我国新近暴发的登革热的病原分离与鉴定

1999年8月在福建省福州等地突然暴发了大量人群原因不明的发热、关节疼痛、头痛、皮疹,个别患者出血等症状。该病起病急,传播迅速,发病人数达1000多例。福建省卫生防疫站对此十分重视,要求对收集的患者血清标本进行鉴定。我们对所送标本进行了血清学、生物学及分子生物学检测,而且还观察了对动物的致病性。现将主要结果报告如下。福建省送检的38份病人血清标本,包括11份急性期血清和27份恢复期血清。首先采用间接免疫荧光法,利用登革2型病毒参考株感染的传代Ｃ6/36蚊细胞作为抗原,对27份恢复期血清中的ＩｇＧ抗体进行检测。结果表明,在所检…     

Hendra病毒的实时PCR检测方法的建立

目的：建立针对Hendra病毒的敏感、特异和快速的实时PCR法，为Hendra病的早期诊断提供依据。方法：采用常规PCR法和实时PCR法分别对构建的Hendra病毒全长G基因的重组质粒DNA进行扩增，并比较两种方法的敏感性。结果与结论：应用常规PCR方法可检测到100fg/μl的含Hendra病毒特异序列的重组质粒DNA，而实时PCR法则可检测到0．1fg/μl的DNA，后者的敏感性比常规PCR法的提高了1000倍，该方法不但操作上更加简便、快速，还可避免交叉污染，适于对Hendra病毒特异序列的检测。     

西部马脑炎病毒基因组序列的RT-PCR检测

目的 :建立敏感、特异的西部马脑炎 (westernequineencephalitis,WEE)病毒RT_PCR检测方法。方法 :首先采用逆转录法将病毒基因组RNA逆转录为cDNA ,然后以此cDNA为模板 ,进行PCR扩增。并对PCR扩增过程中的模板量、循环数、Mg2 浓度、退火温度和延伸时间等条件进行优化 ,以提高检测的特异性和敏感性。结果 :采用经优化的条件进行PCR扩增获得了约 35 0bp的单一DNA片段 ,其大小与预期的相一致 ,且可自 0 .1TCID50 的病毒液中检测出WEE病毒基因组序列。结论 :所建立的RT_PCR方法可自病毒感染的小鼠脑组织和传代细胞中检测WEE病毒的基因组RNA。     

SARS冠状病毒BJ01株基因组全长cDNA的构建与鉴定

目的:构建我国自行分离的SARS冠状病毒BJ01株基因组全长cDNA分子,为阐明SARS病毒致病的分子机制奠定基础。方法:采用分段克隆的方法对病毒全基因组进行分段扩增和克隆,然后将全基因组各cDNA片段分别进行体外连接获得全长cDNA分子,并对其接头序列进行PCR扩增和测序鉴定。结果与结论:获得了SARS病毒BJ01株基因组全长cDNA分子,对其接头处序列的测定结果表明,该全长cDNA分子为SARS病毒BJ01株的特异序列。     

登革2型病毒中国分离株感染性全长cDNA克隆的构建与鉴定

目的：构建登革2型病毒中国分离株（DEN2-43）的感染性全长cDNA克隆.方法：根据我室测定的DEN2-43株病毒全基因组序列,利用长链RT-PCR及融合PCR技术扩增此病毒基因组全长cDNA分子,并将其克隆至低拷贝载体pWSK29中构建该病毒株的全长cDNA克隆.将此克隆体外转录后,通过电穿孔导入宿主细胞获得恢复病毒.结果与结论：构建的DEN2-43基因组全长cDNA克隆具有感染性,所获得的恢复病毒具有与原型病毒类似的生物学性质及小鼠乳鼠神经毒力,且可稳定传代.该感染性克隆的构建为深入探讨登革病毒的致病机制及研制新型登革疫苗奠定了基础.     

妊娠期高血压疾病的临床流行病学分析

目的:对妊娠期高血压疾病患者进行临床流行病学调查分析,以了解近年来我院妊娠期高血压疾病的情况.方法:对我院2004年1月至2010年12月收治的523例妊娠期高血压疾病患者的基本情况、母婴并发症、分娩方式、围生儿结局、生化指标等进行回顾性分析.结果:近7年来妊娠期高血压疾病的发病孕周有提前趋势(F=14.79,P＜0.01),重度妊娠期高血压疾病的发生率呈上升趋势(X 2 =91.85,P＜0.01),规律产前检查孕妇比例呈上升趋势(X 2=34.93,P＜0.01),乡村人口所占比例有增加趋势(X 2=50.20,P＜0.01),分娩方式仍以剖宫产为主(X2 =37.06,P＜0.01).新生儿Apgar评分、新生儿体重随妊娠期高血压疾病病情加重有降低趋势(P＜0.01).乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、尿酸指标随病情加重有增高趋势,血钙随病情加重有降低趋势.结论:我院7年来妊娠期高血压疾病有早发、加重的趋势,但母儿不良结局无升高趋势.     

西尼罗病毒Chin-01株5''非编码区(UTR)中复制相关元件的功能研究

目的 研究西尼罗病毒Chin-01株5'非编码区(UTR)中复制相关元件的功能,为探讨该病毒基因组复制的分子机制提供理论依据.方法 通过生物信息学分析,初步筛选出Chin-01株5'UTR中可能的复制相关位点,并构建相应的重组亚基因组突变体,然后以上此为模板,经体外RdRp活性分析及凝胶阻滞试验,观察NS5的RdRp活性及与突变体的结合能力,再将突变位点引入该病毒感染性全长cDNA克隆,初步观察突变体恢复病毒的生物学特性.结果 5'UTR中第45-60位核苷酸缺失的突变体无法合成子链,与NS5的结合能力也显著降低.第8和9位核苷酸改变的突变体则丧失了合成子代RNA及与NS5的结合能力,第8、9、69和70位核苷酸突变后形成的结构恢复突变体则可以合成子链RNA,并可与NS5特异性结合.同时,第45-60位核苷酸缺失及第8和9位核苷酸突变的恢复病毒的增殖能力也显著降低.结论 Chin-01株5'UTR中的第45-60位及第8、9、69和70位核苷酸维持的结构可能是该病毒基因组复制的关键位点.     

难溶性药物单层渗透泵片制备工艺的研究进展

将难溶性药物制成单层渗透泵给药系统,本文通过对近年来有关难溶性药物渗透泵给药系统的制备工艺进行概述总结.