幽门螺杆菌iceA基因亚型的表达与鉴定

目的克隆幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)26695、J99菌株中粘膜接触诱导因子(induced by contactwith epithelium,iceA)等位基因的iceA1、iceA2基因片段,并将其转入大肠埃希菌中,用IPTG诱导表达目标蛋白,为Hp相关感染菌型诊断奠定基础。方法根据标准菌株Hp 26695、Hp J99的iceA不同基因亚型的开放阅读框设计引物,用PCR方法分别从Hp 26695、Hp J99菌株的基因组DNA中扩增iceA1、iceA2基因片段,分别插入表达载体pET28a和pGEX-4t-1,构建重组表达载体pET28a/iceA1和pGEX-4t-1/iceA2,经序列测定鉴定后,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导重组质表达目标蛋白。表达蛋白经SDS-PAGE、飞行时间质谱鉴定。结果成功构建了重组表达载体pET28a/iceA1和pGEX-4t-1/iceA2,转入大肠埃希菌中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE和飞行时间质谱鉴定证实,表达目标蛋白量分别占细菌总蛋白的16.1%和14.2%。结论成功构建了可高效表达IceA1和IceA2蛋白的重组表达载体,为进一步开展相关疾病的诊断研究奠定了基础。     

波利特、达克普隆和Nexium对幽门螺杆菌的体外抑菌效果比较

目的：观察、比较质子泵抑制剂(PPI)波利特(雷贝拉唑肠溶衣片)、达克普隆(兰索拉唑胶囊)和Nexium对幽门螺杆菌(Hp)的抑制作用，初步解释近期临床流行病学资料所显示的不同PPI用于Hp根除治疗所表现的明显效果差异现象。方法：使用Hp国际标准株NCTC11637、NCTC11639和国内分离菌株CAPMN62，应用平板掺入法测定三种PPI对Hp的体外抑菌作用。结果：波利特在体外对Hp具有明显的抑制作用(MIC99为2．25mg／L)，其次为达克普隆(MIC99为42.5mg／L)，而Nexium抑菌作用不明显(MIC99为360mg／L)。结论：不同PPI对Hp的直接抑菌作用存在明显差异，其作用除本身化学结构的差异因素外，制剂中的其他复合成分的影响也不容忽视；亟待对体外抑菌效果与用于Hp感染治疗效果的相关性进行分析，以便更好地指导临床用药和相关幽门螺杆菌病的防治。     

雷贝拉唑钠对幽门螺杆菌的体外抑菌效果观察

目的观察质子泵抑制剂雷贝拉唑钠对幽门螺杆菌的抑制作用。方法应用平板掺入法研究雷贝拉唑钠(波利特)对幽门螺杆菌的体外抑菌作用。结果 发现雷贝拉唑钠在体外对幽门螺杆菌具有明显的抑菌作用(MIC99为2.25μg/ml),其体外抑菌作用强于奥美拉唑(洛赛克)。结论本研究结果提示雷贝拉唑钠对幽门螺杆菌的直接抑菌作用可能在幽门螺杆菌感染的治疗中有重要作用。     

双取代蒽醌-多胺缀合物的合成及其抗肿瘤细胞增殖活性研究

目的设计合成系列蒽醌-多胺缀合物,并对其体外抗肿瘤活性及其与DNA的结合能力进行初步评价。方法以1,4-二羟基蒽醌、1,8-二氯蒽醌等为起始原料,通过多步反应合成目标化合物;以米托蒽醌为阳性对照,采用MTT法测试目标化合物对K562、Hep G2、HT-29、HCT-116四种肿瘤细胞的体外细胞毒性;并对部分化合物进行了与DNA的结合实验。结果与结论合成了7个未见文献报道的新化合物,其结构经1H-NMR、APCI-MS和元素分析确认。体外活性实验结果显示,多数化合物对肿瘤细胞具有一定的抑制作用,化合物T2^T4尤其是化合物T3对Hep G2细胞和HCT-116细胞的生长抑制作用强于阳性对照物米托蒽醌。DNA结合实验表明化合物T3以嵌入方式作用于DNA,使鲱鱼精DNA-EB体系的荧光产生淬灭现象。     

幽门螺杆菌cagA基因全长克隆及序列分析

目的探索扩增cagA基因全长的PCR方法,克隆中国2株胃癌幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)分离株和1株十二指肠溃疡分离株及国际标准株SS1的cagA基因,初步探讨cagA序列和磷酸化位点变异及其临床意义.方法针对已知cagA基因两侧及cag致病岛右侧反转重复序列设计PCR引物,扩增cagA基因并克隆测序,分析已知cagA序列同源性及其酪氨酸磷酸化位点.结果3株中国Hp分离株cagA氨基酸序列的同源性约为94%(93.9%、94%、94.5%),并都有pY117/118/122和EPIYA-A、B、D 4个酪氨酸磷酸化位点.SS1株cagA与西方菌株同源性大于85%,而与中国菌株的同源性小于80%,具有pY117/118/122和EPIYA-A、B、C 4个酪氨酸磷酸化位点.结论建立的PCR方法可扩增cagA基因全长.CagA序列变异和磷酸化位点具有地区聚类特征,但与Hp感染临床结局无特殊关联.     

C群脑膜炎奈瑟菌部分蛋白表型特征分析

目的以蛋白质组学研究为基础,分析2003～2005年间我国流脑暴发流行期间C群脑膜炎奈瑟菌菌株分布特征。方法利用双向电泳技术获得66株2003～2005年流脑流行期内分离的C群脑膜炎奈瑟菌菌株及2株参考菌株的2-DE电泳图谱,并结合质谱分析的结果进行部分外膜蛋白和sucD蛋白表型分析。结果根据外膜蛋白和sucD蛋白将实验菌株共分为9型,其中安徽菌株分型结果显示出了高度的一致性,而其他地区菌株分型分布则显示出高度的多态性。结论安徽已经有优势菌型形成,但优势菌型还没在全国范围内出现,此类菌型分布和变迁的检测可能对认识流脑的流行规律和有效进行流脑疾病控制具有重要意义。     

截短的BabA蛋白结合区(C51)具有促进幽门螺杆菌AGS细胞黏附作用

目的 获得能与Lewis b结合的截短的BabA结合域,并评价其对幽门螺杆菌黏附人胃腺癌上皮细胞系(AGS细胞)的影响.方法 采用Swiss Model分析蛋白截短后的结构变化,克隆表达截短的BabA结合区蛋白,命名为C51,用Native-PAGE蛋白电泳法检测其是否为多聚体.用流式细胞术检测C51蛋白对J99和M5...     

高分辨率熔解曲线法检测饮用水中两种假单胞菌

目的 用高分辨率溶解曲线法分离鉴定包装饮用水和天然矿泉水中的铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌.方法 本研究以假单胞菌16S rDNA为靶基因,采用高分辨率熔解曲线的方法,利用一对引物同时鉴别铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌.结果 Tm值在83℃～84℃出现熔解峰为恶臭假单胞菌,Tm值在84℃～85℃出现熔解峰为铜绿假单胞菌.通过对...     

结肠弯曲菌Real-time PCR检测方法的建立(英文)

目的建立结肠弯曲菌实时PCR检测方法并评价该方法的可行性。方法BLAST与Vector NTI Suite 6.0筛选出结肠弯曲菌的特异基因ceuE作为检测靶基因,Primer 5.0和Oligo6.0设计引物和探针,优化实时PCR反应体系并评价其最低检测限、特异性、可重复性。结果与结论在结肠弯曲菌的ceuE特异基因上设计引物和探针,经优化了的实时PCR反应体系最低检测限为5.62CFU,特异度为100%,变异系数为0.15%～1.30%,本研究为结肠弯曲菌的快速检测提供了一种参考方法。