

共焦显微镜引导下取材行人角膜缘上皮干细胞的体外培养及鉴定

背景目前严重的致盲性眼表疾病的治疗方法主要是自体或异体角膜缘干细胞移植,但存在着供体材料来源有限、术后免疫排斥等问题。体外培养角膜缘干细胞用于成为研究热点,优化其培养方法是提高培养效率的前提。目的以共焦显微镜作为指导进行取材,对人角膜缘干细胞进行体外培养和鉴定,为构建人角膜缘干细胞植片奠定基础。方法应用激光扫描共焦显微镜对10例10眼白内障术前检查的患者行全角膜及角膜缘分区扫描,记录角膜及角膜缘上皮层、前弹力层图像,对所有检查资料进行研究分析。依据共焦显微镜对角膜缘上皮层的结构分析,对眼库提供的正常供体角膜缘组织进行取材,实验共分6批取组织进行培养,共接种103张组织块。用组织块培养法、以羊膜为载体进行体外培养,分别在培养的第5天、第10天利用免疫荧光技术检测p63蛋白、细胞角蛋白19（CKl9）和角蛋白3（K3）及involuerin蛋白的表达对培养细胞的表型进行鉴定。结果共焦显微镜扫描显示,角膜缘上皮层细胞聚集成细长条索,呈栅栏状外观,其间可见大量高反光颗粒状物质;在基底部扫描时观察到“细胞岛”样现象;角膜缘部位斜切面观察可见上皮层下有排列整齐的乳头状突起。接种的103块组织块中出膜生长74块,平均出膜率为（68．62±16．94）％,平均出膜时间为（5．83±2．04）d,第3批和第6批组织块的出膜率明显高于第2批和第4批,差异均有统计学意义（P〈O．05）。第4批和第6批组织块的出膜时间明显长于第1、2、3、5批,差异有统计学意义（P〈0．05）。在培养的第5天和第10天,角膜缘干细胞表达p63蛋白的阳性细胞比例分别为4．05％和36．52％,CK19阳性细胞比例分别为26．07％和40．55％,K3的阳性细胞比例分别为57．88％和40．81％,表达involucrin蛋白的阳性细胞比例分别为64．66％和59．19％。结论在共焦显微镜引导下选取角膜缘组织进行角膜缘干细胞培养结果可靠,羊膜作为载体可以使体外培养的人角膜缘干细胞良好生长。     

真菌性角膜炎的临床转归及影响因素分析

背景 真菌性角膜炎预后差,致盲率高,了解影响真菌性角膜炎预后的主要危险因素有助于选择适宜的干预手段,对改善真菌性角膜炎临床转归至关重要. 目的 研究真菌性角膜炎对不同治疗方法的临床预后及其影响因素.方法 采用系列病例观察研究设计,纳入2013年1月至2014年1月在河南省眼科研究所确诊的真菌性角膜炎患者267例267眼,所有患眼均行裂隙灯显微镜检查、激光扫描共焦显微镜检查、真菌培养及病灶标本药物敏感性试验.对所有患眼均先采用联合抗真菌药物疗法,然后根据药物敏感性试验结果调整药物治疗方案.如药物治疗效果不佳,则根据病情择行角膜病灶切除联合结膜瓣移植术、板层角膜移植术或穿透角膜移植术.对患眼的临床预后情况进行分级,分析患眼病情转归的影响因素. 结果 267眼真菌性角膜炎患者中,抗真菌药物治疗后痊愈者185眼,药物治愈率为69.29％;60眼药物治疗后根据病情选择不同的手术进行治疗,真菌感染病灶得到控制,22眼因难治性青光眼或最终行眼内容物摘除术而丧失视功能,临床总体治愈率为91.76％.真菌培养结果显示,曲霉菌和镰刀菌为常见致病真菌.与其他菌种感染性角膜炎相比,曲霉菌感染角膜炎药物治愈率最低,不同菌种感染角膜炎患者药物治愈率总体比较差异有统计学意义(x2=11.350,P=0.002).曲霉菌感染角膜炎患者临床预后最差,不同菌种感染性角膜炎的不同等级预后眼数总体比较差异有统计学意义(H=31.285,P=0.013).真菌培养阳性患者药物治愈率为71.8％,明显高于真菌培养阴性患者的62.5％,差异有统计学意义(x2=8.75,P＜0.01);敏感药物数≥2种的角膜炎患者药物治愈率为77.5％,敏感药物数＜2种的角膜炎患者药物治愈率为52.3％,差异有统计学意义(x2=9.63,P＜0.01);2个组间不同等级临床预后眼数分布比较差异有统计学意义(H=24.281,P=0.021).真菌性角膜炎的病灶面积＞16 mm2、前房积脓＞2 mm、药物敏感性试验敏感药物数＜2种及致病菌种为镰刀菌或曲霉菌均为影响真菌性角膜炎临床预后的危险因素(均P＜0.05).结论 体外药物敏感性试验能较好地指导真菌性角膜炎的临床药物治疗,病灶面积＞16 mm2、前房积脓＞2 mm、药物敏感性试验敏感药物数＜2种及致病菌种为镰刀菌或曲霉菌者预后较差.     

罗哌卡因与舒芬太尼围手术期联合镇痛对直肠癌根治术患者免疫功能和血清肿瘤标志物的影响

目的:探究罗哌卡因与舒芬太尼围手术期联合镇痛对直肠癌根治术患者免疫功能和血清肿瘤标志物的影响.方法:将106例直肠癌根治术患者分为对照组47例和观察组59例,对照组患者行舒芬太尼静脉自控镇痛,观察组患者在此基础上行罗哌卡因腰方肌阻滞镇痛,观察2组患者手术前后免疫功能、肿瘤标志物及术后各时段疼痛程度.结果:观察组患者术后...     

活体及体外条件下对角膜上皮干细胞的定位

背景：眼表存在两种形式的上皮干细胞即角膜上皮干细胞和结膜上皮干细胞,角膜上皮干细胞在角膜上皮细胞更新和角膜透明的维持方面起着重要作用。 目的：采用活体激光扫描角膜共焦显微镜和免疫荧光染色技术相结合的方法,从活体和体外层面上对角膜上皮干细胞进行定位研究。 方法：收集2009年9月至2012年9月来河南省眼科研究所就诊的单侧角膜缘干细胞缺乏患者,使用活体激光扫描角膜共焦显微镜检查患者双眼,健侧眼为对照。扫描方位依次为中央角膜及上、下、左、右方的角膜缘,记录扫描图像并分析。眼球材料来自于河南省眼库,切取角膜中央和角膜缘组织,组织包埋剂包被、冰冻切片,切片厚度5-7 μm;免疫荧光染色技术检测p63、ABCG2、K3和Connexin 43在角膜中央及角膜缘上皮层的表达。 结果与结论：共有24例患者确诊为单侧角膜缘干细胞缺乏,活体激光扫描角膜共焦显微镜下患侧眼角膜病变区可见结膜细胞及杯状细胞;角膜缘区域Vogt栅栏状结构消失,色素细胞消失,取而代之的是大量纤维瘢痕化组织。免疫荧光染色示表达ABCG2和p63的细胞主要在角膜缘上皮基底层,尤其在近结膜侧的角膜缘及角膜缘中间部表达相对较高,而中央角膜上皮层细胞不表达;K3及Connexin43在角膜缘上皮基底细胞层不表达,中央角膜上皮全层表达。通过活体激光扫描角膜共焦显微镜观察及干细胞标记物检测显示角膜上皮干细胞主要存在于角膜缘外2/3区域的Vogt栅栏基底部及钉突结构中。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

睑缘炎患者睑板腺形态变化及其与干眼的关系

背景 睑缘炎是一种常见的眼表疾病,常累及睑板腺体,而睑板腺体所分泌的脂质是泪膜的重要组成成分之一.泪膜稳定性的破坏可导致干眼相关症状,可以说睑缘炎是干眼发病的因素之一,但二者之间的关系有待进一步研究. 目的 使用非接触式红外线睑板腺观察仪观察睑缘炎患者睑板腺腺体的形态,并与干眼相关检查进行相关性分析. 方法 采用病例观察的设计方法对睑缘炎患者睑板腺形态改变与干眼症的关系进行研究.选取2010年9月至2011年4月于河南省眼科研究所眼科门诊依据PPP标准诊断为睑缘炎的患者83例83眼,取得患者的知情同意后,在裂隙灯下行眼前节检查睑缘畸形评分、泪液分泌( Schirmer Ⅰ)试验、泪膜破裂时间(BUT)、角膜荧光素染色评分及结膜充血评分,采用泪膜干涉仪行泪膜形态分级,采用非接触式红外线睑板腺摄像仪行睑板腺腺体缺失分级,对睑缘炎睑板腺腺体缺失分级与上述检查结果的关系进行评估.结果 不同年龄组不同性别间睑缘炎的频数分布差异无统计学意义(x2=2.69,P=0.75).睑缘炎患者的睑板腺腺体缺失分级与年龄星弱的正相关(r=0.58,P=0.00),但与性别无明显相关性(r=-0.09,P=0.99);患者睑板腺体缺失与睑缘畸形评分及结膜充血评分均呈弱的正相关(r=0.64,P=0.00;r=0.50,P=0.00);与泪膜影像分级及角膜染色评分均呈弱的正相关(r=0.23,P=0.04;r=0.50,P=0.00),与BUT呈弱的负相关(r=-0.32,P=0.00),但与Schirmer Ⅰ试验结果无明显相关性(r=-0.05,P=0.69).不同年龄组男性和女性的睑板腺缺失分级评分差异无统计学意义(Z=-0.09,P=0.93).结论 睑缘炎可引起蒸发过强型干眼,且患者的睑板腺体随年龄的增长缺失程度加重.非接触式红外线睑板腺观察仪作为一种有效、快速、无刺激地观察睑板腺体形态的仪器,可作为一项常规检查来辅助诊断睑缘炎.     

三叉神经半月节射频温控热凝术对眼表的影响

背景 射频温控热凝术是目前普遍认同的治疗三叉神经痛最为有效的方法之一,是一种微创伤性神经损毁疗法.眼表的大多数感觉神经纤维来自三叉神经眼支,对维持眼表功能的完整性起重要作用.三叉神经痛患者用射频温控热凝术治疗后对眼表的影响尚不清楚. 目的 观察和分析三叉神经痛患者行射频温控热凝术后眼表感觉和功能的变化. 方法 对28例28眼三叉神经痛患者行三叉神经半月节射频温控热凝术,术前1d、术后3d、术后1个月进行眼部检查.检查项目包括:角膜知觉敏感度检查、泪液分泌试验I(SIt)、泪膜破裂时间(BUT)测定、角膜荧光素染色评分和共焦显微镜观察角膜上皮下神经.均以未行手术侧的眼作为对照. 结果 术前三叉神经半月节射频热凝术组与对照组的角膜知觉敏感度、泪液分泌量、BUT、角膜荧光素染色评分和角膜上皮下神经纤维的密度比较,差异均无统计学意义(Z=-1.511、-1.119、-0.428、-0.378、-0.854,P=0.131、0.263、0.669、0.705、0.393).术后3d三叉神经半月节射频热凝术组与对照组相比BUT无明显变化,泪液分泌量稍有增加,角膜荧光素染色数量增加,但差异均无统计学意义(Z=-0.620、-0.315、-1.732,P=0.535、0.753、0.083);角膜知觉敏感度相比下降,上皮下神经纤维数量减少,差异均有统计学意义(Z=-2.708、-2.813,P=0.007、0.005).术后1个月三叉神经半月节射频热凝术组与对照组的角膜知觉敏感度、泪液分泌量、角膜荧光素染色评分和角膜上皮下神经纤维的密度比较,差异均有统计学意义(Z=-3.888、-2.373、-3.311、-2.535,P=0.000、0.018、0.001、0.011).三叉神经半月节射频热凝术组术后角膜上皮下神经纤维与术前相比明显稀疏、纤细、连续性差;部分患者可见树突状细胞浸润.结论 三叉神经痛患者行射频温控热凝术后泪膜稳定性及泪液分泌量下降,可出现明显的干眼症状,角膜知觉敏感性与角膜上皮下神经纤维的数量也有不同程度的减少,术后应给予干预和治疗.