重组日本血吸虫极低密度脂结合蛋白的抗原性及诊断价值的研究

目的 探讨重组日本血吸虫特异性极低密度脂结合蛋白(SVLBP)的抗原性及其诊断价值。方法 SVLBP基因亚克隆入pQE-30表达载体，克隆菌在IPTG诱导下表达重组蛋白；非变性条件下制备克隆菌裂解液，用亲和层析法纯化重组蛋白；用Western blot鉴定其抗原性；纯化SVLBP重组蛋白免疫家兔获得抗血清；以SVLBP重组蛋白为抗原。ELISA法检测血吸虫感染者血清及健康人血清。结果 克隆菌在IPTG诱导下高表达SVLBP重组蛋白；该重组蛋白诱导家兔产生单特异抗体，抗体滴度为1：6400；SVLBP重组蛋白与血吸虫病人血清有较强的反应；以该蛋白为抗原检测36人份血吸虫感染者血清，阳性率为83．3％，50人份健康人血清，假阳性率为2％(1／50)，10人份肺吸虫病人血清，1例阳性。交叉反应率为10％(1／10)。结论 SVLBP重组蛋白有较好的抗原性，以该重组蛋白为抗原检测日本血吸虫病患者血清中特异性抗体。敏感性和特异性均较高。具有一定的诊断价值。     

斑点金免疫渗滤法检测肺吸虫抗体的评价

目的　为寻求简便、可靠的方法 ,用于诊断肺吸虫感染。方法　采用肺吸虫成虫可溶性抗原 ,金标记兔抗人IgG显色 ,建立检测肺吸虫抗体的DIGFA。用该法检测痰检肺吸虫虫卵阳性血清 82份 ,其他各类血清 2 0 1份 ,并与ELISA平行对照。结果　两法检测肺吸虫抗体的敏感性分别达 98 8% (81/ 82 )和 97 6 % (80 / 82 ) ;特异性 92 % (185 / 2 0 1)和 93% (187/2 0 1) ;youden’s指数为 0 90 8和 0 90 6。两法差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　实验提示DIGFA的各项检测指标与ELISA相近 ,而且无需特殊设备 ,且快速、简便 ,适合临床查病和血清流行病学调查。     

金标免疫渗滤法(DIGFA)快速检测血吸虫循环抗原的研究

目的　建立一种简便、快速的血吸虫病诊断方法。方法　在已建立的检测血吸虫抗体的ＤＩＧＦＡ基础上,以抗血吸虫重组蛋白ＳＶＬＢＰ多抗为捕捉抗体,金标抗ＳＥＡ多抗为覆盖抗体,建立快速检测病人血清中血吸虫循环抗原的双夹心ＤＩＧＦＡ。结果　用该法检测了急性血吸病人血清３０ 人份和慢性血吸病人血清３８ 人份,其阳性检出率分别为１００ ％ 和５２－６ ％ ;１２０ 人份流行区健康人血清全为阴性;１００ 人份非流行区健康人群血清的阴性符合率为１００％ ,与１０ 例华支睾病人血清无交叉反应;１５ 例肺吸虫病人血清有１ 例阳性,交叉反应率为６－７ ％ ;与双夹心ＥＬＩＳＡ的符合率为９７－４％ ,经χ２ 检验表明两法检测效果无显著性差异。结论　用ＤＩＧＦＡ检测血吸虫循环抗原具有较高的敏感性和特异性,并且方法简便、快速、不需特殊仪器设备,有广阔的应用前景。     

金标渗滤法快速检测血吸虫循环抗原的现场应用研究

将抗重组蛋白ＳＶＬＢＰ－ＩｇＧ用于ＤＩＧＦＡ检测２２２１例血清中血吸虫循环抗原,其中急性血吸虫病人血清７０份,慢性血吸虫病人血清３０７份,循环抗原检出率分别为１００％和６８．４％。非流行区健康人血清２００份,未见阳性反应。除肺吸虫外,与其它寄生虫或非寄生虫感染病人血清无明显交叉反应。用ＤＩＧＦＡ单盲法检测２批血清,结果显示对急性血吸虫病人的敏感性均为１００％;对慢性血吸虫病人的敏感性分别为６９．４     

青蒿琥酯作用后日本血吸虫童虫蛋白质组学分析

目的探讨青蒿琥酯处理前后日本血吸虫童虫蛋白质组的差异表达,研究青蒿琥酯抗日本血吸虫的分子机制。方法新西兰兔经贴片法感染日本血吸虫尾蚴（2000条／只）第7天一次性灌服青蒿琥酯（实验组,8mg／kg）和1％羧甲基纤维素钠（对照组）,第10天经肝门静脉系统灌流收集童虫,观察虫体形态,提取总蛋白。应用同位素标记相对和绝对定量技术（iTRAQ技术）鉴定青蒿琥酯处理前后13本血吸虫童虫的差异蛋白质组,通过数据库检索和生物信息学分析差异表达的蛋白质。结果青蓠琥酯处理后日本血吸虫童虫与对照组相比,形态较为粗短细小,并存在明显的发育不良或畸形。iTRAQ技术检测显示,处理后的血吸虫童虫有75个（含3个未知蛋白）蛋白存在明显表达差异。其中表达量上调的蛋白23个,下调的蛋白52个。结论差异表达的蛋白主要参与了童虫的代谢、生物调节和细胞稳态等过程,同时与应激、细胞组织和生成等密切相关。     

快速检测抗日本血吸虫抗体的金标免疫渗滤法的建立及应用

以血吸虫虫卵浸出液为抗原，金标记兔抗人ＩｇＧ为显示剂，建立了检测抗血吸虫抗体的金标免疫渗滤法（ＤＩＧＦＡ）。以该法检测血吸虫病患者血清８７份，阳性检出率为９８．９％；非流行区血清１００份，阴性符合率为１００％；１５例肺吸虫病患者血清，１例出现阳性反应，交叉反应率为６．７％；１０例华支睾吸虫病患者和２５例乙型肝炎患者，均无交叉反应。本法与ＥＬＩＳＡ比较，符合率达９６．７％。揭示ＤＩＧＦＡ的敏感性和特异性与ＥＬＩＳＡ相近，但方法简便、快速、试剂稳定，且无需特殊设备，适合于基层单位和现场应用     

结核分枝杆菌融合蛋白ELISA方法检测

目的探讨融合蛋白ESAT6-38kDa-16kDa对结核病的血清学诊断价值,并与脂阿拉伯甘露糖抗原(LAM)及结核蛋白芯片方法的检测结果进行比较,评价其应用价值。方法表达、纯化重组目的蛋白,分别以此蛋白和LAM为抗原包板,以酶标抗体为二抗,采用ELISA间接法检测肺结核患者血清、肺外结核患者血清及正常人血清,比较敏感性、特异性等,评价其对结核病的诊断价值。结果融合蛋白ESAT6-38kDa-16kDa、LAM、血清及酶标抗体的最佳工作稀释度分别为1、0.5μg/mL,1∶100、1∶4 000;分别用ESAT6-38kDa-16kDa和LAM检测761份结核病人血清,敏感性分别为76.9%、77.4%,特异性为89.2%、89.5%,差异均无统计学意义;ELISA法检测68份肺结核病血清标本融合蛋白,阳性检出率和阴性符合率与芯片检测结果有极高一致性。结论融合蛋白ESAT6-38kDa-16kDa作为抗原对结核病血清学诊断具有一定应用价值。     

滴金免疫渗滤法检测广州管圆线虫抗体的实验研究

目的建立一种检测广州管圆线虫抗体的简便、快速、敏感、特异的新方法。方法以广州管圆线虫成虫抗原为包被抗原,金标记SPA为显色剂,建立检测广州管圆线虫抗体的滴金免疫渗滤法（DIGFA）;并以ELISA平行检测比较。结果用DIGFA检测广州管圆线虫实验感染鼠血清50份,其阳性检出率为96．0％,50份正常鼠血清的阴性符合率达100％。DIGFA分别检测蛲虫阳性鼠血清13份。绦虫阳性鼠血清11份和粪类圆线虫阳性鼠血清18份,前二者均为阴性,后者交叉反应率为5．6％;DIGFA与ELISA平行检测30份广州管圆线虫阳性鼠血清,两法符合率达96,7％。结论DIGFA与ELISA有相似的敏感性和特异性。且具有简便、快速、不需特殊仪器设备等优点。是一种检测广州管圆线虫抗体的新方法。