原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中Tim-3 mRNA表达增高及其意义

为研究Tim-3是否参与了原发性胆汁性肝硬化(PBC)的发病机制,我们采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测了38例PBC患者及30例健康者外周血单个核细胞(PBMC)中Tim-3mRNA的相对表达量,并分析Tim-3mRNA表达与PBC患者Mayo危险评分和碱性磷酸酶(ALP)之间的关系。结果表明,PBC患者外周血PBMC中Tim-3mRNA表达较健康对照组明显增高(P<0.01),且与Mayo危险评分呈正相关(r2=0.31,P<0.01),与血清ALP水平呈负相关关系(r2=0.37,P<0.01)。本研究表明Tim-3可能参与了PBC的发病机制,同时还是PBC的潜在标志物。     

原发性胆汁性肝硬化基因易感性的研究进展

原发性胆汁性肝硬化（PBC）是一种由自身免疫机制介导的慢性进行性胆汁淤积性肝脏疾病。近年来，其发病率逐年增长，研究表明谷胱甘肽S转换酶（GST）、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）、血管内皮细胞一氧化氮合成酶（eNOS）、人类白细胞分化抗原（HLA）、IL-10、细胞角蛋白19（CK19）、甘露糖结合凝集素（MBL）、IL-1、TNF-α基因以及x染色体关联的基因等可能与PBC相关。我对与PBC易感性相关的基因的研究进展进行综述，为今后的研究提供一定的依据。     

自身免疫肝病患者抗中性粒细胞胞浆抗体的检测及临床意义

探讨抗中性粒细胞胞浆抗体(anti-neutrophil cytoplastic antibodies,ANCA)对自身免疫肝病的临床意义。应用间接免疫荧光法和斑点法检测149例自身免疫性肝病患者[自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)患者57例,原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者42例,不明原因肝损患者50例]的ANCA和抗可提取性核抗原抗体(extract-able nuclear antigen,ENA),进而用ELISA法分析60例ANCA阳性的自身免疫肝病患者的ANCA抗原谱。以200例健康献血员为正常对照。结果ANCA在AIH、PBC、不明原因肝损中的阳性率分别为81%、40%、30%,其中非典型性pANCA的阳性率依次为70%、40%、28%。AIH组与PBC组及AIH组与不明原因肝损组间非典型性pANCA的阳性率有显著性差异(P<0.01),但PBC组与不明原因肝损组间差异不显著(P>0.05)。各疾病组ANCA抗原谱如下:AIH组中,乳铁蛋白3%阳性,MPO 11%阳性,组织蛋白酶G和BPI的阳性率分别为11%、17%;PBC组中,弹性蛋白酶和组织蛋白酶G阳性率均为5%,BPI的阳性率为16%;不明原因肝损组中,BPI阳性率为17%。大多数自身免疫性肝病患者非典型性pANCA为阳性(28%~70%),且伴有特征性自身抗体。注重非典型性pANCA的检测对明确诊断自身免疫肝病及其分类有很大的帮助。     

慢性肝病和原发性肝癌患者血清抗核抗体检测及其临床意义

本文用间接免疫荧光法检测慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌患者血清中抗核抗体 (ANA )的变化规律。结果显示原发性肝癌ANA阳性为 34 2 % ,其阳性率显著高于肝硬化组 (2 7 5 % )和慢性肝炎组 (2 1 8% )。三组ANA核型均以颗粒型为主 ,但抗核仁抗体随着病情加重 ,阳性比例显著升高。以免疫印迹法检测nRNP、Sm、SS A、SS B、Scl 70、Jo 1,发现 30例ANA阳性 (颗粒型和斑点型 )的慢性肝病和原发性肝癌中 ,仅 4例慢性肝炎和 6例肝硬化nRNP/Sm和 /或SS A阳性。结果表明 ,慢性肝炎、肝硬化、肝癌患者血清中不仅存在着ANA ,而且其阳性率、核型随着病情而发生改变 ,这种改变多集中在与细胞分裂、增殖相关的核仁蛋白上。ANA的靶抗原有多种 ,但明显与常见自身免疫性疾病的靶抗原不同。     

自身抗原SSA/Ro-52kD抗原优势表位分析

探讨自身抗原ＳＳＡ／Ｒｏ－５２ｋＤ的抗原优势表位,为疾病机制的研究提供依据,根据计算机软件进行的蛋白质序列结构分析。采用ＰＣＲ法克隆自身抗原ＳＳＡ／Ｒｏ－５２ｋＤ多肽片段的ｃＤＮＡ,定向插入表达载体ＰＧＥＸ－５Ｘ－１,并且导入大肠杆菌中表达重组融合蛋白,用ＧＳＴ亲和层析柱进行纯化,经免疫印迹法与病人阳性血清进行反应,结果表明片段Ｒｏ５２３具有较强的抗原性,这提示ＳＳＡ／Ｒｏ－５２ｋＤ的抗原优势表位     

热灭活白念珠菌刺激PBMC对颗粒溶素和TNF-α表达的影响

目的:研究热灭活白念珠菌刺激健康个体外周血单个核细胞对颗粒溶素和TNF-α表达的影响。方法:在热灭活白念珠菌刺激的情况下,采用ELISA和RT-PCR检测颗粒溶素的表达;采用SrCl2以及siRNA下调PBMC内颗粒溶素的表达,或者加入外源性颗粒溶素,观察TNF-α在mRNA和蛋白水平表达的变化。结果:热灭活白念珠菌刺激可以诱导PBMC合成颗粒溶素和TNF-α,采用SrCl2或siRNA下调颗粒溶素的表达均会引起TNF-α在mRNA和蛋白水平表达的下调,而加入外源性的颗粒溶素可以促进TNF-α的表达。结论:热灭活白念珠菌刺激PBMC可以引起颗粒溶素和TNF-α的表达,且颗粒溶素可能是促进TNF-α表达的因素。     

TLR3途径诱导多发性骨髓瘤细胞株增殖抑制和凋亡机制研究

目的 研究聚肌苷酸胞苷酸( polyI:C)激活的TLR3通路对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的增殖抑制和凋亡相关的生物学作用及相关机制.方法 RPMI8226细胞培养于RPMI 1640培养基,以不同浓度的polyI:C与该细胞作用不同的时间.收集细胞后,分别利用CCK-8和流式细胞术分析其增殖抑制和凋亡情况,同时抽提总RNA,相对定量PCR测定TLR3通路相关基因表达.结果 PolyI:C对RPMI8226的增殖抑制效应随着作用剂量的增加和时间的延长而增加,24h:12.30％±2.04％、22.50％±2.20％、37.90％±1.30％;48h:17.80％±1.52％、29.60±0.85％、45.80％±1.68％;72 h:25.10％±1.01％、34.60％±1.27％、60.50％±2.08％,差异有统计学意义(P＜0.05).浓度为50、100、200μg/ml的polyl:C与RPMI8226作用48 h后,细胞凋亡率分别为5.60％±1.06％、8.71％±1.06％、13.93％±1.17％,差异具有统计学意义(P＜0.05),而且随着polyI:C作用浓度增加,RPMI8226细胞中TLR3和TRIF mRNA相对于内参β-actin的表达均显著增高,TLR3:1.41±0.10、2.24±0.16、4.08±0.13;TRIF:1.07±0.16、1.97±0.13、3.56±0.19,各组间差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 TLR3途径可以有效地抑制多发性骨髓瘤细胞增殖,并且诱导其凋亡,对多发性骨髓瘤的生物治疗具有潜在应用价值.     

热灭活白念珠菌通过Dectin-1诱导外周血单个核细胞表达IL-12和IFN-γ

为研究Dectin-1在热灭活白念珠菌刺激外周血单个核细胞(PBMC)免疫应答中的作用。我们用不同浓度昆布多糖(Dectin-1封闭剂)与PBMC共培养1 h后,再用热灭活白念珠菌刺激PBMC 4 d;同时用不同剂量的Dectin-1激活剂酵母聚糖(zymosan)刺激PBMC 4 d,收集培养液上清,经ELISA检测IL-12和IFN-γ水平。结果发现,昆布多糖可以部分抑制热灭活白念珠菌刺激PBMC合成IL-12和IFN-γ的能力,酵母聚糖可以诱导PBMC合成IL-12和IFN-γ。因此,Dectin-1是介导热灭活白念珠菌诱导PBMC产生IL-12和IFN-γ的受体之一。     

TNFSF9在原发性胆汁性肝硬化的表达及其临床意义

目的探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者血清TNFSF9的浓度变化及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测42例PBC患者及与之配对的健康人血清中TNFSF9水平,并分析PBC患者血清TNFSF9与TBIL、γ-GT的关系。结果 PBC患者血清TNFSF9水平(1102.45±294.48)ng/L比健康对照组(123.67±62.60)ng/L显著增高,且与TBIL呈显著正相关(γs=0.549,P=0.000),但与γ-GT的相关性没有统计学意义(γs=0.291,P=0.062)。结论 TNFSF9可能参与了PBC的发病机制,可能是一个潜在的治疗靶点。     

186例消化系统恶性肿瘤患者UGT1A1*6、UGT1A1*28基因多态性的检测和分析

目的：检测和分析消化系统恶性肿瘤患者UGT1A1^*6、UGT1A1^*28基因多态性。方法：收集186例消化系统恶性肿瘤患者血液标本,采用焦磷酸测序方法对UGT1A1^*6、UGT1A1^*28基因多态性进行检测,并对基因多态性频率进行统计分析。结果：186例消化系统恶性肿瘤患者样本具有群体代表性。UGT1A1^*6基因多态性为野生型G/G占比63.4%、杂合型G/A占比32.8%、突变纯合型AA占比3.8%;UGT1A1^*28基因多态性为野生型TA6/TA6占比75.8%、杂合型TA6/TA7占比21.5%、突变纯合型TA7/TA7占比2.7%;UGT1A1^*6和^*28基因多态性为野生型G/G且TA6/TA6占比48.9%,单点变异型G/G且TA6/TA7占比12.4%、G/A且TA6/TA6占比23.1%,双点变异型G/G且TA7/TA7占比2.2%、G/A且TA6/TA7占比9.1%、A/A且TA6/TA6占比3.8%,三点变异型G/A且TA7/TA7占比0.5%。患者UGT1A1^*6与UGT1A1^*28基因多态性频率分布之间具有显著性差异（P<0.05）。3个不同年龄段患者之间,胃癌、结直肠癌、其他消化系统恶性肿瘤患者之间的UGT1A1^*28、UGT1A1^*6和^*28基因型分布具有显著性差异（P<0.05）。结论：消化系统恶性肿瘤患者应用伊立替康时,应联合检测UGT1A1^*6和UGT1A1^*28基因多态性,同时密切关注患者的肿瘤类型以及年龄差异。