87例骨髓增殖性肿瘤患者JAK2及MPL基因突变位点研究

目的:探讨JAK2V617F及MPLW515L/K点突变在骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者中的发生情况及临床意义。方法:回顾性统计分析87例MPN患者的临床及实验室检查资料,应用等位基因特异性-聚合酶链反应(AS-PCR)及序列测定方法,检测MPN患者骨髓/外周血单个核细胞JAK2V617F及MPLW515L/K点突变的发生情况,结合JAK2V617F及MPLW515L/K点突变阳性与阴性2组患者的临床及实验室检查指标,探讨其在疾病诊断及分子发病机制中的意义。结果:87例MPN患者[真性红细胞增多症(PV)36例,原发性血小板增多症(ET)33例,原发性骨髓纤维化(PMF)18例]中共检出55例患者存在JAK2V617F突变,总突变率为63.2%(55/87),其中PV28例,突变率77.8%(28/36);ET17例,突变率51.5%(17/33);PMF10例,突变率55.6%(10/18)。JAK2V617F阳性PV和ET患者WBC及Hb水平高于阴性患者(P<0.05);JAK2V617F阳性PMF患者WBC及PLT高于阴性患者(P<0.05)。JAK2V617F阳性MPN患者血栓发生率高于阴性患者(P<0...     

VEGF-C真核表达载体的构建及蛋白表达

目的构建人血管内皮生长因子(VEGF-C)编码序列基因真核表达载体,为探讨VEGF-C的生物学功能奠定基础.方法根据已公布的序列设计引物,用PCR方法从肿瘤细胞株cDNA中扩增出人VEGF-C编码序列基因片段,测序正确后用限制性内切酶将目的片段插入PcDNA3.1/V5-His-TOPO载体中.采用酶切和PCR鉴定后通过脂质体介导转染至CHO细胞中进行瞬时表达.结论经RT-PCR扩增转染细胞cDNA和Western blotting检测证实重组质粒pcDNA3.1-VEGF-C能在宿主细胞中高效表达.     

一种新的FⅩⅢ基因突变导致的遗传性FⅩⅢ缺陷症

目的 对1例遗传性凝血因子ⅩⅢ（FⅩⅢ）缺陷症患者及其家系成员FⅩⅢ基因[F（13）A]进行分析，探讨其分子致病机制。方法 尿素溶解法定性检测FⅩⅢ活性，抽提外周血基因组DNA．PCR扩增FⅩⅢA基因的15个外显子及其侧翼序列，PCR产物纯化后直接基因测序，并对家系成员F（13）基因相应的突变序列进行检测。结果 先证者FⅩⅢ定性试验阳性。基因测序发现先证者F（13）A存在纯合缺失，外显子10自127067位起缺失33个核苷酸（127067del33，GI：AF418272），导致阅读框内缺失11个氨基酸（406Met-416Ala），产生了由720个氨基酸残基组成的截短型FⅩⅢA蛋白。其父母FⅩⅢ定性试验为阴性，均显示为该序列的杂合缺失突变。结论 先证者为遗传性FⅩⅢ缺陷症患者，由F（13）A外显子10缺失突变所致。该突变为国际首次报道。     

15例非胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤临床特点与疗效分析

目的 探讨非胃黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的临床特点和治疗方法。方法 回顾性分析安徽省肿瘤医院2011年6月至2015年6月收治的15例非胃MALT淋巴瘤患者临床资料。结果 在一线接受放疗或(和)化疗的15例患者中,总有效率为100.00%。局限期(Ⅰ~Ⅱ期)患者完全缓解率明显高于进展期(Ⅲ~Ⅳ期)患者(P<0.05),原发部位在头颈部患者总生存(OS)率、无疾病进展生存(PFS)率优于原发于肺及小肠患者(P<0.05)。14例化疗患者中,使用利妥昔单抗患者的OS率、PFS率与未使用患者相比,无明显优势。局限期患者OS率、PFS率优于进展期患者,但差异无统计学意义。结论 非胃MALT淋巴瘤疾病进展缓慢,预后良好,临床上可根据患者病变范围和身体状况选择适当治疗。     

血管内皮生长因子C对NB4细胞裸鼠种植瘤生长及血管生成的影响

目的 建立裸鼠体内NB4/VEGF-C细胞种植瘤模型,探索VEGF-C及其受体对白血病细胞生物学性状影响.方法 每组9只4～5周龄的BALB/c裸鼠,经4 Gy60Co照射后腋窝皮下分别接种1×107个NB4/VEGF-C、NB4/pcDNA3.1细胞(对照组),观察成瘤性,3周后处死裸鼠.免疫组化法检测NB4/VEGF-C细胞组种植瘤组织切片微血管密度及BCL-2蛋白表达水平.结果 NB4/VEGF-C及对照细胞在裸鼠腋下均成瘤,NB4/VEGF-C细胞组肿瘤生长速度快于对照组,NB4/VEGF-C细胞组与对照组瘤体体积分别为(631.44±114.42)mm3和(491.22±70.05)mm3,差异有统计学意义(P=0.006);NB4/VEGF-C细胞与对照组瘤块质量分别为(321.78±27.84)mg和(288.57±40.12)mg,差异有统计学意义(P=0.031).免疫组化检测显示NB4/VEGF-C细胞组种植瘤组织切片微血管密度及BCL-2蛋白表达水平高于对照组.结论 VEGF-C不仅诱发NB4细胞种植瘤体的血管新生,而且可能通过VEGFR-3信号途径促进白血病细胞增殖及上调抗凋亡蛋白BCL-2抑制细胞凋亡.

Abstract：

Objective To establish NB4/VEGF-C cells xenograft in nude mice model, and explore the effect of VEGF-C on hematological malignancies Methods NB4/VEGF-C or NB4/pcDNA3.1 cell lines were established by transfecting the recombinant pcDNA3. 1-VEGF-C plasmid and the vacant pcDNA3. 1 vector into NB4 cells. The recombinant VEGF-C was identified by RT-PCR and Western blotting. Eighteen male BALB/c nude mice aged 4-5 weeks were equally divided into two groups. Mice irradiated by 4 Gy 60Co were subcutaneously injected with 1 × 107 NB4/VEGF-C or NB4/pcDNA3. 1 cells into one side of axilla. The volumes of xenograft tumor was evaluated according to L × t2 × 0.52. Microvessel density(MVD) on the xenograft tumor section was detected by IHC with VWF antibody. Results NB4 cell xenograft tumors were developed in all mice of both the two groups. The growth of NB4/VEGF-C cells in nude mice was faster than in controls. There were statistically significant differences in the volume and weight of xenograft tumor between NB4/VEGF-C and NB4/pcDNA3. 1 cell groups [ (631.44 ± 114.42) mm3 vs (491.22 ± 70.05) mm3 ](P=0.006) and [(321.78 ±27.84) mg vs (288.57 ±40.12) mg] (P=0.031), respectively. MVD in xenograft tumor of NB4/VEGF-C cells [ (50.8 ± 11.7)/mm2 ] was higher than that in controls [ ( 18.9 ±7.0)/mm2] (P =0.021 ). The Bcl-2 protein level in NB4/VEGF-C cells xenografts was higher than that in controls. Conclusion VEGF-C could promote proliferation of NB4 cells by inducing angiogenesis and inhibit cells apoptosis by upregulating antiapoptotic Bcl-2 protein expression in NB4 cells xenograft tumor.     

非血缘双份脐血移植植入规律及植入动力学研究

 【摘要】　目的　研究非血缘双份脐血移植（DUCBT）的植入规律及植入动力学。方法　选择接受DUCBT的血液病患者29例,采用复合扩增荧光标记短串联重复序列结合聚合酶链反应（STR-PCR）方法对供受者16个特异性等位基因进行定量分析,了解造血细胞嵌合体动态变化,判断植入情况,研究DUCBT植入规律。同时,通过对两份脐血复苏后有核细胞总数（TNC）、CD+34细胞数、CD+3细胞数和NK细胞数、冷冻前集落形成单位（CFU）和粒-巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM）进行分析,研究植入份脐血的植入动力学和植入份脐血的特点。结果　29例患者中,23例获得植入,其中22例为单份脐血的优势植入,1例为两份脐血的均势植入。22例单份脐血优势植入者中,20例移植后14 d、另2例移植后21d STR-PCR检测呈100 %单份脐血嵌合体;6例未获得植入的患者,移植后14 d STR-PCR显示2例呈双份脐血嵌合体,4例呈双份脐血或单份脐血与受者混合嵌合体,移植后21 d外周血和移植后30 d骨髓均呈100 %受者嵌合体。DUCBT后7 d STR-PCR检测结果与是否植入不一致（kappa＝0.112,P＝0.198）,14、21 d外周血和30 d骨髓标本均一致（kappa＝0.811,P＝0.001;kappa＝0.900,P＝0.001;kappa＝0.900,P＝0.001）。DUCBT获得植入患者植入份与非植入份脐血相比,复苏后TNC、复苏后CD+34细胞数、冷冻前CFU、冷冻前CFU-GM、复苏后CD+3细胞数、复苏后NK细胞数差异均无统计学意义（P＝0.783、0.455、0.615、0.534、0.114、0.463）。结论　采用STR-PCR技术检测供受者16个特异性等位基因的定量分析方法确定DUCBT后的植入状态是敏感和特异的,DUCBT后14 d可作为确定脐血是否植入的时间。DUCBT中优势植入份脐血的特点仍不清楚,需进一步研究。     

弥漫大B细胞淋巴瘤中miR-5585-3p的表达及其意义

目的探讨miR-5585-3p在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中的表达与临床病理特征的相关性及其预后意义。方法选取12例DLBCL石蜡标本进行基因芯片扫描,依据fold change≥1.5、P≤0.05筛选出差异性表达的miRNAs,miR-5585-3p是其中之一。采用qRT-PCR检测95例DLBCL石蜡标本中miR-5585-3p的表达,15例淋巴结反应性增生组织作为对照,并结合患者临床病理学资料进行分析。结果 miR-5585-3p在DLBCL中的表达量显著高于淋巴结反应性增生组织(P0.001),且non-GCB亚型miR-5585-3p的表达水平是GCB型的2.4倍(P=0.006)。miR-5585-3p高表达与淋巴瘤国际预后指数(IPI)呈正相关(P=0.005)。Kaplan-Meier生存分析显示:DLBCL中高表达miR-5585-3p的患者生存率明显低于miR-5585-3p低表达者(P=0.049)。预后多因素Cox分析显示,年龄60岁(P=0.010)、IPI评分3~5分(P=0.004)、高表达miR-5585-3p(P=0.014)为DLBCL独立不良预后指标。结论 miR-5585-3p高表达可能与DLBCL不良预后有关。     

伴有t(8;21)急性髓细胞白血病的预后多因素分析

目的了解伴有t(8;21)急性髓细胞白血病(AML)的生物学特征及多因素对其疗效及预后的影响。方法回顾分析54例伴有t(8;21)AML患者,以同期收治的83例正常染色体核型的AML患者作为对照。分析细胞形态学、染色体、免疫表型、AML1/ETO表达及临床疗效等资料。结果54例t(8;21)AML患者M2型占59.2%,初诊时骨髓中原始细胞比例(47.92±21.63)%,CD34、CD33、CD7、CD117、CD19阳性率分别为66.04%、43.40%、3.71%、67.92%、62.26%,附加染色体异常占44.4%。完全缓解(CR)率、复发率、平均CR持续时间分别为75.68%、55.56%、225 d。结论 t(8;21)AML与正常染色体核型AML比较,外周血白细胞计数及骨髓原始细胞数较低(P<0.05),高表达CD34、CD19、CD117(P<0.05),低表达CD33、CD7(P<0.05),CR率和复发率差异无统计学意义。在t(8;21)AML中,CD19表达对缓解率影响不大,CD7与CD19共表达、继发性或合并有其他基因异常等多提示预后不良,t(8;21)AML的疗效及预后受多方面因素影响,不能单纯依靠t(8;21)来评估疗效及预后。     

双表型急性白血病免疫表型检测及其意义

目的 分析双表型急性白血病的免疫表型、临床疗效和预后情况。方法 采用流式细胞仪分析急性白血病的免疫表型,双表型急性白血病诊断依据EGIL标准。结果 双表型急性白血病构成比为6．2％,其中B系、髓系抗原共同表达的占66．7％,T系、髓系共同表达的占33．3％。CD34阳性率为44．4％;9例患中治疗完全缓解3例,部分缓解1例（11．1％）,总有效率44．4％。结论 免疫表型对双表型急性白血病诊断及预后有重要意义,以B系和髓系共同表达最常见,缓解率低,易复发;P170与BAL预后有关。