KDIGO指南解读：成人微小病变肾病和特发性局灶节段性肾小球硬化治疗

微小病变肾病(MCD)和特发性局灶节段性肾小球硬化(FSGS)是成人肾病综合征的常见病理类型。2012年6月发表的改善全球肾脏病预后组织(KDIGO)指南对多种原发及继发性肾小球肾炎的治疗给出了最新意见,对初发、复发、激素依赖和激素抵抗型MCD和FSGS患者的激素使用剂量、疗程及一线免疫抑制剂的选择等给予了建议。本文结合中国患者的特点对该指南关于MCD和FSGS治疗的建议做一解读。     

结核分枝杆菌含信号肽的Mtb8.4/hIL-12嵌合基因疫苗免疫保护效果研究

目前人类预防结核病的惟一疫苗——卡介苗（BCG）存在着不足，研制新型、有效、安全的预防结核病的疫苗成为国内外学者共同关注的一个重要课题。目前由于大多数结核病DNA疫苗的免疫保护效果尚不如BCG，因此，提高DNA疫苗免疫效力是目前结核病核酸疫苗研究的热点。本研究选择新近从结核杆菌培养滤液（CF）中纯化分离出的一种低分子量蛋白抗原——含信号肽的Mtb8．4（Ms）作为目的抗原，与人白细胞介素12（hIL-12）构建成结核病嵌合基因疫苗，旨在提高MS的免疫效力。     

重组HBsAg免疫逃逸突变体的表达及其抗原性分析

为了深入研究乙型肝炎病毒S基因变异所致的包膜抗原抗原性的改变，从含ＨＢＶＤＮＡ双拷贝的质粒载体ｐＥｃｏｂ６，获得一个８３７ｂｐ的ＨＢＶ－Ｓ基因片段，将其插入至载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＫＳ~＋的ＳｍａⅠ位点，通过体外寡核苷酸介导的人工定点突变分别获得第１４５位、１２６位和第１４５位＋１２６位氨基酸三种Ｓ基因变异型。然后将这些Ｓ基因变异片段克隆到真核表达载体ｐＭＥｐ４上，从而构建了含ＨＢＶ－Ｓ基因及其突变型的表达载体ＰＭＥｐ４ＨＢＶＳＭ。用其转染人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２，获得稳定分泌ＨＢｓＡｇ及其变异体的抗性细胞系。经体外初步研究表明，ＨＢｓＡｇ １４５位氨基酸变异体可影响ＨＢｓＡｇ的“ａ”抗原决定簇的结构。     

人IL-12表达质粒联合含信号肽Mtb8.4基因疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果

目的研究结核分枝杆菌含信号肽Mtb8.4(MS)基因疫苗与人白细胞介素12(hIL-12)联合免疫小鼠后,诱导的细胞免疫应答及对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。方法将40只C57BL/6N小鼠随机分为联合免疫组(MS基因疫苗 hIL-12组)、MS基因疫苗组、卡介苗(BCG)组、空载体组和PBS组。将基因疫苗、空载体和PBS,经肌内注射免疫各组小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次;BCG组经尾部皮下注射1×106CFU BCG免疫1次。采用ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中细胞因子的水平;用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测免疫小鼠细胞毒性T细胞的杀伤活性。用结核杆菌强毒株H37Rv静脉攻击小鼠后,计数肺和脾组织中结核杆菌的菌落数。对小鼠的部分肺和脾组织作病理切片,经HE染色观察组织病变的程度,经ZN染色检查抗酸杆菌,观察该疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。结果联合免疫组能诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,免疫小鼠脾细胞培养上清液中IFN-γ和IL-2的水平,与BCG组相当,显著高于MS基因疫苗组,IL-4分泌减少,特异性CTL的杀伤活性增强,对小鼠结核杆菌感染有较好的免疫保护效果。表现为小鼠肺和脾组织中结核杆菌的菌落数显著减少,组织病变明显减轻,其效果与卡介苗(BCG)组相当,但优于MS基因疫苗组。结论以hIL-12表达质粒与MS基因疫苗联合免疫后,能显著增强MS基因疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。     

不同类型的HBsAg真核表达质粒在EBV永生化B淋巴母细胞中的表达

目的探讨3种不同类型的HBsAg真核表达质粒在EBV永生化B淋巴母细胞中的表达. 方法用3种不同类型的质粒载体分别构建乙型肝炎表面抗原(HBsAg)真核表达质粒(pCI-S、pMEP4-S、 pLXSN-S);然后用阳离子脂质体介导的转染法分别转染正常人EBV永生化的B淋巴母细胞,经G418或Hygromycin B筛选出抗性细胞克隆,用RT-PCR检测抗性细胞总RNA中目的基因在转录水平的表达;用ELISA检测抗性细胞培养上清和细胞裂解液中HBsAg的含量. 结果 3种不同类型HBsAg重组表达质粒转染的EBV永生化B淋巴母细胞,在转录水平上,可检出HBsAg mRNA的表达;在蛋白水平上,细胞培养上清和细胞裂解液均可检出HBsAg;而以EB病毒表达质粒pMEP4-S表达最高,真核表达质粒pCI-S和逆转录病毒表达质粒pLXSN-S表达HBsAg的量无明显差异. 结论 3种不同类型的HBsAg真核表达质粒均可在EBV永生化B淋巴母细胞中稳定表达,EB病毒表达质粒pMEP4-S表达的HBsAg明显高于真核表达质粒pCI-S和逆转录病毒表达质粒pLXSN-S.     

乙型肝炎病毒转基因小鼠研究现状

由于HBV感染具有明显的种属特异性,只感染人及黑猩猩等灵长类动物,使乙型肝炎的研究一直缺乏理想的动物模型.转基因小鼠出生前就能在内源性HBV启动子的控制下,主要在肝脏内持续转基因表达,在肝细胞内没有HBsAg积累,也没有肝细胞病变,HBsAg以亚病毒颗粒的形式以9 000ng/ml的浓度分泌入血[1].这些小鼠对高水平的循环抗原耐受,不产生抗HBs,可被用作HBV慢性携带状态模型.本文对HBV转基因小鼠转基因表达、免疫耐受及打破免疫耐受的机理等作一简要综述.     

IL-10、TNF-α对慢性乙型肝炎患者树突状细胞的影响

目的 研究IL-10和TNF-α对慢性乙型肝炎患者树突状细胞的分化与功能的影响.方法 健康志愿者和慢性乙型肝炎患者各15例,取外周静脉血,分离获得外周血单个核细胞(PBMC),常规培养获得DC组.培养期间用IL-10刺激的为imDC组;TNF-α刺激的为mDC组;先后用IL-10、TNF-α刺激的为imDC+TNF-α组.各组收获细胞后分别检测反映DC成熟度的各种分子及其体外诱导的自体淋巴细胞增殖效应.结果 源于慢性乙型肝炎患者的常规培养的Dc在数量,HLA-DR、HLA-A、B、C和CD86表达,IL-12p70分泌及其诱导的淋巴细胞增殖效应,均低于健康者组(P＜0.01).源于慢性乙型肝炎患者的mDC与健康者mDC表达的HLA-DR、HLA-A、B、C和CD86比较无显著性差异;2组mDC诱导自体淋巴细胞增殖效应和分泌的IL12p70均明显增加,比较有显著性差异(P＜0.01);2组imDC的HLA-DR、HLA-A、B、C和CD86低表达,分泌的IL-12p70极低,不能强烈激活诱导淋巴细胞增殖效应,与DC组比较有显著性差异(P＜0.01).加入TNF-α刺激后HLA-A、B、C,HLA-DR,CD86仍低表达,分泌的IL-12pT0和淋巴细胞增殖效应仍较低.健康对照组、慢性乙型肝炎组的上清夜中IL-21的ELISA检测值均较低,无显著性差异.结论慢性乙型肝炎患者常规培养的DC在数量和功能上低于健康者.TNF-α可促进常规培养的DC成熟为mDC、IL-10可抑制DC成熟.慢性乙型肝炎患者的DC同健康者一样可进行有效的调控,分化成熟后功能强于健康者常规培养的DC,或可提高自体DC治疗性疫苗在不同免疫状态下的治疗效果.     

预存式自体输血在骨科手术中应用

目的:探讨预存式自体输血在骨科手术中的应用及疗效。方法:选择骨科具有良好适应证患者85例,采用“蛙跳术”等方法进行预存式自体输血。结果:患者顺利完成手术,采血及回输过程无任何不良反应。结论:预存式自体输血可大大减少输血量及术中并发症,避免同种异体输血的各种不良反应发生。     

结核分枝杆菌Mtb8.4基因疫苗与人白细胞介素12表达质粒联合免疫的细胞免疫应答观察

目的 观察结核分枝杆菌Mtb8.4基因疫苗与人白细胞介素12(hIL-12)联合免疫小鼠所诱导的细胞免疫应答.方法 15只C57BL/6N小鼠随机分为Mtb8.4基因疫苗 hIL-12质粒组(联合免疫组)、Mtb8.4基因疫苗组、卡介苗(BCG)组、空载体组和PBS组,基因疫苗、空载体和PBS经肌内注射法免疫各组小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次,BCG组经尾部皮下注射1×106 CFU BCG免疫1次.ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中细胞因子水平;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测免疫小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性.结果 联合免疫组能诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,免疫小鼠脾细胞培养上清液IFN-γ和IL-2水平(分别为1 493.340±8.128pg/ml、747.489±48.676pg/ml)显著高于Mtb8.4基因疫苗组,与BCG组相当,IL-4分泌减少,特异性CTL杀伤活性增强.结论 hIL-12表达质粒能够增强Mtb8.4基因疫苗所诱导的细胞免疫应答.     

鲁中南地区汉族ABO、Rh等主要血型系统抗原分布调查

目的　调查研究鲁中南地区汉族人群ABO、Rh等主要血型系统抗原分布状况。方法　采用血型群体遗传学研究方法 ,随机选择鲁中南地区汉族人群 2 172人 ,进行ABO、Rh、MN、P血型系统的表现型及基因频率分布调查分析。结果　(1)ABO血型表现型频率顺序B >O >A >AB ,基因频率r >q >p ,民族指数 =0 .88。 (2 )A2 表现型频率为 1.0 2 %。(3)Rh血型表现型以CCDee、CcDE多见 ,基因组合体频率CDe(0 .6 812 )最高。(4 )MN血型基因频率m =0 .4 95 1,n =0 .5 0 4 9。(5 )P血型基因频率P1 =0 .12 2 3,P2 =0 .8777,结论　鲁中南地区汉族人群ABO、Rh等主要血型系统抗原分布状况与北方汉族人群血型抗原分布特征基本相符