双色荧光原位杂交用于慢性粒细胞白血病干扰素治疗效果的监测

为了探讨双色荧光原位杂交（D-FISH）方法对CML病人干扰素治疗后疗效监测的意义，本研究采用D-FISH方法对慢性粒细胞白血病（CML）病人应用干扰素治疗前后骨髓间期核细胞进行bcr/abl融合基因的检测，并与RT-PCR方法检测bcr/abl mRNA及传统细胞遗传学方法检测Ph染色体的结果进行比较。结果显示，22例CML病人D-FISH bcr/abl融合基因在干扰素治疗前均为阳性，其平均检出率在干扰素治疗前后分别为96.4％和58.6％，其中2例治疗前P染色体阴性病人，D-FISHbcr/abl融合基因在干扰素治疗前后平均检出率分别为94.0％和70.1％。D-FISH方法检测的22例病人中，4例为部分反应，4例为微小反应，其余14例为无反应。与传统的细胞遗传学方法相比较具有良好的相关性。结果：D-FISH方法直接检测CML病人间期核细胞的bcr/abl融合基因，克服了传统的细胞遗传学只能进行分裂中期核细胞分析及RT-PCR方法不能定量检测的不足，为CML干扰素治疗后克隆缓解程度的评定提供了更方便、可靠的方法。     

多发伤合并休克早期大鼠肺脏中细胞凋亡的实验研究

目的：观察大鼠多发伤合并休克早期肺脏中细胞凋亡的发生情况。方法：采用ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳、原位末端标记法（ＩＳＥＬ），在光镜和透射电镜下检测细胞凋亡，并测定ＤＮＡ片段百分率（ａｐ％）作定量分析。结果：检测到细胞凋亡所特有的ＤＮＡ电泳梯形带，ＩＳＥＬ法亦显示出阳性结果。复苏后６小时，ａｐ％随创伤程度的加重而升高，且与肺通透指数成正相关（ｒ＝０．６２１，Ｐ＜０．００１）。在６处创伤合并休克组，复苏后１小时ａｐ％已显著升高（５．３％±０．６％，Ｐ＜０．０１），３小时即达顶峰（３１．０％±３．０％，Ｐ＜０．０１），以后逐渐下降。形态学显示，细胞凋亡发生于肺脏中的多种细胞（包括肺泡上皮细胞、血管内皮细胞和中性粒细胞）。结论：多发伤合并休克早期大鼠肺脏中发生细胞凋亡，且细胞凋亡可能在早期的肺功能损伤中发挥作用     

聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子对大鼠腹腔内猪肝细胞异种移植免疫排斥反应的影响

背景:课题组前期实验用Ⅰ型胶原包埋聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子黏附培养的猪肝细胞治疗急性肝衰竭大鼠取得了良好的疗效.目的:进一步观察聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子在猪肝细胞腹腔内移植治疗急性肝衰竭大鼠过程中对免疫排斥反应的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-05/2006-05在南通大学肝胆外科研究所和神经再牛实验室完成.材料:原位胶原酶循环肝灌注法分离猪肝细胞:SD大鼠64只D-氨基半乳糖腹腔内注射制作急性肝衰竭模型.方法:64只模型人鼠随机分为4组:模型组不干预;纳米胶原肝细胞组将Ⅰ型胶原凝胶包埋的聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子黏附培养24h的猪肝细胞植入大鼠腹腔内,并用大网膜适当包裹:胶原肝细胞组将Ⅰ型胶原凝胶同定培养24 h的猪肝细胞植入大鼠腹腔内:单纯肝细胞组将振荡培养24h的猪肝细胞悬液直视下注入大鼠的小网膜囊内.移植在造模48h后进行.移植细胞量均为5.0×107个肘细胞.主要观察指标:移植后1,2,3,5,7 d取大鼠血清检测白细胞介素2、干扰索γ、IgG、IgM浓度,以模型组数据为移植前指标:移植后1,3,7 d取腹腔移植物光镜下观察移植肘细胞的病理变化.结果:移植后7 d内各组血清白细胞介素2、干扰素γ水平差异无显著性.各组血清IgG水平在移植后逐渐升高,第3天达到最高峰,随后逐渐下降;移植后2,3 d,纳米胶原肝细胞组血清IgG质量浓度低于其他2组(P＜0.05),至移植后7d,纳米胶原肝细胞组血清lgG水平高于单纯肝细胞组(P＜0.05).各组血清IgM质量浓度在移植后第1,2天明显低于移植前(P＜0.05),移植后第3～7天逐渐升高,其中纳米胶原肝细胞组IgM质量浓度高于其他2组(P＜0.05).移植后第3天胶原肝细胞组移植肝细胞数量明显减少,单纯肘细胞组则几乎找不到存活的肝细胞,而纳米胶原肝细胞组移植后第7天仍能找到存活肝细胞.结论:聚乳酸-O-羧甲摹壳聚糖纳米粒子在猪肝细胞腹腔内移植治疗大鼠急性肝衰竭过程中对体液免疫排斥反应具有一定的抑制作用.     

儿童孤独症康复因素分析

目的：探讨儿童孤独症康复的相关因素。资料来源：应用计算机检索Medline 1990—01／1998—12有关儿童孤独症的文献．检索词为“autism，rehabilitation，therapy”，限定语言种类为English；同时应用计算机检索www．cnki．net（中国知网）电子期刊全文数据库1990-01／2005-11有关儿童孤独症的文献，检索词为“孤独症，康复，治疗”，限定语言种类为中文。 资料选择：对资料进行初审，选择有关儿童孤独症的病因、临床表现、早期诊断、康复治疗及康复治疗影响因素等方面的文献，排除重复性研究。 资料提炼：收集到符合要求的文献41篇，排除19篇重复性研究，22篇符合纳入标准，被选为参考文献。 资料综合：通过检索发现，单独研究儿童孤独症康复因素的文献较少，因此对儿童孤独症的病因、临床表现、诊断、康复及其相关影响因素进行综合分析。影响儿童孤独症康复治疗的因素包括以下几点：①孤独症患儿的智力水平。②孤独症患儿的语言发育水平。③社会、家庭的支持及患儿父母的文化素质。④孤独症患儿的其他并发症。 结论：儿童孤独症的康复是多角度、多层次的，与患儿疾病本身的严重程度、病因及并发症是否及时控制有关，早期预防、早期诊断与治疗是孤独症患儿康复的关键。特别需要注意的是治疗或教育要注重个体化。     

量子点标记神经生长因子纳米化颗粒修饰羊膜间充质干细胞移植治疗大鼠实验性脑损伤

目的:量子点是由Ⅱ-Ⅵ族元素或Ⅲ-Ⅴ族元素组成的纳米颗粒,因三维上受到量子限制而表现出独特的光学特征,其标记的神经生长因子纳米化颗粒由于是纳米级,易通过细胞生物膜.实验观察负载此纳米颗粒的羊膜间充质干细胞移植治疗大鼠脑损伤的效果.方法:实验于2007-01/10在郑州大学完成.①材料:SPF级健康成年Wistar大鼠40只,按体质量编号分为4组:神经生长因子细胞组、常规细胞组、损伤模型组、培养基对照组,10只/组,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.羊膜间充质干细胞来自健康产妇胎盘羊膜,产妇对实验知情同意,实验经医院医学伦理委员会批准.量子点神经生长因子纳米粒由兰州大学功能有机分子化学国家重点实验室协助构建.②实验方法;向羊膜间充质干细胞中加入含10%胎牛血清、20 μg/L碱性成纤维生长因子的DMEM/F12培养基,置于37 ℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养箱中培养,待细胞达80%～90%融合时胰酶消化传代.取传至第3代细胞,分别加入终浓度为20,40,60 μg/L的量子点标记神经生长因子纳米粒进行修饰处理72 h,并设立空白对照和空载量子点对照.4组大鼠均采用Feeney自由落体法建立脑损伤模型,神经生长因子细胞组于大鼠损伤部位注入经40 mg/L量子点标记神经生长因子纳米粒修饰的羊膜间充质干细胞悬液10 μL(约4.0×108 个细胞),常规细胞组注入等量单纯量子点标记的羊膜间充质干细胞悬液,培养基对照组注入等量DMEM/F12细胞培养基,损伤模型组不给予移植操作.③实验评估:经量子点标记的神经生长因子纳米粒修饰后,MTT法检测细胞活性,荧光显微镜观察量子点在细胞内的分布,免疫细胞化学鉴定细胞分化.细胞移植后对各组大鼠运动及感觉功能进行评分,免疫组织化学染色及荧光显微镜观察量子点荧光化羊膜间充质干细胞在脑内存活分化和迁移情况.结果:①细胞生长率:培养72 h后与空白对照和空载量子点对照细胞比较,20,40,60 μg/L量子点标记的神经生长因子纳米粒组细胞生长率均呈增长趋势,40 μg/L时细胞无明显生长抑制,达60 μg/L时增长有所减慢.②体外量子点分布:荧光显微镜连续观察羊膜间充质干细胞.约6 h后开始摄入量子点标记的神经生长因子纳米粒,随着时间延长摄入量逐渐增加,于32 h荧光强度达高峰.③体外免疫细胞化学鉴定:经量子点神经生长因子纳米粒修饰的羊膜间充质干细胞表达神经元烯醇化酶和神经丝蛋白,向神经元方向分化,但不表达胶质纤维酸性蛋白.④神经行为学检测结果:细胞移植后24h,各组神经行为学各项指标评分均基本相似(P＞0.05);移植后10,20 d,损伤模型组与培养基对照组无明显变化,神经生长因子细胞组、常规细胞组运动及感觉功能各项评分均显著降低(P＜0.05),且神经生长因子细胞组下降幅度明显强于常规细胞组(P＜0.05).⑤免疫组织化学和荧光检测结果:经量子点神经生长因子纳米粒修饰的羊膜间充质干细胞在脑组织损伤区存活,并向周围迁移.结论:量子点是一种较好的细胞示踪剂,负载其标记的神经生长因子纳米化颗粒的羊膜间充质干细胞移植能够改善脑损伤大鼠神经功能.     

高频重复经颅磁刺激对健康被试者情绪词注意的影响

目的:观察左侧背外侧前额叶高频重复经颅磁刺激对健康志愿者情绪信息注意特点的影响。方法:实验于2005-10/12在北京大学精神卫生研究所完成。招募北京大学精神卫生研究所及北京大学医学部的33名健康被试者,在完成一般情况问卷、焦虑特质-状态量表、情绪词线索-靶子测验后,接受20Hz重复经颅磁刺激左侧背外侧前额叶,5min后完成情绪词线索-靶子测验情绪词注意实验采用线索提示范式,以情绪词为线索,所采用情绪词选自中国科学院心理所开发的标准化情绪词系统,包括正性情绪词、中性词、负性情绪词各20个,各种情绪词的维度都进行了匹配。靶子为直径3mm的黑色圆点或者同样大小的三角形,被试需要对靶子做出分类反应:靶子为圆形时,被试按下游戏杆右侧的1号键,靶子为三角形时,则按右侧的2号键。线索和靶子呈现在距离中央注视点(白色 )左右各2cm的2个白色方框内,方框高5.3cm,宽3cm。实验在微机上完成,被试距显示屏50cm。实验设计为3×2被试内实验设计,第1个因素为线索即情绪词极性(正性、中性、负性);第2个因素为靶子出现的空间位置是否被提示,可将空间位置分为提示位置(线索有效位置)和非提示位置(线索无效位置)线索-靶子呈现时间为300ms,线索和靶子出现在同一侧的为有效线索,否则为无效线索。比较重复经颅磁刺激前后健康被试的情绪词注意实验结果。结果:纳入正常被试33人,有2人重复经颅磁刺激后未完成情绪词注意实验,最终进入结果分析31人。①健康被试接受重复经颅磁刺激前的情绪词注意测验多因素方差分析结果:线索的有效性这一因素(线索化)对反应时影响显著[F(1,30)=11.5,P=0.001],而情绪词的极性(正性、负性、中性)对有效和无效线索位置的反应时没有影响。②与重复经颅磁刺激前比较,重复经颅磁刺激后3种极性词语的有效线索位置,对靶子的平均反应时降低(刺激前,中性:729.79±105.23;正性:737.16±104.73;负性:728.92±107.26;刺激后:中性:674.07±86.22;正性:689.88±88.47;负性:679.03±82.77)。其中,中性以及负性情绪词线索下平均反应时减少差异具有显著性(中性:t=2.309,P=0.024;负性:t=2.073,P=0.042;正性:t=1.945,P=0.056)。③在无效线索化位置,各种极性的情绪词线索条件下,重复经颅磁刺激前后平均反应时没有差异。结论:20Hz重复经颅磁刺激左侧背外侧前额叶提高了健康被试的注意定向,而对注意滞留没有影响;20Hz重复经颅磁刺激没有造成健康被试对情绪词的注意偏向。     

心肌梗死后左心室重构与脑钠素的关系

目的:探讨血浆脑钠素水平与急性心肌梗死acutemyocardialinfarction,(AMI)后左室重构的关系,以探讨脑钠素预测心肌梗死预后的可能机制。方法:2003-01/07哈尔滨医科大学第一临床医学院心脏监护病房住院的首次AMI患者185例。选取符合纳入标准的110例为AMI组,男78例,女32例。选择同期本院体检的健康志愿者25例作为对照组,男18例,女7例。所有患者于AMI急性期测定血浆脑钠素浓度,并于取血后24h内以及3个月后行超声心动图检查。根据3个月内左心室容积指标变化将AMI患者分为左心室重构组和非重构组。对比各自的心动超声指标,观察心室重构组与非重构组患者的血浆脑钠素浓度差异。结果:AMI组患者血浆脑钠素浓度犤(416.7±208.0)ng/L犦明显高于对照组对犤(61.8±34.1)ng/L犦(t=2.9,P<0.01)。重构组血浆脑钠素浓度犤(466.3±211.2)ng/L犦明显高于非重构组对犤(301.5±198.7)ng/L犦(t=2.91,P<0.05);而且重构组急性期左室舒张末容积指数明显高于非重构组(t=3.32,P<0.01);左室射血分数明显低于非重构组(t=3.01,P<0.05)。血浆脑钠素浓度与恢复期左室容积指数呈正相关r=0.35,P<0.01)。(结论:AMI急性期血浆脑钠素浓度显著升高,且与AMI后心室重构有关。     

血液疾患骨髓微血管密度的研究

为了探讨血液系统疾病骨髓血管新生的状态及意义，采用改良的乙二醇-甲基丙烯酸酯(GMA)塑料包埋骨髓病理切片和免疫组织化学染色检测贫血、急性髓细胞白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性髓细胞白血病(CML)患者的骨髓微血管密度(MVD)。结果显示，初诊的恶性血液病患者在治疗前骨髓MVD明显增加；急性白血病化疗完全缓解后骨髓MVD降至正常水平，未缓解者下降程度小，复发者再次升高至化疗前水平；贫血患者骨髓MVD也比对照组明显增高，但远不如急性白血病骨髓MVD增高的幅度大。结论：骨髓血管新生在急性白血病发生过程中有着重要的作用，抗血管新生治疗可能成为治疗白血病的新策略。     

儿童肥胖与父母的养育行为

目的:综述父母养育行为与儿童肥胖的关系,了解儿童肥胖的家庭影响因素以及干预的可能性,以便更好地从家庭角度理解儿童肥胖,并探寻有效的治疗模式。资料来源:应用计算机检索Elseview1995-06/2005-12和EBSCOhost1994-01/2005-12期间父母养育行为与儿童肥胖的关系的相关文献,检索词为“children,obesity,family,parenting”,限定语种为English;同时计算机检索中国期刊网等数据库1995-06/2005-12期间相关文献,检索词为“肥胖,家庭,父母”,限定语种为中文,获得相关资料。资料选择:选择与儿童肥胖和父母、家庭相关的文献。纳入标准:相关研究、归因研究、干预性研究。排除标准:重复研究。资料提炼:共收集32篇相关的文献,选择了与主题最为相近的19篇文献,主要以相关研究、归因研究为主,少量是干预性研究。排除13篇为重复研究。资料综合:①父母的体质量指数、收入、教育程度和观念等都与儿童肥胖有关系,父母否认孩子肥胖,不控制孩子的饮食可能是这类儿童肥胖的主要原因。对于儿童的自尊、自我概念等个性因素的培养失利可能也是造成儿童肥胖的原因。②在体质量控制行为方面的研究开始考虑到父母因素以外的社会因素、家庭环境以及进食过程的具体行为控制过程。油脂的过多摄入、看电视减少了活动时间、母亲对孩子饮食行为的不正确控制都是导致儿童肥胖的原因。③干预性研究显示改变父母不合理的信念和饮食控制行为等方式能够对改善儿童肥胖起积极的促进作用。④肥胖儿童的家庭因素研究进入了一个较为成熟的阶段,在对儿童肥胖原因进行探索时,可能还需要对父母的养育观念、父母的自我概念以及对子女的期望等方面深入研究,还应考虑父母的综合养育行为。结论:父母养育行为是影响儿童肥胖的重要因素之一。改善父母的观念、态度以及对儿童的饮食控制行为等方面有助于减轻儿童肥胖。