从Hep-2细胞克隆hFGF-2 cDNA及序列分析

目的 从Hep-2细胞(人喉鳞癌细胞)克隆人的FGF-2cDNA,用于下一步构建携带hFGF-2cDNA的非复制型腺病毒载体。方法 设计和合成引物,提取Hep-2细胞的总mRNA,通过RT-PCR扩增出目的cDNA,然后将其重组到pGEM-T Easy载体中送测序分析。结果 经基因测序分析表明,从Hep-2细胞克隆的hFGF-2基因序列与已报告的序列,除在ATG后的第24位碱基发生无意突变外(由G-A),其他序列则完全一致。结论 从Hep-2细胞的总mRNA中成功克隆出hFGF-2的基因片段。     

可共表达骨保护素和碱性成纤维生长因子的复制缺陷型重组腺病毒

目的 构建共表达骨保护素(OPG)和碱性成纤维生长因子(FGF2)基因的复制缺陷型重组腺病毒,为应用基因工程技术联合组织工程技术治疗牙周病的研究打下基础.方法 以双表达质粒pIRES-OPG-FGF2为基础,构建含OPG和FGF2两种基因的双顺反子腺病毒穿梭质粒pSC/OPG-I-FGF2,通过与AdEasy腺病毒系统中的腺病毒骨架质粒进行同源重组获得可共表达两种基因的双顺反子复制缺陷型重组腺病毒质粒,经限制性内切酶线性化,转染复制缺陷型重组腺病毒DNA分子至293细胞.结果 293细胞出现典型病变,RT-PCR鉴定OPG和FGF2基因有转录,Westernblot显示可表达目的 蛋白OPG和FGF2.结论成功获得一株可共表达两种目的 基因的双顺反子复制缺陷型重组腺病毒FGAd/OPG-I-FGF2.     

A亚型人呼吸道合胞病毒G基因的克隆、真核表达

目的克隆A亚型人呼吸道合胞病毒（HRSV）G基因,构建G基因的真核表达载体,并进行表达和鉴定。方法自行设计引物,利用RT-PCR技术,从感染HRSV的HEp-2细胞中获得G基因片段,克隆到pGEM-Teasy载体,经核酸序列分析,进一步亚克隆到真核表达载体pcDNA3．1（＋）,酶切鉴定后,脂质体法转染COS-7细胞,RT-PCR和Western blotting鉴定基因转录和蛋白表达。结果真核表达载体pcDNA3．1（＋）G的限制性内切酶分析结果与预期一致,基因序列分析显示没有发生无义突变。转染COS-7细胞后,RT-PCR检测到G基因有转录,Western blotting分析观察到G蛋白特异性的表达条带。结论成功克隆A亚型HRSVG基因,并在真核细胞中获得表达。     

城乡健康孕妇不同孕周血清锌含量的调查分析

城乡健康孕妇不同孕周血清锌含量的调查分析魏静心，何金生，李同，项明燕，叶凤云，杨敏（北京儿科研究所营养研究室，北京１０００４５）锌对维持正常妊娠及胎儿的正常发育起着重要作用。测定血清（浆）锌浓度评价孕期锌的营养状况是目前应用最多的方法。为了解孕妇在不...     

缺锌的临床表现

A缺锌的概念 1.缺锌（亚临床状态锌缺乏） 指仅有生化及代谢指标的变化，并未出现形态学变化和临床症状、体征者。     

含铅汽油对北京市土壤及植物铅含量的影响

含铅汽油对北京市土壤及植物铅含量的影响崔康宁何金生周慧敏徐小华梁洪宋华琴等人报告［１］：我国城市儿童铅中毒的流行率高达５１．６％，反映了铅对儿童危害的普遍性和严重性。环境中的铅是儿童铅中毒的外剂量示标，是造成儿童铅中毒的根本原因。由于铅中毒对人类特别...     

T7 RNA聚合酶的克隆及其介导基因转录功能的鉴定

目的构建含T7RNA聚合酶(T7RNA Polymerase,T7RNP)的真核表达载体,同时构建含T7启动子、增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)和T7RNP转录终止信号的载体,并通过观察EGFP的表达推测T7RNP表达和T7表达系统介导基因转录的功能。方法根据编码T7RNP的基因序列,应用PCR技术从含有T7RNP基因的E.coli BL21(DE3)基因组中扩增编码T7RNP的基因片段,克隆至载体pcDNA3·1( )。同时从px8δt载体和pGEM-Teasy/EGFP上切下T7RNP识别的终止信号(terminator,TER)和编码EGFP的基因,克隆至载体pcD-NAII。将获得的两个重组质粒共转染BHK细胞。48h后,通过观察EGFP基因在真核细胞内的表达情况,推测T7RNP基因的表达及表达后识别T7启动子介导基因转录功能。结果成功构建了含T7RNP编码基因的真核表达载体pcDNA3·1( )/T7RNP和原核表达载体pcDNAII/EG-FP/TER,共转染BHK细胞后,可观察到EGFP表达的绿色荧光。结论T7RNP能顺利在真核细胞内表达,并通过与T7启动子和TER的相互作用,成功实现了EGFP基因的转录和表达。     

壳聚糖介导真核双表达质粒pIRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4转染兔骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

背景:发展一种安全有效的方法来促进骨缺损是修复重建外科面临的重要问题,自体骨移植仍是目前优先考虑的选择,但供区有限且不可避免地对供区造成新的损害;同种异体骨移植存在免疫排斥反应;非骨性材料移植物在临床实践中的并发症仍居高小下.目的:探讨壳聚糖介导真核双表达质粒pIRES-hVEGF121cDNNhBMP-4转染兔骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的可行性.设计、时间及地点:细胞基因工程学体外实验,于2007-09/2008 04在安徽医科大学与中国医科大学完成.材料:清洁级新西兰大白兔8只,南安徽医科大学实验动物中心提供.壳聚糖介导的真核双表达质粒pIRES-hVEGF121cDNNhBMP-4为课题组自行构建.方法:无菌条件下抽取兔骨髓,Percoll法体外分离培养骨髓间充质干细胞,通过换液和贴壁吹打法进行纯化扩增.第3代骨髓间充质干细胞80%融合后,按1×108L1密度接种,实验组采用壳聚糖介导的真核双表达质粒pIRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4进行转染,对照组不转染质粒,继续以含10%FBS的L-DMEM普通培养基进行培养21 d.主要观察指标:碱性磷酸酶及茜素红染色检测细胞分化情况,扫描电镜观察细胞结构变化.结果:转染14 d后实验组碱性磷酸酶染色呈强阳性表达,茜素红染色出现大量棕红色的钙结节,电镜观察细胞内含有大量碱性磷酸酶的小泡,细胞周围大量基质分泌;对照组碱性磷酸酶与茜素红染色均呈阴性,电镜干细胞内几乎没有含碱性磷酸酶的小泡.结论:兔骨髓间充质干细胞在体外经壳聚糖介导的真核双表达质粒pIRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4转染后,可定向分化为成骨细胞.     

复制缺陷型重组腺病毒rvAdG1VP7免疫学效果的研究

目的对1株可表达A组轮状病毒主要结构抗原VP7的重组腺病毒rvAdG1VP7的体内免疫学效果进行研究.方法通过灌胃和滴鼻2种途径对BALB/c小鼠进行免疫,并对免疫后小鼠体液和黏膜免疫进行分析.结果初次免疫后,2组小鼠均有应答,但血清IgG抗体滴度及阳转率不同.再次免疫后,显示出明显的加强效果.除了血清IgG外,小鼠还产生了较强的针对轮状病毒的血清IgA.滴鼻组在肺灌洗液和肠匀浆液中均可检测到SIgA,灌胃组仅在肠道检测到SIgA.滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组.对滴鼻组小鼠肺灌洗液IgG/SIgA的阳转率进行了比较,发现IgG的应答水平明显高于SIgA.免疫后小鼠血清中IgG的动态观察表明,抗体可长期持续至少半年以上.结论重组腺病毒载体rvAdG1VP7所取得的良好免疫学效果,为我国具有自主知识产权的新型轮状病毒基因工程疫苗的进一步研制奠定了基础.     

AB42体外聚集形态和结构动力学的特性

Amyloid β42 (Aβ42) aggregation plays a key role in the pathogenesis of Alzheimer’s disease. However, the morphology and structural dynamics in different stages of Aβ42 assembly are not well known. To investigate the dynamic properties of morphological and structural changes in the aggregation process of Aβ in vitro, transmission electron microscopy, western blot analysis and circular dichroism were used to observe the changes in morphology, immunoreactivity and secondary structure during Aβ aggregation, respectively. Results demonstrated that at 24 hours following Aβ42 aggregation in vitro, the structures of spherical granules from 5 to 10 nm and coils from 20 to 30 nm were visualized by transmission electron microscopy. Different immunoreactivities of the oligomers and fibers were detected by western blot analysis. The dynamic changes of the α-helix to β-sheet were confirmed by circular dichroism spectra. The dynamic properties of the morphological and structural changes in the aggregation process of Aβ42 in vitro were analyzed, which contributed to the identification of stable conditions of Aβ42 oligomer formation.