小鼠生精细胞体外长期培养及超微结构分析

目的初步探讨新生小鼠睾丸组织中生精细胞在体外培养条件下的增殖分化条件,建立有效的生精细胞体外成熟模型。方法用酶法和Percoll不连续密度梯度法分离纯化新生小鼠睾丸生精细胞,获取富精原细胞层,采用自制小鼠睾丸组织培养液对分离纯化后的细胞进行体外培养。用电子显微镜观察培养的细胞超微结构。结果新生小鼠生精细胞在用成年小鼠睾丸组织提取液配制的培养基中存活达194d。电子显微镜观察可见,培养后的细胞中含有精子细胞顶体样结构。结论采用小鼠睾丸组织制备的培养液培养的小鼠生精细胞可体外长期培养并显示出一定的分化趋势。     

新生小鼠睾丸组织移植到裸鼠体内不同时期移植物的组织学观察

目的 通过测量不同发育时期移植物的重量及观察其中生精小管结构和生精细胞组成情况,对去势雄性小鼠中移植的新生小鼠睾丸组织生长和发育进行系统观察.方法 将出生1～2d昆明小鼠睾丸移植到7～12周去势雄性免疫缺陷小鼠背部;在移植后不同时间段 (分为3d、1～11周和3～6月16个组)取出移植物,计算移植物的回收率,测定移植物重量,观察移植物中生精小管结构及生精细胞的组成.结果 从移植的450个新生小鼠睾丸组织,回收到405个移植物,总回收率为90.0%.重量比移植前增加约40倍.移植物中生精小管的发育及各阶段生精细胞出现时间与在正常小鼠中所见基本相同.移植时间超过8周后,生精上皮的退化现象显著增加.结论 将新生小鼠睾丸组织异位移植到受体背部后的发育进程与在体情况相同,第1次生精波结束后的时间应为获取精子细胞和精子的最佳时间,大约是移植后5～7周.     

感染Coxsackie B_(3m)病毒小鼠心肌NOS_Ⅱ蛋白表达的研究

给ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠腹腔接种嗜鼠心肌ＣｏｘｓａｃｋｉｅＢ３病毒（ＣＶＢ３ｍ），感染后３、５、７、１２、１５、２０、３０天分批处死小鼠。应用免疫组化法检测发现，感染后５天，小鼠心肌可见ＮＯＳⅡ蛋白的阳性表达，７～１５天时表达最明显，２０天后逐渐减少。表达ＮＯＳⅡ蛋白的细胞主要位于炎性病灶的周围。提示ＮＯ与小鼠病毒性心肌损伤的发生发展有密切关系     

SGR4和GFRa-1基因在小鼠睾丸移植物中的表达

目的检测小鼠睾丸异体异位移植物中SGR4和GFRa-1基因,对采用该动物模型进行睾丸组织移植在生殖医学中应用的可行性进行评估。方法以新生1～2 d小鼠睾丸组织为供体,雄性去势免疫缺陷小鼠为受体进行组织移植;在移植后不同时间段(分为3 d、1～10周共11个组)取出移植物,采用RT-PCR法对移植物中生精阶段特异性基因SGR4和GFRa-1进行检测;分析2种基因在精子发生不同阶段出现的时间及表达情况,并与相应各时期正常小鼠睾丸中的基因表达相比较;同时进行组织形态学观察,对比各种基因出现的时间与小鼠睾丸发育周期的吻合程度。结果在11个时间段取出的移植物中,GFRa-1在出生3 d就开始表达,表达持续恒定;SRG4在出生2周内的小鼠睾丸中呈低表达,直至出生3周,SRG4基因在小鼠睾丸中开始大量表达,以后表达持续恒定在高水平。2种基因表达趋势与正常昆明小鼠睾丸中的表达基本相同,并与小鼠发育周期基本吻合。结论将新生小鼠睾丸组织移植到免疫缺陷小鼠体内后,生精细胞的发育在组织形态和SGR4、GFRa-1基因出现的时间上与正常小鼠相似。     

人脐血细胞在肝损伤裸鼠体内向肝细胞的分化

目的探讨在制备的肝损伤模型中人脐血单个核细胞向肝细胞的分化能力。方法采用腹腔注射CCl4和5-氟尿嘧啶的方法制备肝损伤模型,将分离的脐血单个核细胞以2×107/ml经尾静脉注射入裸鼠体内。4周后处死裸鼠取肝组织。以RT-PCR方法对ALB、AFP mRNA的表达进行检测;并用免疫组织化学SP染色检测人HSA、PCNA、ALB的表达情况。结果RT-PCR显示ALB、AFP mRNA在人肝组织移植组中表达呈阳性,而在损伤未移植组和正常对照组表达为阴性;免疫组织化学染色表明,在裸鼠肝实质区域出现人HSA、PCNA和ALB阳性表达细胞。结论人脐血单个核细胞在裸鼠体内确有向肝细胞分化的趋势。     

微量元素与动物心肌坏死检出率及GSH、LPO相关性的研究

用低硒富锰人工半合成饲料喂养大鼠 8周 ,复制动物心肌损伤模型。结果表明 ,单因素及复合因素均可使ＧＳＨ Ｐｘ值升高、ＬＰＯ值降低 ,心肌坏死检出率有下降的趋势 ,并与ＧＳＨ Ｐｘ值呈负相关 ,与ＬＰＯ值呈正相关。1　材料和方法用纯系Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,平均体重 (75± 13)ｇ ,随机分为 8组 ,每组 2 8只 ,雌雄各半 ,自由摄取饲料和自来水。各组喂饲条件见附表 ,基础饲料组成如下 (% ) :干酪素 18,玉米 71,豆油5 ,混合无机盐 5 ,混合维生素 1。饲养 8周后 ,每组取 18只大鼠腹腔注射亚硝酸钠 (1.8% )连续 2天 ,每天 2次 ,每次按6 0ｍｇ ｋ…     

LASIK与LASEK术后角膜神经损伤和修复的实验研究

目的 比较兔眼LASIK与LASEK两种准分子激光手术后角膜神经损伤和再生修复情况.方法 选用健康、纯种新西兰白兔30只,随机分为6组,每组5只,1组为正常对照组,其余5组为实验组,实验组白兔一眼行LASIK手术;另一眼行LASEK手术.术后1、7 d,1、3、6m取兔角膜行氯化金染色,光镜下观察LASIK与LASEK术后角膜神经损伤及修复情况.结果 LASIK与LASEK手术后不同时期角膜神经损伤和再生修复有明显差异.结论 LASIK术后角膜神经损伤的程度比LASEK重,角膜神经再生修复速度慢.     

异体异位发育睾丸组织的蛋白质组图谱构建及差异蛋白分析

[摘要] 目的 应用蛋白质组学实验方法对在异体异位生长发育的新生小鼠睾丸组织进行差异蛋白分析,从而对睾丸组织体外移植模型用于生精细胞发育研究的可行性提供进一步的理论依据。方法 以新生小鼠睾丸组织为供体,免疫缺陷小鼠为受体进行组织移植,移植8周后收集移植物组织,采用双向凝胶电泳（2-DE）分离移植物组织总蛋白,同时分离8周正常小鼠睾丸组织总蛋白作对比分析,运用ImageMaster 2D Elite 5.0图象分析软件识别移植物组织与正常组织差异表达的蛋白质点,应用基质辅助电离解析飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）获取肽质量指纹图谱（PMF）,检索数据库鉴定差异表达的蛋白质点。结果 正常睾丸组织和移植物组织双向电泳图谱的平均蛋白质点数分别为(1 326±15)个和(1 561±20)个,3次重复实验的蛋白质点位置重复性较好。通过比较两者的双向凝胶电泳图谱,得到表达差异量较大的蛋白质点21个。选取6个仅在正常睾丸组织中有表达的蛋白质点进行质谱和生物信息学分析,鉴定出的6种蛋白质,除血红蛋白α1链（Hba-a1）外,其他5种蛋白均为在小鼠睾丸中有较高表达的蛋白质,包括A激酶锚定蛋白结合的精子蛋白(ASP)、磷脂过氧化氢物谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)、精子蛋白(Sp17)、天门冬酰胺酶样蛋白(ASRGL1)和过氧化物氧化还原因子4(Prdx4)。结论 在本实验中,从异体异位生长发育成熟的新生小鼠睾丸组织中检测到5种在睾丸中特异性高表达蛋白质的缺失,这些蛋白质主要在精子运动、精子顶体形成以及精子的受精等功能中发挥作用。     

低硒富锰和大鼠心肌损伤的关系研究

目的：观察硒、VitE、锌单因素及复合因素对心肌损伤的影响。方法：用低硒富锰人工半合成饲料喂大白鼠8周，复制动物心肌损伤模型。并补充硒（0．3mg/kg）或VitE(250mg/kg）或锌（200mg/kg），观察相关情况。结果：单因素硒、VietE、锌及复合因素均可使血清谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）活性提高，使心肌组织脂质过氧化物LPO值明显降低，心肌坏死检出率有降低的趋势。结论：复合因素好于单因素，三因素明显好于双因素。