346份临床呼吸道标本中肺炎支原体感染情况研究

目的了解肺炎支原体菌株培养特点及其引起疾病的临床特点,提高对肺炎支原体感染疾病的认识,为国内临床肺炎支原体的诊治提供数据支持。方法对346份临床咽拭子标本进行肺炎支原体分离培养与实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time PCR)检测,了解临床标本中肺炎支原体分离培养特点,对不同年龄段和不同类型临床标本中肺炎支原体感染率比对分析。结果 346份标本肺炎支原体的分离培养和real-time PCR检测阳性率分别为28.6%和32.1%;其中205例社区获得性肺炎病例中肺炎支原体感染率为52.2%,141例上呼吸道感染病例标本中肺炎支原体检测阳性率仅为4.2%,两组感染率差异存在统计学意义。肺炎支原体人群感染率有随年龄段增加而降低的趋势,但感染率在14岁的儿童组中与40岁以下的成年人组中差异无统计学意义。结论本研究表明肺炎支原体是引起社区获得性肺炎的重要病原,但在上呼吸道感染病例中少见;相比儿童病例而言,成人病例中肺炎支原体感染率也非常高,需引起临床更多关注。     

实时荧光定量-聚合酶链反应方法检测肺炎支原体

目的 建立一种快速、灵敏、特异的肺炎支原体实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time PCR)检测方法,以期用于临床肺炎支原体感染检测。 方法 通过测序分析和序列比对,选取肺炎支原体p1基因中保守区域设计特异性引物和荧光探针,建立和完善此real-time PCR检测方法,并进行扩增效率、灵敏度及特异度评价。与已报道的肺炎支原体常规聚合酶链反应(PCR)方法进行150份临床标本检测能力比较。 结果 建立的real-time PCR方法对肺炎支原体的检测限约为10 cfu。使用该方法对9株肺炎支原体ATCC标准株和30株临床分离株核酸扩增均为阳性;对10种其他支原体、13种常见呼吸道病原菌染色体及人类染色体扩增结果均为阴性。同时,临床标本的检测结果显示该方法检测灵敏度优于常规PCR。 结论 本研究建立的real-time PCR方法可快速、灵敏、特异地检测标本中肺炎支原体核酸,可适用于临床肺炎支原体诊断。     

幽门螺杆菌cagA长度多态性及其临床意义

目的探讨我国幽门螺杆菌（Hp）分离株细胞毒素相关蛋白A（cagA）基因的分布和多态性情况与Hp感染相关胃十二指肠疾病的关系.方法设计针对cagA基因中一段297bp保守序列以及cagA基因3′端可变区两侧保守序列PCR引物,通过PCR检测82株我国Hp菌株的cagA基因分布情况,及其中77株Hp cagA基因3′端可变区长度多态性.结果 82株Hp中,77株（93.9%）297bp cagA基因片段扩增阳性;包括297bp片段扩增阴性的2株在内,71（92.2%）株可扩增出cagA基因3′端可变区,其中主要为PCR产物长度约825bp的Ⅰ型.结论我国Hp菌株cagA阳性率极高,其3′端可变区主要为较短的Ⅰ型.     

幽门螺杆菌中国分离株vacA基因多态性分析

目的 分析幽门螺杆菌(HP)中国菌株vacA基因多态性.方法 对分离自中国7个不同地区、不同胃十二指肠相关疾病患者的119株HP,采用特异引物聚合酶链反应(PER)方法,对其vacA基因进行PCR扩增.根据核酸电泳中产物片段大小确定vacA等位基因类型并统计分析各型分布.对vacA基因核心片段进行PCR扩增和DNA测序,利用软件MEGA4.0对DNA测序结果进行聚类分析.结果 119株HP的vacA基因以sla、m2和il型为主,分别为97.5%(116/119)、68.9%(82/119)和91.6%(109/119).26.1%(31/119)为mlb;slb,mla未检出.vacA组合基因型以sla/m2/il为主(62.2%,74/119),sla/mlb/il次之(25.2%,30/119).不同地区、不同疾病来源菌株sla分布的差异无统计学意义(P>005).而m区基因多态性在疾病类型及分离地区间差异有统计学意义(P<0.01).不同疾病来源菌株间i区基因分型分布的差异无统计学意义,但不同分离地区菌株间差异有统计学意义(P<0.01).119株的vacA基因序列聚类为三个不同组群.结论 HP中国分离株vacA基因型以sla/m2/il组合型为主,sla分型结果与菌株分离地区及疾病类型无关.不同地区、不同疾病来源菌株m区基因分型不同.不同地区菌株vacA基因i区分型不同,但i区基因分型与菌株的疾病来源无显著相关性.

Abstract：

Objective To understand the polymorphism of Helicobacter pylori (H. pylori) vacA alleles in China. Methods A total of 119 H. pylori strains were isolated from different gastroduodenal diseases in 7 different geographic regions in China. vacA and its alleles were identified according to the length of PCR products with DNA electrophoresis. The distributions of vacA alleles were statistically analyzed. The core fragment of vacA was sequentially analyzed by software MEGA4.0. Results The alleles in vacA dominantly belonged to sla, m2 and il in the tested strains.The distribution appeared to be 97.5%(116/119) ,68.9%(82/119) and 91.6%(109/119),respectively.The mlb allele appeared to be 26.1% (31/119). slb and mla were not found. The major vacA recombination was between slaim2/il and 62.2% , followed by sla/mlb/il (25.2% , 30/119). No association was found between the distribution of sla allele and the clinical outcome, as well as the geographical regions (P>0.05). However, the distribution of m alleles showed significant difference both among the types of disease and the geographic regions (P<0.01), The present of i alleles did not show significant differences among disease patterns, but had significant differences between different geographic groups (P<0.01). Three clusters were identified among these 119 isolates according to the DNA sequence of vacA. Conclusion sla/m2/il appeared to be the main allele in H. pylori vacA isolates from China in this study. The distribution of m alleles in vacA was correlated both to the regions and the disease patterns. The presence of i allele was associated to the regions but not the disease patterns.     

胃癌相关幽门螺杆菌蛋白图谱特征初步分析

目的：寻找幽门螺杆菌(Hp)与胃癌相关蛋白。方法：利用双向电泳分离Hp的全菌蛋白，应用ImageMaster2Dv3．1软件对3株分离自胃癌患者的Hp菌株、1株胃癌动物模型菌株及9株分离自非胃癌患者的Hp菌株的蛋白图谱进行比较，对目的蛋白进行基质辅助激光解析及电离飞行时间质谱分析，应用Mascot软件进行蛋白搜库。结果：发现3种蛋白可能与胃癌相关，经肽指纹图谱鉴定，一种为配基神经氨酸胞苷酰基转移酶，其Mowse分值为79，序列覆盖率为32％，另两种蛋白在现有的质谱库中无明确匹配蛋白存在。结论：配基神经氨酸胞苷酰基转移酶可能为与胃癌相关的Hp特异蛋白，另两种为新发现的可能与胃癌相关的Hp特异蛋白，其相关机制尚待进一步阐明。     

幽门螺杆菌动物模型驯化菌株SS1与其初始菌株的差异蛋白质组分析

目的: 比较H pylori动物模型适应菌株SS1与其初发菌株10700间蛋白质组差异, 试图获得H pylori在小鼠体内适应过程中可能与定植能力增强相关的蛋白特征.方法: 在相同件下培养SS1菌株及其初始菌株, 并制备全菌蛋白样品, 相同实验条件下重复3次, 样品经二维电泳分离, 扫描获得数字化的电泳胶图像并用ImageMaster2D图像分析软件比较分析, 识别SS1与初始菌株间的差异蛋白点. 取3次制备的样品间的共同差异点进行胶内酶解, 经基质辅助激光电离解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF/MS)获得肽质量指纹图谱, 用Mascot软件在Swiss-Prot和NCBI数据库中搜索匹配蛋白.结果: 表达量有明显下降的11个点, 经鉴定对应10个蛋白: 4个属于H pylori的氧化还原系统, 即过氧化氢酶、超氧化物双歧酶、硫氧环蛋白和环氧蛋白还原酶;5个蛋白与代谢有关,即脯氨酸肽酶(proline peptidase)、果糖磷酸氢盐醛缩酶(fructose-bisphosphate aldolase)、无机焦磷酸酶(inorganic pyrophosphatase)、3-含氧酸辅酶A转移酶亚单位B(3-oxoacid CoAtransferasesubunit B)和延伸因子(elongationfactor P);另1个蛋白为假想蛋白HPAG0942.结论: H pylori在小鼠体内的定植适应过程中,伴有代谢酶表达的降低和抗氧化水平的减弱,提示代谢和抗氧化能力适度下调可能与菌株的定植力增强相关.     

肾囊肿治疗的探讨

目的:探讨肾囊肿的治疗方法。方法:对一组采用B超肾囊肿穿刺无水酒精介入治疗的病例作一回顾性总结分析。结果:27例囊肿穿刺均一次成功,术后3个月随访总有效率达96．29％(26／27),临床症状消失。结论:B超肾囊肿穿刺无水酒精介入治疗法,简便易行、疗效高、创伤小、安全,患者易于接受,不失为一种好的治疗方法,值得推广应用。     

部分非鲍曼不动杆菌耐药性及相关基因分析

目的了解目前非鲍曼不动杆菌临床分离株的耐药现状及耐药基因携带情况。方法随机抽取100株不动杆菌临床分离株,采用分子生物学方法筛选非鲍曼不动杆菌,用E-test方法检测非鲍曼不动杆菌对12种抗生素的耐药性,用PCR方法检测16种相关耐药基因的分布。结果共筛选出17株非鲍曼不动杆菌,7株为多重耐药(41.2%),其中对头孢噻肟的耐药率为100%,对氯霉素、哌拉西林、氨苄西林和氨曲南的耐药率分别为76.5%、76.5%、64.7%和52.9%,对多粘菌素B普遍敏感;检出6种耐药基因分别为ampC、blaTEM、blaPER-1、blaOXA-23-like、blaOXA-58和Int1。结论携带超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因和blaOXA-23-like基因为非鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类和碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因。非鲍曼不动杆菌的耐药形势严峻,应加强监测。     

传代培养对基于肽质量指纹谱的细菌识别稳定性影响分析

目的 应用肽质量指纹谱技术对多次传代细菌进行识别,分析细菌传代对细菌识别能力的影响。方法 将幽门螺杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌分别连续传57、50、100代,金黄色葡萄球菌留取抗原。每一代新鲜培养菌和冻存抗原通过乙醇/甲酸法提取蛋白,采用肽质量指纹谱技术进行谱图采集和菌株鉴定。进一步采用NanoLC-MS/MS对幽门螺杆菌基于肽质量指纹谱识别的蛋白进行批量鉴定。结果 幽门螺杆菌、大肠埃希菌分别连续传57代和50代,采用肽质量指纹谱每代均能正确识别到种水平;金黄色葡萄球菌连续传100代,采用肽质量指纹谱每代新鲜菌株及冻存抗原均能正确识别到种水平,各代冻存抗原和新鲜菌株的肽质量指纹谱具有很好的一致性。幽门螺杆菌蛋白扫描分析,鉴定出206个蛋白,包括各种酶类（29.6%）、核糖体蛋白（15.5%）、外膜蛋白（10.7%）、假想蛋白（19.0%）、转运相关蛋白（2.0%）、其他蛋白（22.0%）。结论 细菌连续传代和抗原冻存不影响肽质量指纹谱对菌株的正确识别,细菌的肽质量指纹谱具有传代稳定性。