低浓度甲基硝基亚硝胍激活p38MAPK信号转导通路

在低浓度甲基硝基亚硝胍（MNNG）诱发猴肾vero细胞遗传不稳定的实验模型中,曾经证明受试细胞中酪氨酸磷酸化蛋白谱的改变和JNK/SAPK信号通路的激活. 同样条件下,现又发现p38MAPK及其上游激酶MKK3/MKK6,以及JNK/SAPK的上游激酶SEK1/MKK4的磷酸化程度增高,提示低浓度MNNG可通过激活MAPK家族的两条应激信号转导通路诱导细胞的应激反应,且不同通路之间可能存在交互作用。     

培养哺乳类细胞的药物代谢酶及其诱导(综述)

许多化学物要经过生物转化才能显现其遗传毒理作用。化学物的生物转化是一个复杂的多步骤过程,可分为二个相继的时相:第一相反应为通过插进或显露某些功能基因而修饰化学物的结构,这些反应包括氧化、还原、水解等;第二相反应为结合反应。在体内,许多组织都具有一定的生物转化能力,但肝脏为化学物代谢的最主要器官。在亚细胞水平,化学物的代谢定位于许多细胞器,但以内质网最为重要,后者含有丰富的     

稳定表达人细胞色素P450 1A2的HepG2细胞的建立及其代谢效应

目的：建立稳定表达人细胞的色素P450 1A2(CYP1A2)的HepG2细胞。方法：将所克隆的野生型CYP1A2 cDNA从重组质粒pGEM-CYP1A2中用Kpn Ⅰ／BamHⅠ双酶切，并亚克隆到哺乳动物细胞表达栽体pREP9中。再将重组质粒转化感受态大肠杆菌Top10，用氨苄青霉素抗性筛选和限制酶谱鉴定。改良的磷酸钙介导的细胞转染法将重组质粒pREP9-CYP1A2转染肝癌细胞HepG2，用RT-PCR技术对转基因细胞的CYP1A2mRNA表达作了分析，并用MTT法比较转基因细胞对黄曲霉素B1(AFB1)细胞毒敏感试验。结果：与HepG2细胞相比，HepG2-CYP1A2转基因细胞表达CYP1A2 mRNA，能增强AFB1的细胞毒作用。结论：建立了稳定表达CYP1A2的转基因细胞系，可用于由CYP1A2参与的毒理学与药物代谢研究。     

本室克隆的人细胞色素P450 1A1 cDNA序列特点

本实验室于 1994年用人羊膜ＦＬ细胞株 ,经逆转录 ＰＣＲ克隆了人细胞色素Ｐ4 5 0 1Ａ1ｃＤＮＡ ,经部分ＤＮＡ序列测定〔董海涛等 ,中国病理生理杂志 1995 ,11(4) :4 17- 4 2 1〕 .并建立了稳定表达ＣＰＹ1Ａ1的转基因细胞 ,其表达产物具有乙氧基异吩 口恶唑 Ｏ 去乙基酶活性 ,建立的转基因细胞有代谢活化苯并 [α]芘等多环芳烃的能力〔董海涛等 ,中国病理生理杂志 1996 ,12 (3) :2 2 5 - 2 2 9〕 .现用Ｔ7,ＳＰ6引物和重新设计的中间引物 ,根据Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ操作说明书 ,用ＢｉｇＤｙｅ标记的双脱氧链终止法反应 ,再在本实验…     

化学诱变剂诱发基因突变分子机理研究

应用一将突变靶基因与哺乳细胞组ＤＮＡ相分离的实验体系,证明化学诱变剂诱发的基因突变可发生在损伤碱基以外的正常序列中,并有突变谱特征和突变好发的序列特异性。它的发生依存于化学 变剂诱发的基因表达改变,应用ｍＲＮＡ差异显示和反义技术分到两个基因表达序列标识,其相关基因表达被阻断后可分别促进和抑制化学诱变剂诱发的非定标性突变。     

一个参与N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍诱发的遗传不稳定的cDNA片段的分离筛选

为研究甲基硝基亚硝基胍 ( MNNG)诱发猴肾vero细胞遗传不稳定的机理 ,采用 m RNA差异显示分离到的 MNNG处理后表达发生改变的表达序列标识 ( EST)相关基因进行功能筛选 .利用反义核酸阻断技术阻断其相应基因的表达 ,以筛选分离参与非定标性突变形成的 c DNA片段 .现筛选到 1 0号片段 ,其相关基因的表达被阻断后 ,MNNG诱发的 vero细胞非定标突变率下降至自发突变水平 ,提示 1 0号片段相关的基因是非定标突变发生的正相关基因 .     

THE EFFECTS OF TRANSCRIPTION AND TRANSLATION INHIBITION ON NONTARGETED MUTAGENESIS IN MAMMALIAN CELLS

在研究ＭＮＮＧ所致哺乳类细胞非定标性突变时相变化的基础上，以ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ（ＡＭＤ）和蛋白质合成抑制剂放线菌素酮（ＣＨＭ）在ＭＮＮＧ处理后非定标性突变频率最高的６ｈ点分别阻断ＤＮＡ转录和翻译，发现ＡＭＤ能使ＭＮＮＧ诱导的ｖｅｒｏ细胞非定标性突变率下降至对照水平，而ＣＨＭ则使其明显上升。提示ＭＮＮＧ引起的ＤＮＡ损伤能够通过诱导某些基因的表达或干扰某些蛋白质的功能而导致基因组遗传不稳定。     

化学诱导剂对培养细胞CytP450IA1基因mRNA水平诱导及肝组织该

化学诱导剂对培养细胞ＣｙｔＰ４５０ＩＡ１基因ｍＲＮＡ水平诱导及肝组织该基因基础表达水平的研究余应年，董海涛，吴健敏（浙江医科大学病理生理教研室及医学分子生物学实验室杭州３１００３１）细胞色素Ｐ４５０ＩＡ１（ＣｙｔＰ４５０ＩＡ１）基因表达可被多环芳烃类...     

携细胞色素P4501A1cDNA的高表达型重组载体构建及转基因细胞系的

携细胞色素Ｐ４５０１Ａ１ｃＤＮＡ的高表达型重组载体构建及转基因细胞系的建立董海涛，吴健敏，余应年，朱丽君（浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室杭州３１００３１）构建具高效、稳定、持续表达细胞色素Ｐ４５０基因产物的细胞系对建立更符合体内状...     

DL-111-1T对雌鼠肝脏及人羊膜细胞混合功能氧化酶活性的选择性诱导

以抗早孕药3-(2-ethylphenyl)-5-(3-methoxyphenyl)-1H-1,2,4-triazole(DL-111-1T)20 mg/(kg.d)预处理♀大鼠2 d,即可使动物肝微粒体。