幽门螺杆菌尿素酶B亚单位核酸疫苗的发酵、纯化及鉴定

目的 大规模发酵、纯化幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(ureB)基因疫苗，并对纯化后的疫苗进行鉴定。方法 大规模发酵DH5α(pT-ureB)，收获的细菌经碱裂解后，用两步离子交换层析方法分离、纯化疫苗，通过紫外分光光度计、酶切、体外转染等对疫苗进行鉴定。结果 发酵幽门螺杆菌ureB核酸疫苗，并经离子交换层析方法纯化获得了高质量的疫苗。结论 纯化的ureBDNA疫苗为进一步的免疫实验奠定了基础。     

幽门螺杆菌疫苗免疫机制的研究进展

幽门螺杆菌(H.pylori)是定植于人体胃粘膜的重要致病菌,而粘膜疫苗以其有效的保护性免疫成为防治H.pyiori的热点,但对相应的免疫机制的认识目前尚不明确.故本文对H.pyiori疫苗的保护性免疫机制中的抗原递呈机制,抗体的作用以及TH细胞反应的作用等研究进展做一概要介绍.     

PELA-BSA微球体外释药的灰色数学模型与结果预测

目的：运用灰色数学理论预测长效缓释蛋白微球的体外释药过程。方法：以复乳法制备PELA蛋白微球作为实验对象，根据灰色数学模型，借助计算机编程，预测PELA蛋白微球的体外释药过程。结果：预测值与实测值平均绝对误差E在2.3-4.6之间，平均相对误差在9.2％-14％范围内。结论：灰色数学理论可用于预测长效缓释释药体系体外释药过程。     

开展生物技术制药学第二课堂体会

生物技术制药是培养高素质医药创新人才的主干课程之一,第二课堂活动可作为该课程重要补充,以保证良好的教学效果。在此,总结自身准备和开展生物技术制药课程第二课堂的经验,为即将开展第二课堂活动的教师提供参考和借鉴。     

肠出血性大肠杆菌0157:H7 LexA蛋白的表达、纯化及鉴定

目的 对EHEC 0157:H7 lexA达、纯化,并检测其免疫活性.方法 lexA基因片段插入表达载体pET22b( ),在E..coli BL21(DE3)中表达.包涵体经洗涤并用8 mol/L尿素溶解,Heparin Agrose亲合柱层析为第-步纯化,Superdex75凝胶过滤层析作为第二步精细纯化,HPLC测定LexA蛋白的浓度,将纯化的kxA蛋白经注射途径免疫家兔,制备兔抗lexA血清,采用免疫双扩、ELISA及Western blot分析LexA的免疫活性.结果 lexA以包涵体形式表达,表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经Heparin Agrose亲合柱层析和凝胶过滤层析两步组合纯化目的 蛋白,经HPLC测定目的 蛋白的最终纯度为98%,表达及纯化的lexA具有良好的免疫活性.结论 在E.coli BL21(DE3)中表达的LexA蛋白具有良好的免疫活性.     

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位Th表位的免疫学特性研究

采用MHC限制性分析、ELISA方法、淋巴细胞增殖实验等方法研究幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)的H- 2~d限制性Th表位U_(546-561)、U_(229-244)、U_(237-251)的免疫学特性。发现抗I-E~d抗体能够抑制U_(546-561)对CD4~+T淋巴细胞的刺激,抗I-A~d抗体能够抑制U_(229-244)、U_(237-251)对CD4~+T淋巴细胞的刺激作用。U_(229-244)、U_(229-244)能刺激CD4~+T淋巴细胞分泌IL-4和IL-10,U_(237-251)刺激CD4~+T淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-2,且U_(546-561)、U_(229-244)、U_(237-251)三个表位肽免疫BALB/c小鼠能够引起针对各自免疫多肽和rUreB的CD4~+T细胞应答。结果表明U_(546-561)为I-E~d限制性Th2表位,U_(229-244)为I-A~d限制性Th2表位、U_(237-251)为I-A~d限制性Th1表位。三个表位之间具有协同刺激效应,可以用于Hp表位疫苗的研究。     

幽门螺杆菌粘膜疫苗的研究进展

胃窦部幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染可引起许多胃十二指肠疾病,包括B型(胃窦)胃炎、消化性溃疡、胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤和胃癌.临床上对Hp感染的治疗主要采用以抗生素为主的治疗方案,虽可在一定程度治愈Hp感染,但不能预防Hp再感染,同时抗生素的使用可导致Hp耐药菌株的产生和带来许多严重的副作用.而Hp疫苗可以解决这一难题,使得Hp疫苗接种成为了根治Hp感染和预防再感染的唯一方法.目前,Hp疫苗的研究进展迅速,粘膜疫苗以其有效的保护性免疫效果成为这一研究的热点.我们对Hp粘膜疫苗的组成、接种途径、免疫效果及保护性免疫机制等方面的研究进展加一综述.     

三种LT突变体的幽门螺杆菌疫苗黏膜免疫佐剂效应比较

目的 探讨3种大肠杆菌不耐热肠毒素突变体在辅佐幽门螺杆菌候选疫苗尿素酶B亚单位(rUreB)中的佐剂效应.方法 各组Balb/c小鼠分别用PBS、rUreB、rUreB LTK63、rUreB LTR72、rUreB LTKR及rUreB CT进行4次口服免疫.ELISA检测胃、肠、气管冲洗液sIgA以及血清IgG亚类(IgG1,IgGa);RT-PCR差异显示T淋巴细胞IFN-γ、IL-4 mRNA;ELISPOT检测肠派伊尔氏结IgA、IgG抗体分泌细胞.结果 ①各rUREB加突变体佐剂组在胃、肠、气管的sIgA和血清IgG1、IgG2a水平显著高于PBS组和单独rUreB组(P＜0.01);②抗原刺激后取自各rUreB加突变体佐剂组T淋巴细胞表达的IFN-γ、IL-4 mRNA显著高于PBS组和rUreB组(P＜0.01);③各rUreB加突变体佐剂组小肠派伊尔氏结抗体分泌细胞数都显著高于PBS组和单独rUreB组(P＜0.01).结论 3种突变体都能辅佐rUreB在小鼠上产生特异的抗rUreB的抗体,且3种突变体诱导的免疫应答可能都是Th1/Th2型.LTR72的佐剂效应强于LTK63及LTKR.LTKR无毒,其稳定性高于LTR72,佐剂活性高于LTK63,是一个有希望的新型黏膜免疫佐剂.     

表达肠出血性大肠杆菌 O157:H7 EspA 抗原的减毒沙门氏菌株的构建

目的 利用平衡致死系统构建表达O157:H7 EspA 的减毒鼠伤寒沙门氏菌.方法 构建表达EspA的重组质粒,再将其转入终宿主菌减毒鼠伤寒沙门氏菌x4550 株中构建成口服活疫苗株,用IPTG进行诱导表达,经聚丙烯酰胺凝胶电泳、Westen-blot检测EspA蛋白的表达情况.并观察重组菌体外培养的稳定性.结果 利用宿主-载体平衡致死系统构建了表达O157:H7 EspA的重组减毒沙门氏菌,经Tricine-SDS-PAGE电泳出现了1条Mr约21 000的蛋白条带,Westen-blot检测能与抗EspA的单克隆抗体发生特异性反应.且在没有选择压力的条件下体外能稳定地繁殖、生长和传代.结论 表达O157:H7 EspA的重组减毒沙门氏菌构建成功,为发展口服抗EHEC O157:H7的疫苗奠定了初步基础.     

幽门螺杆菌粘附素的研究进展

幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)是一种参与多种胃、十二指肠疾病的重要人类病原体 ,可引起慢性胃炎和消化性溃疡 ,并与胃癌密切相关 ,对人类健康构成严重危害。Hp在全世界人群中的慢性感染率达到 5 0 %以上 ,中国人群约有 6亿人口受累于Hp感染 ,大大超过乙肝病毒携带者人数。Hp感染最基本的条件之一是粘附定居 ,其定居因素包括动力、尿素酶和粘附素等。组织学研究表明 ,在胃内Hp只见于胃上皮细胞 ,一般大量存在于胃窦部 ,在胃内定植是Hp致病的前提 ,而粘附则是定植的关键〔1,2〕。Hp之所以能够在胃蠕动时不与食物一起被驱除的原因…