大肠杆菌LTB与霍乱弧菌CTB基因的克隆和表达及鉴定

目的：克隆大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位（LTB）及霍乱弧菌肠毒素B亚单位（CTB）基因，构建其表达载体。方法：采用高保真PCR分别从E.coli44815株与V.cholerae东74株基因组DNA中扩增LTB与CTB基因，T-A克隆后测定核苷酸序列。分别构建pET32a的LTB及CTB表达载体，在E.coliBL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达。采用SDS-PAGE及GM1-ELISA鉴定表达产物。结果：所克隆的LTB和CTB基因与报道的相应核苷酸序列同源性分别为99.12％-99.71％和98.54％-99.42％，氨基酸序列同源性分别高达97.58％-99.19％和96.77％-99.19％。pET32a-LTB-BL21DE3和pET32a-CTB-BL21DE3系统表达的融合蛋白产量分别占细菌总蛋白的30％和10％左右。GM1-ELISA结果证实LTB及CTB融合蛋白均能与牛GM1结合。结论：本研究成功地构建了LTB与CTB表达系统，所表达的LTB与CTB融合蛋白具有粘膜免疫佐剂活性。     

蒙古沙鼠幽门螺杆菌感染动物模型的建立

目的 :建立稳定、可靠的幽门螺杆菌 (Hp) NCTC11637株和临床分离的 Y0 6株沙鼠感染模型 ,观察感染沙鼠胃粘膜组织的病理改变。方法 :蒙古沙鼠随机分成 6组标准菌株组 (n=6)和 6组临床菌株组 (n=6) ,另设置 6组阴性对照 (n=4 )。用布氏肉汤配制哥伦比亚血琼脂培养的 NCTC11637株和 Y0 6株菌液。标准菌株组和临床菌株组各3组用 2× 10 8CFU/ ml菌液 0 .5 ml1次灌胃。标准菌株组和临床菌株组各 3组分别用 2× 10 9CFU/ ml菌液 0 .5 ml灌胃 ,连续 3次 ,每次间隔 2 4 h。末次感染后的第 2、4、6周处死沙鼠 ,取胃粘膜组织标本进行尿素酶试验、分离培养、常规病理学和 Hp免疫组化检查。结果 :1次感染的标准菌株组和临床菌株组第 2、4、6周的感染率分别为 0 %、0 %、66.7%和 0 %、16.7%、16.7%。 3次感染的标准菌株和临床菌株组第 2、4、6周的感染率分别为 66.7%、10 0 %、10 0 %和 66.7%、66.7%、10 0 %。分离结果阳性的感染动物胃粘膜细胞表面和胃小凹有 Hp定植 ,固有层出现少量慢性炎症细胞的浸润。结论 :高浓度 (1× 10 9CFU) Hp多次经口感染沙鼠可制备稳定、可靠的幽门螺杆菌感染动物模型 ,感染动物胃粘膜组织有 Hp定植并出现轻度的炎症反应。     

葡萄球菌肠毒素A促白细胞增殖与抗肿瘤活性的研究现状

根据抗原性差异，金黄色葡萄球菌肠毒素可分为5个型（SEA-SEE）。不少研究资料证实，SEA-SEC是目前所知的哺乳动物或人T细胞增殖和活性最为有效的刺激物,在极低剂量时（ng或Pg）即可有效地诱导T淋巴母细胞分裂、增殖,起到升白细胞的作用；还可通过促进T细胞释放多种细胞因子，通过细胞因子所产生的细胞毒作用杀伤多种肿瘤细胞。上述研究结果强烈地提示，     

幽门螺杆菌临床菌株hpaA基因的克隆和表达及鉴定

目的：克隆幽门螺杆菌（Hp）hpaA基因，构建hpaA基因表达载体，鉴定其表达的融合蛋白免疫性。方法：采用高保真PCR从幽门螺杆菌临床分离菌株Y06中扩增hpaA基因，T-A克隆后测定核苷酸序列，构建pET32a的hpaA表达载体，在E.coli BL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达，采用Hp全菌抗体的Western blot和兔抗融合蛋白血清的免疫扩散试验鉴定其免疫性。结果：所克隆的hpaA基因与报道的相应核苷酸序列同源性为94.25％-97.32％，氨基酸序列同源性高达95.38％-98.46％。pET32a-hpaA-BL21DE3系统的HpaA融合蛋白表达量高达细菌总蛋白的40％左右。HpaA融合蛋白能与Hp全菌抗体发生结合反应，免疫家兔能获得高效价抗体。结论：本研究成功地构建了Hp hpaA高效表达系统，所表达的HpaA融合蛋白有良好的免疫原性和免疫反应性，可作为Hp疫苗的抗原。     

质子泵抑制剂泮托拉唑钠抑制肺癌细胞上皮间质转化和顺铂耐药的机制研究

目的:探索泮托拉唑钠(pantoprazole sodium,PPZ)抑制肺癌细胞上皮间质转化和顺铂耐药的分子机制。方法:通过MTT法、划痕修复实验、Transwell实验和Western blot法比较A549细胞与A549/DDP细胞之间的形态、侵袭能力、迁移能力、药物敏感性和蛋白表达差异,观察泮托拉唑钠对A549/DDP细胞的形态、侵袭能力、迁移能力、药物敏感性和蛋白表达的影响。结果:与A549细胞比较,A549/DDP细胞存在高侵袭能力、高迁移能力、对顺铂耐药、具有间质表型和c-Met/AKT/m TOR通路活化等特点,泮托拉唑钠可抑制A549/DDP细胞的侵袭和迁移能力,逆转其耐药及间质表型,抑制c-Met/AKT/m TOR通路的活化。应用c-Met抑制剂SU11274、PI3K抑制剂LY294002和m TOR抑制剂rapamycin处理A549/DDP细胞后的作用与泮托拉唑钠相似。结论:泮托拉唑钠抑制cMet/AKT/m TOR信号通路抑制肺癌细胞侵袭、迁移、上皮间质转化和顺铂耐药。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人单核细胞株THP-1前列腺素E2合成通路的影响

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌脂多糖(1ipopolysaccharide of Porphyromonas gingivalis,Pg-LPS)在诱导细胞前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)合成通路上是否具有不同于大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharide of Escherichia coli,Ec-LPS)的特点.方法 用Pg-LPS和Ec-LPS分别作用于人单核细胞株THP-1,用酶免疫法检测PGE2的浓度.用液闪计数法观察花生四烯酸释放水平的变化.用反转录聚合酶链反应和Western blotting法分别检测胞质磷脂酶A2(cytosolic phospholipase A2,cPLA2)、环氧化酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)和微粒体前列腺素E合成酶1(microsomal prostaglandinE synthase-1,mPGES-1)的mRNA和蛋白表达水平.结果 Pg-LPS诱导PGE:合成和释放花生四烯酸的水平明显弱于Ec-LPS(P<0.05).PGE2水平增高在Pg-LPS作用6 h出现,24 h达峰值,为(221.40±29.46)rig/L;或Ec-LPS作用1～48 h,为(161.80±17.31)一(379.80±37.35)ng/L.COX-2和mPGES-1的最高表达出现在Pg-LPS作用16 h,或Ec-LPS作用8 h和16 h时.cPLA2的抑制剂AACOCF3町降低LPs诱导的花生四烯酸释放水平的增高,但对PGE2的合成无明显作用.COX-2阻断剂NS-398可显著减少PGE2产生.结论 Pg-LPS对PGE2合成通路的作用弱于Ec-LPS.Pg-LPS作用下PGE2的合成卡要是COX-2和mPGES-1表达增高所致,与cPLA2关系不大.     

社会支持与抑郁状况对糖尿病患者饮食行为阶段的影响

目的了解2型糖尿病患者饮食行为阶段分布现状,探讨社会支持水平及抑郁状况对饮食行为转变的影响。方法采用一般资料调查表、糖尿病饮食行为阶段评估问卷、社会支持评定量表和抑郁自评量表对南京市208例2型糖尿病患者进行调查。结果糖尿病患者的饮食行为各阶段均有分布,62.0%的患者处于行动前阶段,不同行为阶段的患者在主观支持、支持利用度得分及抑郁总分差异有统计学意义(均P<0.05);Logistic回归分析显示,支持利用度与抑郁是影响饮食行为阶段分布的影响因素(均P<0.05)。结论多数糖尿病患者仍未形成健康的饮食行为,护理人员应重视社会支持及抑郁症状对饮食行为的影响,针对行为阶段的不同采取针对性的干预策略,有效促进饮食行为的阶段性转变。     

经皮加压钢板系统和倒置微创内固定系统置入治疗老年股骨转子间骨折的半年随访

背景:近年来以股骨近端髓内钉、防旋股骨近端髓内钉为代表的髓内固定系统治疗股骨转子间骨折报道较多,但两者比较分析的研究较少。目的:探讨经皮加压钢板和倒置微创内固定两种治疗股骨转子间骨折的临床效果。方法:经皮加压钢板置入21例,倒置微创系统置入15例,年龄65~91岁。观察置入后并发症及髋关节功能Harris评分。结果与结论:全部获得随访6个月,髋关节功能经皮加压钢板组优良率87%,倒置微创内固定组87%。两组患者并发症少,没有患者发生钢板螺钉松动断裂、深静脉血栓形成、髋内翻。提示对于使用髓内固定系统有困难的老年股骨转子间骨折,用此两种微创髓外固定系统也可达到理想的治疗效果。     

不同疾病标本中铜绿假单胞菌分离鉴定与多重耐药性分析

目的 了解不同疾病铜绿假单胞菌的感染状况以及该菌对不同抗菌药物的耐药性。方法 采用VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定仪联合GN卡和16S RNA基因PCR对不同疾病标本中铜绿假单胞菌进行分离鉴定。分别采用VITEK-2 Compact仪联合AST-GN卡K-B纸片扩散法对铜绿假单胞菌分离株进行药物敏感试验。结果 仅检出铜绿假单胞菌199例病人所患主要疾病为下呼吸道感染(χ²=24.8,P<0.05),病人以≥60男性为主(χ²=26.1,P<0.05)且主要来自重症监护病房(ICU)和普外科(χ²=17.7,P<0.05)。临床常用抗菌药物中,铜绿假单胞菌分离株对氨苄西林、头孢唑林和头孢曲松耐药率较高(耐药率95.48%～98.99%),但对哌拉西林、庆大霉素和左旋氧氟沙星相对敏感(敏感率70.51%～88.44%)。55.3%铜绿假单胞菌分离株(110/199)株多重耐药,优势多重耐药模式为青霉素+头孢菌素+碳青霉烯类(30.9%,34/110)和菌株对青霉素+头孢菌素+碳青霉烯+喹诺酮类(39.1%,43/110)耐药(P<0.05)。结论 铜绿假单胞菌是不同感染性疾病常见病原体,老年男性是该菌感染高危人群。临床标本中分离的铜绿假单胞菌有较强的耐药性,尤其对多种临床常用抗菌药物呈现多重耐药。     

经皮加压钢板系统治疗股骨转子间骨折

目的 探讨经皮加压钢板系统(PCCP)治疗股骨转子间骨折的临床疗效。方法 2009年5月至12月采用PCCP治疗17例股骨转子间骨折患者,男6例,女11例;年龄34～ 90岁（平均71.8岁）。骨折根据改良Evan分型：ⅠA型4例,ⅠB型1例,Ⅱ型9例,Ⅲ型3例。受伤至手术时间为2～5d,平均2.5d。观察并记录患者术中出血量、切口长度、术后疼痛程度及术后髋关节功能Harris评分。结果 术中出血量平均为55 mL(30～90 mL);近端切口长2～3 cn,远端切口长3～4 cm;术后疼痛视觉模拟法评分平均为1.5分（1～3分）。17例患者术后获4～10个月（平均7个月）随访。骨折均获愈合,愈合时间为2～3个月（平均2.6个月）。术后髋关节功能Harris评分平均为88.1分（80～93分）;其中优3例,良13例,可1例,优良率为94.1％。均未出现切口感染、深静脉血栓形成、螺钉钢板断裂及髋内翻等并发症。结论 PCCP治疗股骨转子间骨折具有术中出血量少、手术创伤小、骨折固定稳定、术后功能恢复好等优点,是治疗改良Evan Ⅰ～ Ⅱ型股骨转子间骨折较理想的固定方法。