生理学教学核心理念变革的探讨

医学教育改革更多的是热衷于授课形式和方法的改革,而忽视了真正能够渗透到教学各方面的教学理念的改革。结合对生理学教学目标的反思和“岗位胜任力”培养的需求,将生理学教学的核心理念总结为四个方面：“三观”要正,帮助学生树立平衡观、辩证观和整体观;“三基”要牢,培养学生掌握基本的知识架构体系、基本的知识获取能力、基本的操作技能;重视学以致用和强化人文素养。上述核心理念在教学实践中得到学生的广泛认可,临床医学专业学生对核心理念的评价明显高于护理专业。下一步教学改革的方向是在教学理念的指导下如何细化授课内容,以适应专业设置越来越细化的现状。     

“4＋4”模式八年制临床医学专业神经病学临床实习带教探讨

浙江大学医学院的八年制临床医学专业实行“4+4”模式（4年非医专业本科+4年医学专业培养）;在医学专业教育阶段开展了整合式医学课程模块化教学,旨在培养基础扎实、思维宽广的医学生。在神经、精神与运动模块整合背景下,神经病学临床实习带教中,教学者根据学生特点和自身带教经验,提出重视经典“三基”教育、推广多样化教学、利用云模型尝试新评价方法等措施,以利于医学高级人才培养。     

人cGAS 基因启动子的克隆鉴定及功能初探

目的：构建人环鸟苷酸?腺苷酸合成酶（cyclic guanosine monophosphate?adenosine monophosphate synthase,cGAS）基因启动子,确认其活性,进而对转录调控机制进行初步探究。方法：采用 PCR 方法扩增人cGAS 基因 5′上游 1 254 bp（-1 178~+76 bp）的片段,酶切后连接到pGL3?basic 质粒,以该质粒为模板合成不同长度的启动子质粒。通过双荧光素酶报告基因实验验证不同质粒在Hela细胞中的活性,利用生物信息学方法预测启动子区存在的转录因子结合位点。通过点突变实验验证潜在的转录因子结合位点。结果：人cGAS启动子质粒初步构建成功。转染后,cGAS 启动子重组质粒的相对荧光素酶活性增加（P＜0.05）。人cGAS近端启动子区域（-414~+76 bp）经生物信息学软件分析可能含有 Sp1、CREB、USF1、RAP1、C?JUN、OCT?1等转录因子的结合位点。点突变实验证实Sp1、CREB正向调控该启动子区域。结论：人cGAS近端启动子区域（-414~+76 bp）存在较强的启动子活性,该区域含有多个潜在的转录因子结合位点。转录因子Sp1、CREB调控人cGAS启动子区。     

USPIO作为T1-T2双增强对比剂的初步动物成像研究

目的：研究粒径对超顺磁性氧化铁（superparamagnetic iron oxide,SPIO）纳米颗粒T1和T2弛豫效能的影响,并选取超小粒径SPIO（ultra-small SPIO,USPIO）探究其作为磁共振T1-T2双增强对比剂在体内成像应用中的特点。方法：采用共沉淀法制备3种不同粒径的SPIO。测定样本基本理化性能和磁学特性,采用临床3.0T MRI成像仪,研究不同MRI序列下USPIO大鼠体内对比增强成像特点。结果：成功制备3种不同粒径的SPIO：[A：（14.14±4.94） nm;B：（28.30±7.65） nm;C：（93.81±33.01） nm],测得在不同磁场强度下的T1、T2弛豫效能。小粒径的SPIO纳米颗粒具有更低的r2/r1（0.5 T：2.14）,是潜在的T1、T2双增强对比剂,且低磁场下具有更低的r2/r1,有利于T1增强显影。大鼠成像显示,USPIO在T2加权成像序列下能明显降低肝脏T2成像信号,在短TE的T1加权序列下能明显提高肝脏、心血管T1信号,具有较小分子对比剂更长的成像时间窗。结论：粒径是影响SPIO弛豫效能的重要参数,USPIO具有更低的r2/r1比,是潜在的T1、T2双增强对比剂。     

血浆脂蛋白相关磷脂酶A2与急性心肌梗死患者心功能的相关性研究

目的：研究急性心肌梗死患者血浆脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp?PLA2）浓度变化情况及其与心肌梗死后心功能的相关性。方法：连续入选急性心肌梗死患者90例,测定患者入院即刻（T0）、入院次日（T1）、入院第3天（T2）和入院第7天（T3）血浆Lp?PLA2及心梗后1个月（T4）N端前体脑钠肽（NT?proBNP）水平,并采用二维心脏超声测定T1和T4患者左室射血分数（LVEF）,Pearson相关分析Lp?PLA2与LVEF及NT?proBNP的相关性。以43例同期入院稳定性心绞痛患者和48例健康体检者作为对照。结果：急性心肌梗死患者血浆Lp?PLA2水平呈动态改变,心梗发作时显著增高,而入院第7天后基本降至对照组水平［（61.42±36.99）mg/L vs.（49.83±27.17）mg/L,P > 0.05］。相关性分析显示入院即刻（T0）血浆Lp?PLA2水平与C反应蛋白水平（r=0.06,P > 0.05）及血浆肌钙蛋白T水平（r=-0.07,P > 0.05）均无显著相关性。进一步研究发现入院时（T0）血浆Lp?PLA2水平与T4血浆NT?proBNP水平（P=0.16,P > 0.05）、左室射血分数（LVEF）（r=-0.09,P > 0.05）及T4与T1 LVEF差值（ΔLVEF）（r=0.04,P > 0.05）均无显著相关性。结论：血浆Lp?PLA2水平反映了急性心肌梗死动脉斑块不稳定状态,但与急性心肌梗死患者梗死后心功能恢复情况无关。     

Mmp-2重组真核表达载体的构建及MMP-2蛋白对肝癌细胞的作用机制探讨

目的：构建人基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP-2）基因重组真核表达载体,探讨MMP-2蛋白对肝癌细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法：以肝癌SMMC-7721细胞为研究模型,以基因重组技术构建pEYFP-Mmp-2重组真核表达载体,pEYFP-Mmp-2一过性转染模型细胞过表达MMP-2-YFP,siRNA转染沉默模型细胞内源性MMP-2表达,设立空白对照、MMP-2沉默对照组、MMP-2沉默组、过表达MMP-2融合蛋白对照组、过表达MMP-2融合蛋白组,划痕实验检测细胞迁移能力,侵袭小室实验检测细胞侵袭能力,钙蛋白酶（calcium-activated neutral protease,Calpain）特异性抑制剂Calpeptin抑制Calpain活性,蛋白印记实验检测MMP-2、MMP-2-YFP、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vi－mentin）表达变化。结果：成功构建人Mmp-2重组真核表达载体pEYFP-Mmp-2。pEYFP-Mmp-2转染过表达MMP-2融合蛋白组细胞高表达MMP-2-YFP。与MMP-2沉默对照组相比,MMP-2沉默组内源性MMP-2表达明显下调（P=0.000）,细胞12 h、24 h及48 h迁移率明显降低（P=0.000或P=0.001）,48 h侵袭率明显降低（P=0.004）,E-cadherin表达明显上调,N-cadherin及Vimentin表达明显下调（P=0.000）。与过表达MMP-2融合蛋白对照组相比,过表达MMP-2融合蛋白组12 h、24 h及48 h迁移率明显增强（P=0.015或P=0.001）,48 h侵袭率明显升高（P=0.011）,细胞E-cadherin表达明显下调,N-cadherin及Vimentin表达明显上调（P=0.003或P=0.001）。Calpeptin预处理明显降低过表达MMP-2融合蛋白组细胞迁移率和侵袭率（P=0.000）,上调E-cadherin,下调N-cadherin及Vimentin蛋白表达水平（P=0.000）。结论：本实验通过基因重组技术成功构建人Mmp-2重组真核表达载体pEYFP-Mmp-2,成功表达MMP-2-YFP 融合蛋白;并发现MMP-2通过调节Calpain介导肝癌SMMC-7721细胞迁移、侵袭及EMT。     

供体血钠、供受体血钠差值对肝移植患者术后的影响

目的：探讨肝移植供体血钠、供受体血钠差值对肝移植患者术后的影响。方法：回顾性分析2016年7月至2018年5月我院行供体器官维护并行肝移植术的供体及肝移植患者分别20例,记录临床资料进行分析。结果：①供体最高血钠Na>155 mmol/L与Na<155 mmol/L两组肝移植患者术后最高总胆红素、最高丙氨酸氨基转移酶（alanine transaminase,ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（aspartate transaminase,AST）、肝功能恢复时间、重症监护病房（intensive care unit,ICU）住院时间、总住院时间差异无统计学意义。②供体移植时血钠分为Na>155 mmol/L与Na<155 mmol/L 2组,其中Na<155 mmol/L组术后最高ALT更高[（747.17±375.34） U/L vs. （357.00±190.50） U/L,t=-2.700,P=0.015]。③供受体血钠差值ΔNa<10 mmol/L、ΔNa=10~20 mmol/L、ΔNa>20 mmol/L 3组肝移植患者术后最高ALT有差异[（805.00±332.90） U/L、（329.75±237.43） U/L、（329.60±186.21） U/L,F=6.714,P=0.007];两两分析示ΔNa<10 mmol/L组肝移植术后最高ALT比其他2组更高（P=0.012,P=0.007）,ΔNa=10~20 mmol/L与ΔNa >20 mmol/L组无统计学差异（P=0.999）。④供受体血钠差值ΔNa与肝移植患者术后最高ALT两者存在线性负相关（相关系数R=-0.579,P=0.007）,ΔNa越小,术后最高ALT越大。⑤回归分析示肝移植患者术前终末期肝病模型评分（model for end-stage liver disease,MELD）是移植术后感染并发症发生独立危险因素。结论：供体移植时血钠低于155 mmol/L肝移植患者术后最高ALT更高;供受体血钠差值ΔNa越小,术后最高ALT更高;MELD评分是肝移植患者术后感染并发症的独立危险因素。     

Next-generation Sequencing Study of Pathogens in Serum from Patients with Febrile Jaundice in Sierra Leone

Objective People in Western Africa suffer greatly from febrile jaundice, which is caused by a variety of pathogens. However, yellow fever virus(YFV) is the only pathogen under surveillance in Sierra Leone owing to the undeveloped medical and public health system there. Most of the results of YFV identification are negative. Elucidation of the pathogen spectrum is required to reduce the prevalence of febrile jaundice. Methods In the present study, we used Ion Torrent semiconductor sequencing to profile the pathogen spectrum in archived YFV‐negative sera from 96 patients in Sierra Leone who presented with unexplained febrile jaundice. Results The most frequently identified sequencing reads belonged to the following pathogens: cytomegalovirus(89.58%), Epstein‐Barr virus(55.21%), hepatitis C virus(34.38%), rhinovirus(28.13%), hepatitis A virus(20.83%), coxsackievirus(10.42%), Ebola virus(8.33%), hepatitis E virus(8.33%), lyssavirus(4.17%), leptospirosis(4.17%), chikungunya virus(2.08%), Crimean‐Congo hemorrhagic fever virus(1.04%), and hepatitis B virus(1.04%). Conclusion The distribution of sequencing reads suggests a broader spectrum of pathogens for consideration in clinical diagnostics and epidemiological surveillance in Sierra Leone.     

rhGLP-1（7-36）联合他克莫司对人肝细胞Akt的作用研究*

目的 观察重组人胰高血糖素样肽-1（7-36）[rhGLP-1（7-36）]联合他克莫司作用于人肝细胞系HL7702细胞系后对Akt表达的影响。方法 选用处于对数生长期的人肝细胞系HL7702,分为4组：对照组、G组、F组及GF组。对照组用等量的培养基处理90?min;G组用含100?nmol/L的rhGLP-1（7-36）培养基处理90 min; F组用含5?mg/L的他克莫司处理90?min;GF组用含100?nmol/L的rhGLP-1（7-36）及5?mg/L的他克莫司处理90?min。Western blotting检测各组Akt蛋白表达水平。结果 各组p-AktThr308相对表达水平差异有统计学意义（P?< 0.05）;G组、F组及GF组p-AktThr308相对表达水平与对照组比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,G组、F组及GF组均升高;各组p-AktSer473相对表达水平差异无统计学意义（P?>0.05）;G组、F组及GF组p-AktSer473相对表达水平与对照组比较,差异无统计学意义（P?>0.05）。结论 rGLP-1（7-36）联合他克莫司能使Akt蛋白活化,提示GLP-1可能不依赖Akt蛋白改善他克莫司引起的肝脏脂质代谢紊乱。     

乙型丙型肝炎病毒合并感染细胞模型的建立

目的：本文拟利用慢病毒载体,在可感染丙型肝炎病毒（HCV）的Huh7.5.1细胞中过表达人肝细胞乙型肝炎病毒（HBV）受体钠离子牛磺胆酸共转运蛋白（sodium taurocholate cotransporting polypeptide, NTCP）编码基因,建立Huh7.5.1- hNTCP细胞模型,使其可以被HBV、HCV共同感染。方法：使用携带人NTCP编码基因、GFP（green fluorescent protein）基因、嘌呤霉素抗性基因的GV358重组慢病毒载体,以50的感染复数（MOI）感染Huh7.5.1细胞。经过嘌呤霉素筛选获得稳定表达人NTCP基因的Huh7.5.1-hNTCP细胞株,并通过Western-blotting验证NTCP蛋白的表达。使用HepAD38细胞来源的HBV感染Huh7.5.1-hNTCP细胞,通过ELISA及qPCR等方法检测HBV感染后不同时间点HBsAg、HBeAg的表达以及HBV DNA的复制。HBV感染后24小时予以HCV-JFH1感染,检测合并感染状态下HBV DNA以及HCV RNA的复制。结果：Western-blotting 结果表明Huh7.5.1-hNTCP细胞株可稳定表达HBV受体NTCP。HBV感染Huh7.5.1-hNTCP细胞后ELASA、qPCR结果显示：HBsAg、HBeAg、HBV DNA合成逐渐增加,并在第9天达峰。HBV/HCV合并感染Huh7.5.1-hNTCP细胞后,qPCR检测结果显示不同时间点HBV DNA、HCV RNA复制逐渐增加。结论:建立了Huh7.5.1-hNTCP细胞模型,该模型可被HBV/HCV合并感染。