流式细胞术检测冠心病患者外周血白细胞唾液酸黏附素的表达及临床意义

目的观察唾液酸黏附素（Siglec-1）在冠心病（CHD）患者外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞上的表达水平,并探讨其在冠状动脉粥样硬化发病过程中的作用。方法流式细胞术检测57例CHD患者及38名正常对照者外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞Siglec-1的百分率;生化常规测定所有人选者血脂水平。结果流式细胞仪检测发现,Siglec-1在正常对照组及CHD组淋巴细胞和中性粒细胞上均无表达;CHD组单核细胞Siglec-1阳性率为（12．74-2．4）％,显著高于正常对照组[（1．0±0．3）％,P〈0．01],而CHD血脂正常组和血脂异常组的Siglec-1阳性率差异无统计学意义。结论作为单核巨噬细胞激活的标志,Siglec-1在外周血淋巴细胞和中性粒细胞上不表达,在正常人单核细胞上表达很低。CHD患者单核细胞Siglec-1表达明显升高,提示CHD患者外周血单核细胞已经激活,发生巨噬细胞化,Siglec-1在单核细胞黏附血管内皮及CHD的发病过程中可能起重要作用。     

肿瘤标志物CEA和CA19-9在消化系统恶性肿瘤中的诊断效率评价

目的以病理诊断为金标准，运用流行病学理论较全面分析与评价血清CEA和CA19-9对消化系统肿瘤的诊断效率和临床意义。方法应用电化学发光免疫分析法测定消化系统272例恶性肿瘤及167例良性疾病患者血清CEA和CA19—9水平，对其敏感性、特异性、准确性、阳性预测值、阳性似然比和优势比进行比较分析。结果单检CEA和CA19-9诊断消化系统恶性肿瘤的敏感性分别为34.2％和45.2％，联检49．3％；特异性80.8％和60．5％，联检59.3％；准确性由单检的51．9％（CEA）和51．0％（CA19-9）提高至53．1％（CEA和CA19—9）；阳性预测值74.4％和65．1％；阳性似然比1.8和1.1;优势比2.19和1.260结论消化系常见肿瘤中，CEA诊断胰腺癌的敏感性最高，胆囊胆管癌和结直肠癌次之；特异性和阳性似然比以胆囊胆管癌最高。CA19-9诊断胆囊胆管癌敏感性最高，胰腺癌次之；特异性、阳性预测值、阳性似然比均以胰腺癌最高，并且诊断胰腺癌的优势比大于10。除胃癌及食道癌外，CA19．9敏感性高于CEA，联合检测CEA和CA19-9可提高诊断敏感性和准确性，但就阳性预测值和阳性似然比而言，单检CEA和CA19．9对某些器官肿瘤的诊断意义更大。     

悬浮阵列技术在研究与临床中的应用

悬浮阵列技术是一种以荧光编码微球为核心,集流式细胞、激光分析、高速数字信号处理等多种技术于一体的多指标并行分析技术平台,可一次同时准确定量检测100种不同的生物分子;具有高通量、高灵敏度,并行检测等特点;常用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体、配体识别分析等研究.     

定量RT-PCR检测PBC患者外周血中颗粒溶素的基因表达水平

目的建立检测人颗粒溶素(granulysin,GNLY)mRNA含量的实时荧光定量RT-PCR的方法,并测定PBC患者外周血单个核细胞(PBMC)中GNLY的基因表达水平,探讨GNLY基因表达水平与原发性胆汁性肝硬化(PBC,primarybiliary cirrhosis)发生发展的关系。方法基于TaqMan荧光探针技术,构建质粒pET28a-GNLY,作为定量模板,建立实时荧光定量RT-PCR方法。用此方法测定了60例PBC、60例乙型肝炎肝硬化及60例健康对照者外周血中GNLY mRNA的含量。结果PBC患者GNLY mRNA的表达范围为5.35×107-4.61×109拷贝/μg RNA;健康对照者为9.28×105-7.32×107拷贝/μg RNA。PBC组GNLY mRNA的平均拷贝数显著高于健康对照组(P<0.01)和疾病对照乙型肝炎肝硬化组(P<0.001)。结论成功建立了人GNLY基因表达含量的荧光定量检测方法,PBC患者GNLY mRNA的含量显著高于健康对照组,GNLY表达与PBC的发生发展存在一定的关联性。     

M2抗体重组人源靶抗原二联体在原发性胆汁性肝硬化患者中的检测及应用

目的 利用重组抗原BCOADA-E2和PDC-E2的二联体（BP），检测PBC患者血清中的M2抗体并探讨其临床意义。方法 经Ni—NTA亲和柱纯化重组表达的BP融合蛋白，分别建立免疫印迹法（IBT）和酶链免疫吸附（ELISA）法检测60份PBC患者血清，以60份其他肝病患者、60份自身免疫病患者、80例正常人血清为对照组。结果 经常规试剂盒检测为M2（＋）的60份患者血清，利用重组抗原检测阳性53例，阴性7例，阳性率为88．3％；经常规试剂盒检测为M2（-）的60份自身免疫病患者血清、60份其他肝病患者和80例正常人血清，利用重组抗原检测为M2（-）。结论 利用重组抗原BP检测M2抗体敏感性较高。对临床辅助诊断PBC提供一定的手段。     

免疫监测研究与应用中值得关注的几个问题

免疫监测是免疫检验中的重要组成部分,包含从细胞到生物分子等多种指标.在此重点讨论3个问题:首先,T淋巴细胞是所有免疫应答的中心环节,对其进行检测,对了解免疫相关疾病非常重要.在临床检验中应根据实验室条件(如流式细胞仪)和检测目的 (如抗原特异性T淋巴细胞数量或功能)选择不同方法.其次,自身抗体是诊断自身免疫性疾病的重要指标;有些自身抗体甚至可预测疾病的发生,越来越多研究表明,肿瘤患者中存在多种自身抗体,这些自身抗体有可能对肿瘤诊断、治疗肿瘤靶分子的筛选提供帮助.另外,检测细胞因子是了解疾病免疫学机制的重要途径;细胞因子检测有助于判断疾病活动程度,但不具有器官或组织特异性;应加强细胞因子检测的质量控制,以提高其在临床检验中的应用质量.     

临床免疫学与免疫新技术在临床应用的机遇与挑战

临床免疫学是免疫学的一个重要分支,是架起免疫学和临床医学的桥梁.近年来,固有免疫理论、Th17细胞的概念和意义、调节性细胞理论等临床免疫学理论的突破,以及各种临床免疫学新技术--芯片技术、组学技术、酶联免疫斑点、流式细胞术及相关临床免疫学新技术的发展,促进了多学科的交融,也推动临床免疫学技术向自动化、智能化、高通量方向发展的进程.同时,亦给临床检验工作的提高和发展带来前所未有的机遇与挑战.     

实时荧光定量PCR测定人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因表达

目的 建立检测人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因表达含量的实时荧光定量逆转录(FQ-RT)-PCR法,探讨其在健康对照者、乙型病毒性肝炎肝硬化患者及原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达状况.方法 设计TRAIL基因的特异性引物和TaqMan-MGB探针,以β-actin基因为内参,RT-PCR扩增目的 片段.胶同收纯化目的 片段,构建克隆载体作为定最模板,在ABI Prism7000型荧光定量分析仪上进行扩增,建立标准曲线;同时检测30名健康对照者、30例PBC患者及25例乙型病毒性肝炎肝硬化患者外周血PBMC中TRAIL基因的荧光强度和循环阈值,计算样本中TRAIL基因的起始拷贝数.结果 FQ-RT-PCR检测TRAIL mRNA的线性范围为103-106拷贝/ug RNA(r=-0.997);高浓度样本批内和批间变异系数(CV)分别为5.6%和6.3%.低浓度样本批内及批间CV分别为12.5%和14.6%.PBC患者TRAIL mRNA表达量为[(3.3±2.5)×105拷贝ug RNA],高于健康对照组[(0.5±0.2)×105拷贝/ug RNA],两组差异有统计学意义(t=5.994,P<0.01);乙型病毒性肝炎肝硬化患者TRAIL mRNA的表达[(2.1±0.9)×105拷贝/ug RNA]亦高于健康对照组,且差异有统计学意义(t=8.536,P<0.01),而两疾病组间差异无统计学意义(t=1.988,P>0.05).结论 成功建立检测TRAIL mRNA的FQ-RT-PCR法,并初步发现TRAIL mRNA在PBC及乙型病毒性肝炎肝硬化患者外周血PBMC中表达升高,这将对肝硬化肝损伤机制研究提供新的思路.     

原发性胆汁性肝硬化模型中淋巴细胞增殖及活化诱导凋亡机制研究

目的 通过检测原发性胆汁性肝硬化(PBC)动物模型肝脏和脾脏淋巴细胞增殖及活化诱导凋亡(AICD),了解PBC模型小鼠的免疫耐受情况.方法 聚肌苷酸胞嘧啶核苷酸(polyI:C)5 mg/kg剂量注射C57BL/6小鼠建立PBC模型,分离肝、脾淋巴细胞并纯化CD4~+T淋巴细胞,然后以M2蛋白及刀豆蛋白A(ConA)结合抗-CD3刺激细胞增殖及AICD,定量PCR和免疫印迹技术检测凋亡相关基因及信号蛋白.结果 ①M2蛋白刺激后,空白对照组和PBS组的细胞增殖能力(分别为0.1988±0.0111和0.2068±0.0115)差异无统计学意义(P>0.05),但是PBC组小鼠细胞增殖能力(0.358±0.022)与以上两组相比显著增强,且PBC组小鼠肝内淋巴细胞增殖能力强于脾淋巴细胞(P<0.01).②空白对照组和PBS组之间AICD情况差异无统计学意义(74.70%±4.58%比74.20%±4.44%,P>0.05),但均显著高于PBC组(44.85%±6.47%,P<0.01),同时PBC组小鼠肝内CD4~+T细胞的凋亡率显著低于脾脏(P<0.01).③PBC组小鼠肝脾淋巴细胞FasL、TRAIL基因的表达较PBS组均明显降低(P<0.01),而Fas表达无明显改变.④PBC组小鼠CD4~+T细胞长构型Fas相关死亡区域样白细胞介素-1β转化酶抑制蛋白(FLIP_L)表达明显升高,且肝内T细胞表达较脾脏显著增加(P<0.01).结论 FLIP_L表达增高可能是AICD受到抑制的重要原因,同时FasL和TRAIL mRNA表达降低可能也起到一定的作用.     

人源M2三联体靶抗原检测抗体诊断原发性胆汁性肝硬化

目的 探讨用人源M2三联体靶抗原检测M2抗体在原发性胆汁性肝硬化诊断中的应用价值。方法 间接免疫荧光法检测肝病患者，自身免疫病患者和健康体检者血清中的抗线粒体抗体。以人源M2三联体靶抗原建立的ELISA法与以猪心肌纯化组分作为抗原的免疫印迹法商业试剂盒检测M2抗体。结果 20例原发性胆汁性肝硬化（PBC）均检出M2抗体，28例不明原因肝病6例M2抗体阳性。ELISA法的敏感性和特异性优于经典的间接免疫荧光法和商业试剂盒。结论 以人源M2三联体靶抗原建立的ELISA法具有很高的特异性和敏感性，为原发性胆汁性肝硬化的诊断提供了简便、快速而有效的手段。