CagA对AGS细胞Ca2+相关蛋白磷酸化的影响

目的:分析幽门螺杆菌(H pllori)细胞毒素相关蛋白A(CagA)对人胃腺癌黏膜上皮细胞(AGS)Ca2 相关蛋白磷酸化的影响,进一步揭来H pylori的致病机制.方法:采用金属离子亲和吸附富集技术富集H pylori、H pylori CagA缺失株(H pylori △CagA)与AGs细胞相互作用4 h,以及培养相同时间的AGS细胞的磷酸化蛋白.利用二维凝胶电泳技术分离磷酸化蛋白,ImageMaster 2D分析软件识别差异蛋白,MALDI-TOF/OF质谱鉴定确认蛋白.结果:Hpylozi △ CagA作用的AGS细胞.与培养相同时间的AGS细胞比较表达量不变,而Hpylori △CagA作用的AGS细胞表达量发生了明显变化,表明此蛋白的变化是单纯由CagA引起的;此类蛋白点共鉴定出19个,其中3个蛋白点与Ca2 相关.钙离子结合蛋白(nucleobindin-2 precursor,CALNUC)在AGS细胞以及H pylori △CagA与AGS相互作用的2-D胶中表达量接近,而H pylori与AGS相互作用后该蛋白表达量明显降低.结论:H pylori △CagA进AAGS细胞可能会影响内质网、线粒体及高尔基体的钙稳态,诱发内质网、线粒体、高尔基体凋亡或增殖途径.而成为胃炎、胃溃疡、胃癌发生的诱因之一.     

中国三个地区幽门螺杆菌CagA羧基端多态性分析

目的分析我国不同地区幽门螺杆菌(H.pylori)的CagA羧基端可变区特征,比较CagA可变区序列差异。方法选取分离自西安、浙江、云南地区的41株H.pylori,PCR扩增CagA羧基端可变区。测序后使用Primer Premier 5软件将核苷酸序列翻译为氨基酸序列,使用Vector NTI Suit6软件将所有菌株的CagA羧基端可变区氨基酸序列进行比较分析。结果41株菌的CagA氨基酸序列可分为东亚型和西方型两类:38株分离株为东亚型模式,其中有31株为典型东亚型,7株为变异东亚型;1株分离株为典型的西方型模式,2株表现为片段缺失的变异西方型。结论中国不同地区H.pylori的CagA蛋白序列以东亚型模式为主,占92.7%(38/41);但在至少2个地区的菌株中发现有2株和1株菌CagA羧基端可变区为西方型模式。     

患者胃窦黏膜组织幽门螺杆菌real time-PCR检测与分离培养结果的一致性分析

  目的  针对胃黏膜组织标本的幽门螺杆菌（HP）感染诊断的real time-PCR检测和分离培养2种最常用方法进行结果一致性分析,为HP感染诊断方法的选择提供科学依据。  方法  在浙江省4个地区（萧山、温岭、苍南和湖州）各选取1所医院,采集2020年11月16日至12月7日送至杭州致远检验医学研究所进行HP分离培养和耐药性分析的全部患者胃窦部黏膜活检标本,共1 312份。 每份样本经研磨匀浆处理后分为2份,分别用于常规HP分离培养和real time-PCR检测（以cagH为检测靶点）,2种方法平行双盲进行。 检测结果的一致性及不同医院来源样本间的差异用χ2检验、Fisher精确检验以及独立样本t检验等统计学方法进行分析。  结果  1 312份样本中,分离培养法和real time-PCR法的阳性率分别为29.34%（385/1 312） 、28.51%（374/1 312）,差异无统计学意义（P=0.636）。 来自4所医院的标本,2种方法的检出率差异均无统计学意义（P=0.075）,二者在萧山某院、温岭某院、苍南某院、湖州某院样本以及总体样本中的Kappa值分别为0.84、0.89、0.75、0.91、0.85。 real time-PCR法的灵敏度和特异度分别为89.26%、100.00%。 在real time-PCR法检测阳性而培养阴性的样本中,检测Ct值为25.47～34.97,均值为30.90,90%的Ct值均≤34.46,频数最高组为29.00～30.00组。  结论  分离培养法和real time-PCR法在临床胃黏膜标本HP诊断中均可达到较高的检测效能,且2种方法检出结果一致性良好,可应用于HP个体化治疗,以便在做出HP感染诊断的同时提供受检者的药敏检测结果。 标本中HP菌量及标本的保存运输条件可能对结果产生重要影响。     

北京市零售鸡肉标本中弓形杆菌污染初步分析

目的 了解北京市零售鸡肉标本中弓形杆菌的污染情况。方法 随机购买北京地区6个农贸市场零售鸡肉样本60份，应用驱动增强双孔滤膜法对鸡肉样品进行弓形杆菌的分离培养，利用多重PCR及16S rRNA、rpoB基因测序的方法进行菌株及菌种鉴定。结果 60份零售鸡肉样本弓形杆菌的检出率为73.33%（44/60）。44份阳性标本中，共获得125株弓形杆菌分离株，其中以嗜低温弓形杆菌为主（91.20%），其次是布氏弓形杆菌（8.00%），斯氏弓形杆菌（0.80%）。两种及以上菌种混合污染率为15.00%（9/60）。结论 驱动增强双孔滤膜法可有效分离肉类样本中弓形杆菌。本地区零售鸡肉样本中弓形杆菌污染严重，鸡肉中嗜低温弓形杆菌的污染高于布氏弓形杆菌。     

幽门螺杆菌CagA抗原性多态性分析

目的 了解我国幽门螺杆菌CagA抗原性的多态性，为临床血清学诊断CagA阳性菌株感染提供实验依据，以及是否存在特定胃十二指肠疾病相关的CagA抗原性型提供线索。方法 采用Western blots方法，比较38株我国幽门螺杆菌分离株的CagA与3种不同胃肠疾病分离株兔免疫血清的反应强度。分析不同抗原性类型CagA与疾病的关系。结果 任何一种血清均不能识别所有CagSA，但任一CagA至少可被一种血清识别，多数菌株CagA的抗原性与CAPM N62接近；抗原性与NCTC11637接近的CagA可能与消化性溃疡相关，但不显著。结论 我国不同幽门螺杆菌菌株CagA抗原性存在明显多态性，血清学方法诊断CagA阳性菌株感染时应至少使用3种抗原或抗体，不同抗原性类型CagA与胃十二指肠疾病的关系有待进一步研究。     

基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱的克柔念珠菌遗传分化研究

目的在蛋白质水平明确克柔念珠菌的遗传分化特征，建立基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）的不同谱系克柔念珠菌的鉴定方法。方法选取20株克柔念珠菌，采用MALDI-TOF MS结合分析软件ClinProTools，确定克柔念珠菌不同谱系的质谱标志峰，构建基于遗传算法（GA）的分类模型，用于区分不同谱系的克柔念珠菌菌株，选择25株克柔念珠菌对该模型进行验证。结果利用20株克柔念珠菌构建的GA分类模型，反映模型正确鉴别能力的识别能力值（RC）为100%，反映模型处理测试谱图变异能力的交叉验证值（CV）为97.89%。 25株克柔念珠菌、150张谱图外部验证模型显示其分类能力为95.30%。 确定13个克柔念珠菌谱系相关的特征峰（m/z 3 971.40、3 136.95、3 427.33、2 405.28、2 996.73、2 913.95、3 376.97、6 736.13、5 819.03、4 045.16、5 869.00、3 618.10及3 946.14），可用于正确区分来自不同谱系的克柔念珠菌。结论本研究论证并确认了克柔念珠菌的群体遗传分化事件，同时也建立了一种简便而有效的快速谱系分型方法。     

2008－2014年间北京地区幽门螺杆菌耐药变迁分析

目的 分析北京地区2008－2014年幽门螺杆菌（HP）耐药的变化情况。方法 分别收集2008年5月至2010年10月和2013年3月至2014年1月北京地区接受胃镜检查的HP感染者的胃黏膜标本,对分离获得的HP菌株经系统鉴定后,采用E-test方法进行甲硝唑（MZ）、阿莫西林（AC）、克拉霉素（CH）、左氧氟沙星（LE）、莫西沙星（MX）、利福平（RI）、四环素（TC）、庆大霉素（GM）8种抗菌药物的耐药性检测,并进行对比分析。结果 分别收集到461份（A组）和1 848份（B组）胃黏膜标本,标本进行培养后获得412和1 483株HP菌株,菌株分离率分别为89.37%和80.25%。对A组中的412株和B组中随机选择的607株HP菌株进行耐药性检测的结果显示,2013年后HP对CH、LE、MX和RI耐药率明显上升,MZ耐药率略下降,AC、TC和GM耐药率仍保持较低水平。对CH、LE、MX和RI的菌株最低抑菌浓度（MIC）分布特征进行比较发现,2013年后HP的MIC水平不论是敏感菌株还是耐药菌株,都有明显升高。结论 2013年后北京地区HP菌株对CH、LE、MX和RI的耐药率呈上升趋势,同时表现为敏感菌株和耐药菌株MIC的明显增高,是造成HP根除率显著下降的关键因素,对HP耐药判断折点的调整势在必行。     

大蒜油对幽门螺杆菌的抑菌实验

目的：探讨大蒜油对幽门螺杆菌的抑菌作用。方法：将不同剂量的大蒜油分别加入含有HP8－1，NCC11639，J99菌株的培养皿中，37℃培养72h后观察最低抑菌浓度（MIC）。结果：大蒜油40μl/100l浓度时对3种菌株均有抑菌作用，MIC为90％，至500μl/100ml浓度时，3种菌株MIC达到100％。结论：大蒜油对幽门螺杆菌的生长有抑制作用。     

我国607株不同宿主来源弯曲菌耐药基因簇aadE-sat4-aphA-3分布分析

目的 了解不同宿主来源弯曲菌对氨基糖苷类抗生素的耐药现状,确定耐药菌株中氨基糖苷类耐药基因簇aadE-sat4-aphA-3的分布,并初步了解耐药菌株的菌型特征。方法 利用琼脂稀释法分析不同宿主来源菌株针对链霉素最小抑菌浓度(MIC),对耐药的221株菌通过聚合酶链反应筛查氨基糖苷类耐药基因簇aadE-sat4-aphA-3的分布情况。选取不同来源共100株耐药菌株进行多位点序列分型分析并进行聚类分析,获得耐药菌株的菌型特征及遗传相关性。结果 607株弯曲菌中共筛查到221株(36.41%)链霉素耐药株(MIC4 g/ml),其中腹泻患者来源菌株耐药率33.33%(78/234)、鸡来源菌株耐药率35.14%(123/350)、猪来源菌株耐药率86.96%(20/23)。空肠弯曲菌耐药率14.37%(51/355),结肠弯曲菌耐药率67.46%(170/252)。24株(10.86%)链霉素耐药弯曲菌中筛查到aadE-sat4-aphA-3耐药基因簇,分别来自腹泻患者14株、鸡4株、猪6株。100株耐药菌株共分为58种ST序列型。结论 结肠弯曲菌链霉素耐药率明显高于空肠弯曲菌,猪源弯曲菌耐药率显著高于人源和鸡源,空肠弯曲菌与结肠弯曲菌中均筛查到aadE-sat4-aphA-3耐药基因簇。     

胃镜下黏膜活检行幽门螺杆菌培养的耐药性与多因素分析

目的探讨北京地区胃镜下黏膜活检培养得到的幽门螺杆菌菌株耐药性情况以及影响耐药率的因素。方法对2013年4月~2014年3月820例胃镜检查快速尿素酶检测结果阳性的患者,采集胃窦及胃体部黏膜进行幽门螺杆菌培养,并对获得的幽门螺杆菌菌株进行阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑、左氧氟沙星、四环素、利福平药物敏感性试验。结果820例黏膜标本中,700例培养阳性,阳性率为85.4%(700/820)。总体耐药率方面,甲硝唑、左氧氟沙星、克拉霉素、利福平、四环素、阿莫西林的耐药率分别为63.9%(447/700)、54.4%(381/700)、50.1%(351/700)、18.0%(126/700)、7.3%(51/700)、3.7%(26/700)。多重耐药率方面,对全部6种抗生素敏感的菌株仅占9.9%(69/700),对单一抗生素耐药的菌株占27.1%(190/700),二重、三重、四重、五重、六重耐药率分别为29.6%(207/700)、24.3%(170/700)、7.4%(52/700)、1.6%(11/700)、0.1%(1/700)。单因素分析及多因素分析显示,克拉霉素在非溃疡性消化不良的患者中耐药率明显高于消化性溃疡的患者(χ2=11.619,P=0.001;OR=1.834,95%CI:1.366~2.424);甲硝唑耐药率在女性患者中明显高于男性患者(χ2=5.674,P=0.017;OR=1.486,95%CI:1.176~1.824);左氧氟沙星耐药率在中老年患者中明显高于青年患者(χ2=6.731,P=0.035;OR=1.204,95%CI:1.076~1.385),在女性患者中亦明显高于男性患者(χ2=6.693,P=0.010;OR=1.502,95%CI:1.181~1.786)。结论在北京地区,幽门螺杆菌对甲硝唑、克拉霉素及左氧氟沙星的耐药水平很高,对利福平的耐药率较高,对阿莫西林、四环素的耐药率较低,多重耐药情况也很严重。