实时定量RT-PCR的原理及方法

实时定量RT-PCR广泛应用于定量检测mRAN表达水平,为基础研究、分子药物学和生物技术研究提供了一种有力的方法。该法具有易操作、高通量、敏感性高和特异性强的特点,随着新酶、新探针和新仪器的发展而得到快速的发展。本文将对实时定量RT-PCR的定量原理、仪器应用、探针种类的研究进展以及细胞因子mRNA表达水平检测上的应用作一综述。     

额窦开口于上鼻道1例

在进行一具成人男性尸体解剖时发现其额窦开口于上鼻道（图1）,报道如下：     

双歧杆菌对早产儿食道pH值的影响及临床意义

目的为探讨双歧杆菌对早产儿食道pH值的影响，及其对早产儿易发生的消化道疾病的防治意义。方法我们采用便携式24hpH值自动记录仪，对61例早产儿进行了食道pH值的动态监测。结果口服双歧杆菌活菌制剂组的30例早产儿，食道pH值明显高于未服药的对照组，t=2．4093，P＜0．05。总pH值＜4的时间占总观察时间的百分比显著小于对照组。并且治疗组发生消化道疾患的人数也较对照组少。结论早产儿口服双歧杆菌活菌制剂可以减少胃食道反流等消化道疾病的发生。     

API2-MALT1融合基因变异体在粘膜相关淋巴组织结外边缘区B细胞淋巴瘤中的分布及凋亡的关系

目的探讨API2-MALT1融合基因变异体在粘膜相关淋巴组织结外边缘区B细胞淋巴瘤(extranodal marginal zone B—cell lymphoma of mucosa—associated lymphoid tissue，MALT)中的分布特点及其转录与肿瘤凋亡的关系。方法将逆转录-聚合酶链反应和巢式聚合酶链式反应结合，检测62例不同部位MALT淋巴瘤中API2-MALT1融合基因的多种变异体；通过TdT介导脱氧核苷酸缺口末端标记技术进行肿瘤细胞的原位凋亡检测；通过逆转录-聚合酶链反应和免疫组化染色检测API2的mRNA和蛋白水平。结果62例MALT淋巴瘤中28例检出API2-MALT1融合基因(45．16％)，为变异体A1446-M1123或A1446-M814，但未检出A1446-M541和A1446-M1150。A1446-M1123(18／28)的检出明显多于A1446-M814(10／28)。融和基因转录在甲状腺MALT淋巴瘤中检出最低，在其它部位的分布无差异。在API2-MALT1^ 组(API2-MALT1mRNA表达阳性组)肿瘤凋亡水平明显高于API2-MALT1^-组(API2-MALT1mRNA表达阴性组)，API2的mRNA和蛋白水平低于阴性组。A1446-M1123^ 与A1446-M814^ 病例之间凋亡和API2的变化无差异。结论MALT淋巴瘤中t(11；18)(q21；q21)的发生有部位差异，A1446-M1123可能是中国人MALT淋巴瘤中API2-MALT1融合基因变异体的主要类型。API2-MALT1融合基因转录与MALT淋巴瘤的凋亡水平和API2的变化有关。     

2450MHz介质复介电常数的测量

目的测量2450MHz频率下蒸馏水和不同浓度NaCl溶液的复介电常数,用以判定系统的可靠性和稳定性.方法根据微扰法得到复介电常数的测量公式,然后通过实验对已知参数的蒸馏水和NaCl溶液进行测量,并计算其复介电常数和电导率,验证计算结果的可靠性和稳定性.结果对计算结果进行统计分析和误差分析,其均值、标准差和变异系数表明,最终结果可与M.I.T标准较好地吻合.结论这种系统可较好地测量2450MHz频率下高损耗介质的复介电常数,测量系统的主要误差是由介质体积的误差引起的,因此精确测量介质体积是测量生物组织等高损耗介质复介电常数的关键.     

图书馆无形资产特性研究(上)

以无形资产为切入点．探讨图书馆在网络环境下与各类信息源及用户的辩证关系；以人为本的知识资本运营．无形资产的投入和知识产权保护比以往更加重要；提出社会无形资产概念：甄别信息资源专有权与公有权．论证图书馆社会角色；辨析图书馆知识管理．无形资产评估、立法理念。     

抑癌基因PTEN与食管癌

PTEN是近年发现的一种与细胞信号传导途径有关的具有双特异性磷酸酶活性的新型抑癌基因。研究表明,该基因的突变与人类多种恶性肿瘤的发生发展密切相关。近年来国内外的学者在食管癌组织中发现,虽然该基因发生突变的频率较低,但其蛋白表达却普遍下降,表达程度与食管癌的恶性程度及预后密切相关。因此,PTEN的低表达可能参与了食管癌的发生发展过程。     

低强度脉冲电磁场对大鼠骨质疏松的影响

目的：观察低强度脉冲电磁场（pulsed electromagnetic fields，PEMFs）对去卵巢诱导骨质疏松症的大鼠生化指标和骨应力的影响。方法：雌性SD大鼠30只，随机等分为3组（n=10），分别为假手术组（Sham）、骨质疏松模型组（Model）、脉冲电磁场照射组（PEMFs）。经适应4wk后，在25mg·Kg^-1戊巴比妥钠腹腔麻醉下，Model组和PEMFs组摘除双侧卵巢．Sham组找到但不切除卵巢。各实验组均在相同环境下饲养，模型制备4wk后开始治疗，由GZY型低强度低频率脉冲电磁场发生仪产生低频脉冲磁场，根据实验要求，我们使用亥姆霍兹线圈形成均匀磁场，PEMFs组经照射刺激治疗，频率14．3Hz，场强2Gs．日照8h。Model组和Sham组正常饲养。治疗8wk后，对各组大鼠血清、尿液中ALP和Ca以及骨应力进行检测。结果：（1）ALP、Ca检测结果：与Model组相比，PEMFs组ALP值、Ca值差异均有统计学意义（P〈0．05）。其中，血清中ALP值，Model组为（275．16±228，57），PEMFs组为（179．30±87．68）；Ca值，Model组为（2，66±0，13），PEMFs组为（2．52±0．05）。（2）骨应力检测结果：Model组为（923．60±34．15Pa），PEMFs组为（1152．85±118，20Pa），组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：研究发现，PEMFs对于促进骨重建、提高Ca吸收和骨应力恢复具有积极作用。     

海藻酸钙/聚组氨酸微胶囊的毒性试验研究

为了考察海藻酸钙/聚组氨酸微胶囊的毒性特征,我们利用MTT比色法和小鼠尾静脉注射法,分别考察了该微胶囊的细胞毒性和急性全身毒性。结果表明：微胶囊浓度≤1.0mg/mL时,材料对L929细胞生长无明显抑制作用;微胶囊浸提液即使在高浸提比（10.0mg/mL）下,浸提产物也无细胞毒性作用。急性全身毒性试验结果显示：微胶囊浸提液不引起急性全身毒性反应,表明微胶囊浸提液无有毒的沥滤物和降解产物产生。说明海藻酸钙/聚组氨酸微胶囊无明显毒性。     

CD3ζ链基因在脐带血T细胞及其CD4+和CD8+T细胞亚群中的表达特点

目的 了解脐带血T细胞及其CD4 和CD8 T细胞亚群的信号传导分子CD3ζ基因的表达特点.方法 采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和相对定量分析法检测60例脐带血单个核细胞和12例纯化脐带血CD4 及CD8 T细胞的CD3ζ基因的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,采用相对定量公式:2-△Ct×100%,计算CD3ζ基因相对mRNA表达量,60例健康成人作为对照.并根据荧光定量PCR熔解曲线特点和序列分析了解CD3ζ基因突变情况.结果 全部脐带血和健康成人外周血单个核细胞均表达CD3ζ基因,不同个体CD3ζ基因表达量有所差异,脐带血T细胞CD3ζ基因相对mRNA表达量为6.7%±5.56%,CD4 和CD8 T细胞的CD3ζ基因相对mRNA表达量分别为6.74%±2.0%和6.88%±1.76%,三者CD3ζ基因表达量均明显高于健康成人(P=0.000,P=0.034,P=0.000).序列分析结果显示尚未发现国外文献所报道的ζ链剪接异构体.结论 本研究率先报道了脐带血T细胞及其CD4 和CD8 T细胞亚群的CD3ζ基因mRNA的表达水平,为进一步了解脐带血T细胞免疫学特点提供新的基础资料.