微生物学实验教学方法的探讨

研究探索综合设计性实验教学在病原生物学实验教学中的应用效果。选择临床医学专业7年制和检验医学专业学生,推行综合设计性实验,即在教师的指导下,学生进行资料收集和实验设计,并独立完成整个实验课题的过程。综合设计性实验有效地培养了学生创新能力和团队精神,提高学生的综合素质,对本科生的科研素质培养有很重要的意义。综合设计性实验教学可以作为培养本科学生综合素质的有效途径。     

螺旋藻多糖对人宫颈癌Hela细胞体外生长的影响

目的：探讨螺旋藻多糖（PSP）对体外培养的Hela细胞生长的影响。方法：采用MTT法测定 PSP的抗肿瘤活性，并观察其对Hela细胞形态学的影响。结果：随PSP浓度的升高，Hela细胞存活率逐渐降低，抑制率逐渐增加；光镜下观察显示，PSP作用24-48h后，细胞出现明显的形态学改变。结论：PSP能抑制Hela细胞增殖。     

女阴及子宫肿瘤人乳头瘤病毒16/18感染的检测

1目的　探讨女阴及子宫肿瘤组织人乳头瘤病毒 (HPV) 16 / 18DNA感染及其意义。2方法　应用原位杂交技术对 3个传代的细胞系、96例宫颈标本、75例子宫内膜标本及 33例女阴尖锐湿疣标本 HPV 16 / 18DNA进行了检测。3结果　尖锐湿疣组织 HPV16 / 18DNA感染阳性表达 3例 (9.1% ) ,正常宫颈 2例 (2 0 .0 % )、子宫颈上皮肉瘤变 (CIN ) 5例 (2 7.8% )、CIN 9例 (39.1% )、宫颈鳞癌 2 7例 (6 0 .0 % ) ,4组之间比较差异有极显著性 (χ2 =7.92 3,P<0 .0 1)。2 7例正常子宫内膜组织 HPV16 / 18DNA表达均为阴性 ,48例子宫内膜癌 3例呈阳性 (6 .2 % ) ,其中 1例为腺鳞癌 ,1例为透明细胞癌。4结论　生殖道上皮中存在多种 HPV亚型混合感染 ,子宫内膜癌组织中可见HPV16 / 18感染。     

喉癌多药耐药基因和多药耐药相关蛋白基因的表达

（１）目的 探讨喉癌组织中多药耐药基因（ＭＤＲ１）和多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）基因的表达及其意义,（２）方法 利用半定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,检测４１例喉癌及１０例喉乳头状瘤组织ＭＤＲ１和ＭＲＰ基因的表达。（３）结果 ４１例喉癌和１０例喉乳头状瘤组织均有ＭＤＲ１和ＭＲＰ基因的表达,两种基因在两种组织中表达水平无显著性差异（ｔ＝０．２９,２．３５,Ｐ〉０．０５）。１０例喉癌ＭＲＰ基因呈     

PCR-SSCP技术检测原发性胃腺癌石蜡标本p53第七外显子基因突变的初步研究

目的 :研究PCR SSCP技术检测原发性胃腺癌石蜡标本中p53第 7外显子基因突变 ,探讨其与肿瘤发展的关系。方法 :应用PCR SSCP(聚合酶链反应 单链构象多态性 )技术检测 37例原发性胃腺癌标本中p53第 7外显子的基因突变 ,同时应用免疫组织化学技术检测p53蛋白的表达。探讨其与肿瘤发展的关系。结果 :37例原发性胃腺癌标本中 ,p53第 7外显子基因突变率为 19% (7/ 37) ,7例发生突变的标本 ,其p53蛋白表达亦呈阳性 ,低分化腺癌突变率高于高、中分化腺癌 (P =0 0 0 0 6 ) ,发生淋巴结转移组突变率高于未发生淋巴结转移组 (P =0 0 0 0 3)。结论 :临床检测胃腺癌原发灶中是否存在p53第 7外显子基因突变 ,有助于识别高度恶性的胃腺癌。     

胃癌nm23基因mRNA原位杂交和免疫组化研究

目的 :探讨胃癌mn2 3 H1基因表达与淋巴结转移倾向的相关性。方法 :采用地高辛标记cD NAnm2 3 H1探针 ,原位杂交检测 2 1例胃癌及癌旁组织 ;应用单克隆抗体 (NM30 1)SP法检测 131例胃癌及 60例非胃癌胃粘膜nm2 3/NDPK表达。结果 :原位杂交阳性率 57.1% ( 12 /2 1) ;免疫组化阳性率为87.8% ( 115/131) ,其中非转移组阳性率为 97.1% ( 34 /35) ,转移组阳性率 84 .4 % ( 81/96) ,P <0 .0 5。结论 :胃癌nm2 3 H1基因表达与淋巴结转移倾向呈负相关 ,与PCNA分级呈正相关     

蜂毒素与基因变构IL-2嵌合蛋白对人卵巢癌细胞SKOV3的抑制作用及对NK细胞的杀伤活性的影响

目的研究蜂毒素与基因变构IL-2（melittin-^88ArgIL-2）嵌合蛋白,在体外对入卵巢癌细胞SKOV3的抑制作用及对NK细胞的杀伤活性的影响。方法用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法研究已经纯化制备的melittin-^88ArgIL-2嵌合蛋白,在体外对入卵巢癌细胞SKOV3生长抑制的作用,对NK细胞杀伤活性的影响。结果melittin-^88ArgIL-2嵌合蛋白在体外能抑制入卵巢癌细胞SKOV3的生长增殖,能增强NK细胞的杀伤活性。结论melittin-^88ArgIL-2嵌合蛋白在体外具有一定的增强免疫功能和抗肿瘤活性。为其在真核细胞系统的表达、纯化、体内的生物学活性研究以及大规模制备的中试放大研究和临床前期研究奠定了基础。     

基因重组人白细胞介素21体外对NK细胞活性的影响

目的在原核系统中表达基因重组人IL-21,研究其在体外对NK细胞杀伤活性的影响。方法利用基因工程技术,获得人IL-21的编码基因,重组于表达载体pGEX4T-2中,转化E.coliDH5α进行诱导表达,纯化获得重组人IL-21,分别将0、10、20、40μg/L的IL-21与健康人外周血单核细胞共同孵育,改良的MTT法检测NK细胞对靶细胞K562的杀伤活性。结果在原核表达系统中成功表达了GST-IL-21的融合蛋白,一定剂量的纯化后IL-21(40μg/L)在体外具有增强NK细胞杀伤活性的作用。结论在大肠杆菌中表达的基因重组人IL-21在体外可增强NK细胞杀伤活性,为系统研究新型的免疫调节因子IL-21奠定基础。     

PCR结合反向杂交与细胞培养检测沙眼衣原体感染

目的建立聚合酶链反应(PCR)结合反向杂交技术快速检测沙眼衣原体,用于泌尿生殖道沙眼衣原体感染的诊断。方法用聚合酶链反应(PCR)结合反向杂交技术对182例泌尿生殖道炎症病人的尿道分泌物进行沙眼衣原体检测,并与传统的细胞分离培养法的敏感性进行了比较。结果采用聚合酶链反应结合反向杂交技术检测出阳性标本52份(28．57％),分离培养法测出阳性标本50份(27．47％)。以细胞培养法结果为金标准,聚合酶链反应结合反向杂交技术的敏感性和特异性分别为100％和98．48％,阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV)分别为96．15％、100％。结论与细胞培养法相比,聚合酶链反应结合反向杂交技术敏感而快速,是临床应用的选择之一。     

蜂毒肽与变构hIL－2融合基因原核表达载体的构建

目的构建蜂毒肽与人变构白细胞介素－2原核表达载体,为进一步研究该融合基因而奠定基础。方法以本室构建质粒pGEX－4T-2／Melittin－IL－2（^88Arg）为模板,设计引物,用PCR定点突变的方法将IL-2部分的^125Cys突变为Ala,PCR产物与pMD18-T连接,转化大肠杆菌,小提质粒,DNA测序后再将目的片段连接于pET-15b,最后酶切鉴定。结果PCR产物542bp,构建质粒双酶切、DNA测序鉴定如预期。结论成功构建蜂毒肽与人变构白细胞介素-2原核表达载体。