常见医院感染多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子标志物检测

目的了解浙江省湖州解放军第98医院从临床分离的常见医院感染多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子存在状况。方法从临床分离鲍曼不动杆菌60株、铜绿假单胞菌30株、阴沟肠杆菌20株、嗜麦芽窄食单胞菌19株和黄杆菌属15株(脑膜败血性黄杆菌12株、产吲哚金黄杆菌3株),采用聚合酶链反应及序列分析的方法检测Ⅰ类整合子标志物 int Ⅰ 1及qacE△1 基因。结果鲍曼不动杆菌、铜绿似单胞菌、阴沟肠杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌和黄杆菌属中 int Ⅰ 1基因阳性率分别为58.3%、0、95.0%、0和0,qacE△1基因阳性率分别为83.3%、83.3%、85.0%、10.5%和0。合计144株中 int Ⅰ 1和 qacE△1阳性株数(%)分别为54株(37.5%)、94株(65.3%),Ⅰ类整合子标志物总阳性率为68.1%(98/144)。结论解放军第98医院从临床分离的常见医院感染多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子携带率相当高。     

仅黏菌素敏感鲍曼不动杆菌多重耐药基因和整合子、转座子遗传标记研究

近年来,仅黏菌素敏感鲍曼不动杆菌(COS-AB)引起的医院感染倍受关注。我们对2004年5月18日分离自我院烧伤病人创面分泌物的1株COS-AB(编号为HZ8999)进行多重耐药基因和整合子、转座子遗传标记检测。该分离株用生物-梅里埃公司API 20 NE鉴定菌种;用ATB~(?)PSE 5药敏试验条板微量肉汤法测定氨苄西林/舒巴坦、替卡西林、替卡西林/克拉维酸、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢匹肟、亚胺培南、美罗培南、头孢他啶、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、环丙沙星、黏菌素、复方新诺明的敏感性,用K-B法测定氨曲南、头孢哌酮和头孢哌酮/舒巴坦的敏感性。根据CLSI 2005年版标准规定的     

常见医院感染多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子标志物检测

目的 了解浙江省湖州解放军第98医院从临床分离的常见医院感染多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子存在状况。方法 从临床分离鲍曼不动杆菌60株、铜绿假单胞菌30株、阴沟肠杆菌20株、嗜麦芽窄食单胞菌19株和黄杆菌属15株（脑膜败血性黄杆菌12株、产吲哚金黄杆菌3株），采用聚合酶链反应及序列分析的方法检测Ⅰ类整合子标志物int Ⅰ1及qacE△1基因。结果 鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌和黄杆菌属中intⅠ1基因阳性率分别为58．3％、0、95．0％、0和0，qacE△1基因阳性率分别为83．3％、83．3％、85．0％、10．5％和0。合计144株中intⅠ1和qacE△1阳性株数（％）分别为54株（37．5％）、94株（65．3％），Ⅰ类整合子标志物总阳性率为68．1％（98／144）。结论 解放军第98医院从临床分离的常见医院感染多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子携带率相当高。     

鲍曼不动杆菌启动子突变TEM-1型β-内酰胺酶基因研究

目的 分析浙江湖州地区临床分离的鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶(BLA)耐药基因序列，并确定其亚型。方法 采用微量稀释法对在2001年1月至2002年12月间自临床分离的39株鲍曼不动杆菌进行药敏试验、三维试验检测ESBLs，采用聚合酶链反应(PCR)技术检测TEM、SHV、OXA、CTX-M、PER及VEB型BLA耐药基因，并对7株TEM基因型阳性的分离株(编号分别为HZ08、HZ09、HZ17、HZ24、HZ35、HZ37、HZ40)进行耐药基因序列分析。结果 39株鲍曼不动杆菌TEM型BLA耐药基因PCR扩增均呈阳性，其余基因PCR扩增均为阴性。7株TEM基因测序结果表明他们的基因片段全长均含1022个核苷酸，经GenBank网上同源性比较，发现这些序列与广谱酶TEM-1(GenBank注册号：AF188200)的编码区域序列相同，但在启动子区域-47位点处均有1个核苷酸发生突变(G→T)。其中HZ40株的TEM-1序列已在GenBank核酸数据库中成功注册(GenBank注册号：AY263331)。HZ08、HZ09、HZ24、HZ35、HZ37和HZ40株ESBLs均阳性，HZ17株ESBLs阴性。结论 临床分离的鲍曼不动杆菌携带伴启动子区域核苷酸突变的TEM-1亚型BLA耐药基因，此基因可以导致ESBLs表型阳性。     

阴沟肠杆菌16S rRNA甲基化酶基因及氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的 了解临床分离的40株阴沟肠杆菌中16S rRNA甲基化酶基因及氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因存在状况.方法 在2003年9月至2004年11月从解放军第98医院住院患者中分离40株阴沟肠杆菌,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析5种16S rRNA甲基化酶基因(armA、rmtA、 rmtB、rmtC和rmtD)和9种AMEs基因[aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅲ、aac(3)-Ⅳ、aac(6'')-Ⅰ b、aac(6'')-Ⅱ、ant(3'')-Ⅰ、ant(2'')-Ⅰ和aph(3'')-Ⅵ].结果 40株阴沟肠杆菌中,6种基因rmtB、aac(3)-Ⅱ、aac(6'')-Ⅰ b、ant(3'')-Ⅰ、ant(2'')-Ⅰ和aph(3'')-Ⅵ的阳性株数分别为5株(12.5%)、11株(27.5%)、29株(72.5%)、13株(32.5%)、2株(5.0%)和2株(5.0%);其余8种基因均阴性;AMEs基因总阳性率为85.0%(34/40).对29株aac(6'')-Ⅰ b基因PCR阳性产物进行测序,证实有7株(24.1%)单独携带aac(6'')-Ⅰ b-cr双功能酶基因(GenBank:EF375620、EU159121),18株(62.1%)单独携带aac(6'')-Ⅰ b-Snzhou(苏州型,EU085533),3株(10.3%)同时携带aac(6'')-Ⅰ b-Suzhou及aac(6'')-Ⅰ b-cr 2种亚型,仅1株(3.4%)为aac(6'')-Ⅰ b经典型.结论 临床分离的40株阴沟肠杆菌中16S rRNA甲基化酶基因阳性率较低而AMEs基因阳性率很高,至少存在5种AMEs基因.     

多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因及亲缘性分析

目的 了解解放军第98医院临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌（MRPA）中抗菌药物相关耐药基因存在状况及菌株亲缘性.方法 在2003年9月-2004年10月间从临床分离30株MRPA,采用PCR及序列分析的方法分析24种基因blaTEM、blaSHV、blaOXA-10群、blaPER、blaVEB、blaIMP、blaVIM、blaGES、blaCARB、blaDHA、blaMIR、aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（3）-Ⅲ、aac（3）-Ⅳ、aac（6＇）-Ⅰ、aac（6＇）-Ⅱ、ant（3＂）-Ⅰ、ant（2＂）-Ⅰ、aph（3＇）-Ⅵ、oprD、qacE△1-sul1、catB、cml1,采用Average法进行耐药基因聚类分析以确定菌株亲缘性.结果 30株MRPA中blaTEM、blaOXA-10群、blaCARB、aac（3）-Ⅱ、aac（6＇）-Ⅰ、aac（6＇）-Ⅱ、ant（3＂）-Ⅰ、ant（2＂）-Ⅰ、qacE△1-sul1和cml1基因的阳性率分别为66.7%、3.3%、3.3%、76.7%、3.3%、33.3%、53.3%、26.7%、83.3%和3.3%,blaOXA-10群基因经序列分析确认为blaOXA-10型ESBLs,27株（90.0%）发生oprD基因缺失突变;其他基因均阴性;根据耐药基因聚类分析该30株MRPA可分4群,为医院感染所致.结论 临床分离的MRPA中至少存在10种耐药基因,oprD基因缺失突变率很高,MRPA可导致克隆传播医院感染,并存在暴发性流行.     

鲍曼不动杆菌ADC型AmpC β-内酰胺酶基因研究

目的了解浙江湖州解放军第98医院自临床分离的鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）中ADC型AmpC β-内酰胺酶基因（blaADC）存在状况。方法收集2000年7月-2002年12月所分离到的60株鲍曼不动杆菌，采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析blaADC基因。结果60株中有59株blaADC基因呈阳性（98．3％），序列分析表明4号菌株（原始编号HZB3944）blaADC基因为-新亚型，其核酸序列已登录GenBank（注册号EF569589）。结论鲍曼不动杆菌中blaADC基因阳性率很高，产ADC型AmpC β-内酰胺酶是本组菌株对β-内酰胺类抗生素耐药的重要原因之一。     

颅脑外伤者痰标本鲍曼不动杆菌多重耐药性及机制研究

目的了解浙江湖州解放军第98医院分离自颅脑外伤者痰标本鲍曼不动杆菌的（Acinetobacter baumannii）多重耐药性以及耐药机制。方法收集自2000年7月至2002年12月所分离到的27株鲍曼不动杆菌，采用ATB药敏试验条板微量肉汤法测定14种抗菌药物的敏感性，采用聚合酶链反应及序列分析的方法检测16种耐药相关基因，采用Average法对耐药基因进行聚类分析。结果除1号株外，其余26株均同时耐经典β-内酰胺类、氨基糖苷类和环丙沙星等抗生素，这些菌株在其染色体编码基因（gyrA基因）存在突变的同时还获得了1～2种β-内酰胺酶基因和1～4种氨基糖苷类修饰酶基因。根据耐药基因的聚类分析该27株鲍曼不动杆菌可分三群，为院内感染所致。结论鲍曼不动杆菌已呈多重耐药，β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因携带率较高，gyrA基因突变是对环丙沙星耐药的主要原因。     

鲍曼不动杆菌耐药性及β内酰胺酶基因型研究

目的 明确浙江湖州地区临床分离的鲍曼不动杆菌耐药性及β内酰胺酶基因型。方法 采用ATB药敏试验条板微量肉汤法测定临床分离的60株鲍曼不动杆菌对18种抗菌药物的敏感性，采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析β内酰胺酶基因型。结果 鲍曼不动杆菌对亚胺堵南、美洛培南的耐药率为1．7％，哌拉西林／他唑巴坦的耐药率为48．3％，对其他抗菌药物的耐药率均在50％以上。有18株菌株扩增到SHV型β内酰胺酶，17株为ESBLs SHV—12，另1株(HZ01株)扩增序列全长含826个核苷酸，与SHV—1相比，第35、191、238、240位氨基酸有不同，被命名为SHV-48(GenBank登录号：AY259164)。结论 浙江湖州地区临床分离的鲍曼不动杆菌耐药严重，至少存在3种不同类型的β内酰胺酶，基因型分别为SHV-12、SHV-48、TEM-1。     

44株阴沟肠杆菌耐药基因分析

目的了解解放军第98医院临床分离的阴沟肠杆菌耐药基因存在状况。方法采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析44株阴沟肠杆菌中15种耐药相关基因。结果44株中,12种基因blaTEM、blaOXA-1群、blaMIR、blaDHA、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ、intⅠ1、qacE△1-sul1、dfrA1、dfrA17、qnr的阳性株数分别为24株(54.50%)、3株(6.82%)、35株(79.50%)、5株(11.40%)、11株(25.00%)、31株(70.50%)、15株(34.10%)、38株(86.40%)、36株(81.80%)、1株(2.27%)、20株(45.05%)、3株(6.82%),bla0XA-1群基因PCR产物经序列分析确认为blaOXA-1型广谱β-内酰胺酶基因,其他3种基因blaSHV、blaCTX-M-1群、blaOXA-10群均阴性。结论临床分离的阴沟肠杆菌至少存在12种耐药相关基因;在阴沟肠杆菌中检出blaOXA-1、dfrA1、dfrA17和qnr基因均为国内首次报道。