经典型蛋白激酶Cγ对突触蛋白-Ⅰ磷酸化调节及其在脑缺血损伤中的作用

目的探讨经典型蛋白激酶Cγ(c PKCγ)对突触蛋白-Ⅰ磷酸化水平的影响及其在小鼠原代脑皮层神经元氧-糖剥夺(OGD)缺血损伤中作用。方法借助c PKCγ基因敲除(c PKCγ~(-/-))小鼠,利用小鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)在体缺血模型和原代脑皮层神经元OGD离体细胞缺血模型,采用免疫共沉淀(Co-IP)、蛋白免疫印迹和免疫荧光等生物化学技术,验证c PKCγ与突触蛋白-Ⅰ的相互作用,探讨c PKCγ对突触蛋白-Ⅰ磷酸化水平的调节及小鼠原代脑皮层神经元OGD损伤后对神经元形态的影响。结果免疫共沉淀结果证明,正常及缺血小鼠脑皮层组织中c PKCγ与突触蛋白-Ⅰ均存在相互作用;对突触蛋白-Ⅰ5个可能的丝氨酸磷酸化位点进行筛选发现,只有Ser549和Ser553位点的磷酸化水平在OGD和c PKCγ敲除前后有明显变化;进一步统计分析得出,野生型(c PKCγ~(+/+))小鼠原代脑皮层神经元中,OGD处理使突触蛋白-ⅠSer549和Ser553位点的磷酸化水平显著降低(每组n=5,与野生型常氧组相比P0.05),c PKCγ基因敲除可显著降低上述两个位点的磷酸化水平(每组n=5,与野生型常氧组相比P0.05),而OGD处理后降低趋势更明显(每组n=5,与野生型OGD组相比P0.05);除此之外,OGD处理可使c PKCγ~(+/+)和c PKCγ~(-/-)脑皮层神经元突起的长度和数目均显著降低(每组n=8,与野生型常氧组相比,P0.05),c PKCγ~(-/-)组降低现象更加显著(每组n=8,与野生型OGD组相比,P0.05)。结论缺血/低氧损伤情况下,c PKCγ可能通过调节突触蛋白-ⅠSer549和Ser553磷酸化水平影响神经元突起的形态,从而保护神经元免受缺血/低氧损伤。     

Notch3诱导人小细胞肺癌H446细胞G_0/G_1期阻滞及其机制

目的探究Notch3对人小细胞肺癌H446细胞增殖和细胞周期的影响及其分子机制。方法将人Notch3真核表达质粒、人HES1真核表达质粒、人鼠双微基因2(MDM2)基因沉默表达质粒及其空质粒分别转染H446细胞,采用流式细胞术检测细胞周期,采用RT-PCR法检测Notch3和MDM2的mRNA水平,采用Western blotting方法检测Notch3、HES1、MDM2、Rb和P21蛋白表达水平。结果 Notch3可抑制H446细胞增殖并导致G_0/G_1期阻滞(P0.05),上调HES1蛋白表达水平和下调MDM2蛋白表达水平(P0.05);HES1高表达也能使MDM2蛋白表达水平下降(P0.05),但对其mRNA水平无影响;沉默MDM2基因可抑制H446细胞增殖(P0.05),并使H446细胞中Rb和P21蛋白表达水平升高(P0.05)。结论 Notch3可通过HES1抑制MDM2蛋白表达,进而上调Rb和P21蛋白表达水平,抑制H446细胞增殖并阻滞H446细胞于G_0/G_1期。     

脑深髓静脉的磁敏感加权成像

目的运用磁敏感加权成像(SWI)技术对健康人群深髓静脉进行显影,从而获取深髓静脉的管径、长度、分布及回流途径的数据。方法对60名健康志愿者进行3.0T的磁共振检查。所得原始图像经Extended MR workspace 2.6.3.4图像工作站后处理后,获取相关数据。通过Photoshop CC 2015将T1WI与SWI重建图进行融合,分析静脉走形与周围脑组织的关系。结果深髓静脉在SWI重建图像上能清晰显影,其直径较为统一,范围在0.2~0.3mm。根据深髓静脉的分布,可以将深髓静脉划分为3个区:前区位于额叶深部白质;中区位于中央前后回、缘上回、角回深部白质;后区位于枕叶深部白质。深髓静脉在前区的数量为4~10支;在中区为8~19支;在后区为3~7支。深髓静脉在中区的长度最长。前区、中区和后区的深髓静脉分别回流到透明隔前静脉和尾状核前静脉、尾状核横静脉、侧脑室内侧静脉。结论 SWI技术可以清晰显示深髓静脉,这为构建脑髓质静脉网络提供了可能,同时也为异常的深髓静脉的划定标准提供了依据。     

贵州某白酒对大鼠睾丸间质细胞内类固醇激素急性调节蛋白表达及血清睾酮水平的影响

目的探讨摄入贵州某54°白酒后,不同时程及不同剂量对大鼠睾丸间质细胞内类固醇激素急性调节蛋白(St AR)表达及血清睾酮水平的变化,以期为科学饮酒提供基础资料。方法正常成年雄性SD大鼠69只,随机分为正常对照组(n=15)及实验组(n=54)。实验组分为低剂量组0.8ml/(kg·d)、中剂量组1.6ml/(kg·d)及高剂量组2.4ml/(kg·d),实验组大鼠每日灌胃2次。分别于第4周末、第8周末、第12周末采血清,取睾丸组织。采用免疫组织化学SABC法、图像分析、Western blotting检测睾丸组织St AR的表达,采用化学发光法检测大鼠血清睾酮水平。结果各实验组的血清睾酮水平与正常对照组比较未见明显异常,差异无统计学意义(P0.05)。St AR免疫组织化学阳性产物存在于睾丸间质细胞胞质内;与正常对照组比较,4周、8周、12周各剂量组St AR免疫染色及平均吸光度均有所增强(P0.05);Western blotting检测,4周、8周、12周各剂量组St AR蛋白表达水平增强(P0.05)。结论在本实验设定的剂量和时程内用该白酒灌胃后,大鼠睾丸间质细胞内St AR表达水平有所增强,血清睾酮水平并无明显变化。     

去细胞人羊膜基质的制备及免疫原性

目的制备去细胞人羊膜基质(AHAM)并分析其移植至小鼠体内后的免疫反应,评价去细胞人羊膜基质作为细胞移植支架的免疫原性。方法利用胰蛋白酶-EDTA消化人羊膜(HAM),去除人羊膜上皮细胞,制备新鲜去细胞人羊膜基质;新鲜去细胞人羊膜基质置于含硫酸软骨素及甘油的冷冻保护液中,-80℃保存;使用前经PBS复水处理后即冷冻去细胞人羊膜基质;免疫细胞化学分析去细胞人羊膜基质中人类白细胞抗原的表达情况;将冷冻的去细胞人羊膜基质移植至BALB/c小鼠肝脏内4周后,分析脾脏组织中CD4~+、CD8~+T淋巴细胞比例的变化。结果新鲜及冷冻保存后的去细胞人羊膜基质均不表达人类白细胞抗原;冷冻的去细胞人羊膜基质移植至小鼠体内后,脾脏组织中CD4~+、CD8~+T淋巴细胞无明显变化。结论去细胞人羊膜基质的免疫原性较低,移植后不会引起由T细胞介导的特异性排斥反应,可以作为免疫安全性的生物支架用于疾病的细胞移植治疗。     

敲减钙离子/钙调蛋白依赖性激酶Ⅳ抑制干扰素-γ诱导C2C12细胞免疫分子的表达

目的 探究敲减钙离子/钙调蛋白依赖性激酶Ⅳ（CaMKⅣ）基因对炎性培养条件下C2C12细胞免疫分子表达的影响。 方法 采用慢病毒基因干扰技术敲减C2C12细胞的CaMKⅣ基因,以2%马血清将C2C12细胞分化成肌管,以干扰素-γ（IFN-γ）刺激C2C12细胞,采用Real-time PCR和Western blotting检测CaMKⅣ的表达,采用Western blotting和免疫荧光检测免疫分子主要组织相容性复合体（MHC） class Ⅰ(H-2K^b)、MHC class Ⅱ(H2-Ea)、Toll样受体3（TLR3）的表达,采用Real-time检测肌细胞分泌型促炎性细胞因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α、巨噬细胞炎性蛋白（MIP）-1α和单核细胞趋化因子（MCP）-1的基因表达。 结果 IFN-γ可诱导成肌干细胞以及分化肌管表达或上调表达免疫分子MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、TLR3,同时上调C2C12细胞促炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、MIP-1α和MCP-1的基因表达量;敲减CaMKⅣ基因导致上述上调趋势被抑制。 结论 敲减CaMKⅣ基因可有效抑制IFN-γ诱导的免疫分子的表达,可能提示CaMKⅣ参与调节肌细胞的免疫学特性。     

冠状动脉的起源与意义

目的 观察中国人冠状动脉开口的变异情况,为临床冠状血管造影和介入术提供解剖学参考。 方法 选择 55例保存完好的心脏标本,探查每例标本的主动脉窦,观察各个窦中冠状动脉开口的数目和位置,测量从窦底分别到瓣尖、冠状动脉开口以及窦管交界的高度,并对所得结果进行记录和分析。 结果 主动脉窦中冠状动脉开口总数为2～5个不等,多数情况下右冠状动脉开口于主动脉右窦,回旋支和左冠状动脉合并开口于主动脉左窦,肺动脉窦或主动脉后窦中未发现开口。大多数开口位于窦管交界以下（94.5%）和瓣尖上缘以上（80%）,5例标本存在高位开口,即开口位置高于窦管交界。 结论 多数冠状动脉开口的位置在主动脉右窦和主动脉左窦内,瓣尖之上,窦管交界之下。一些变异比如多开口、纵向或环向的位置偏移及裂隙状开口会对解释图像带来困难,对临床进行血管造影、血管成形术、冠状动脉旁路移植术等操作造成不利影响。     

多巴胺受体在大鼠嗅球的表达及其在帕金森病大鼠嗅觉障碍中的作用

目的 观察多巴胺受体在大鼠嗅球（OB）的表达与分布,探讨左旋多巴（L-DOPA）治疗对帕金森病（PD）大鼠嗅觉的影响。 方法 采用免疫印迹、免疫荧光等方法观察多巴胺受体在大鼠OB中的表达;6-羟多巴胺（6-OHDA）双侧注射建立PD大鼠模型,检测L-DOPA治疗对PD大鼠嗅觉功能及谷氨酸脱羧酶（GAD）和脑源性神经营养因子（BNDF）表达的影响。 结果 嗅球内D1和D2两种多巴胺受体亚型表达含量高。D1和D2在颗粒细胞层（GCL）内GAD阳性的γ-氨基丁酸（GABA）能神经元上大量表达,被酪氨酸羟化酶（TH）阳性神经纤维终末包绕。PD大鼠OB内GCL层TH蛋白表达明显下降（0.05±0.01 vs 0.01±0.00,P<0.001）。L-DOPA治疗后,PD大鼠找寻食物小球时间显著降低［（624.4±113.4）s vs(312.4±79.35)s,P<0.05］,OB内BDNF表达显著升高（0.02±0.01 vs 0.07±0.01,P<0.01）。 结论 D1和D2在GCL层GABA能神经元大量表达。L-DOPA治疗可缓解PD大鼠嗅觉障碍,可能与激活OB内GABA能神经元上的D1和D2复合体,进而改善BDNF表达有关。     

甲状腺功能异常对肌肉和脂肪量的影响

目的 探讨甲状腺功能异常对体成分的影响。 方法 筛选出病程小于5年患有甲状腺功能异常疾病,经过医嘱规范用药且临床症状控制较好的甲状腺功能亢进（简称甲亢）患者185例（男72,女113）,甲状腺功能减退（简称（甲减）患者154例（男33,女121）及健康对照组344例（男92,女252）,应用生物电阻抗法分别测定其身体成分,分析四肢、躯干和全身的脂肪、骨骼肌含量的差异。 结果 在男性,甲亢组躯干肌肉量显著低于对照组（P＜0.01）,其他各组肌肉量差异均无统计学意义,3组间的脂肪量差异均无显著性;在女性,甲减组与甲亢组和对照组相比,除双下肢肌肉量外,其余各部位肌肉量均显著高于甲亢组和对照组（P<0.05）,而甲亢组与对照组相比各部位肌肉量差异均无显著性。甲减组与甲亢组和对照组相比,除双下肢脂肪量外,其余各部位脂肪量均显著高于健康对照组和甲亢组（P＜0.05）,而健康对照组与甲亢组相比各部位脂肪量差异均无显著性。 结论 甲亢可致男性患者体成分中的躯干肌肉量减少;甲减可致女性患者体成分中的肌肉量、脂肪量增加。     

广西少数民族成年女性骨密度的差异及年龄变化特点

目的 探讨广西毛南族、仫佬族、瑶族和苗族成年女性骨密度和骨质疏松症患病率（POP）的差异及年龄变化规律。 方法 随机抽取广西毛南族、仫佬族、瑶族、苗族成年女性860例,通过定量超声骨密度仪测定其右侧跟骨的骨密度。 结果 毛南族、仫佬族和苗族女性间的骨质指数(BQI)、T 值和POP差异无统计学意义,而瑶族女性与以上3个民族女性间的差异显著(P<0.05);随年龄增长,瑶族和毛南族的骨密度在35～45岁年龄段达到峰值后急剧下降,仫佬族和苗族在45岁之前,骨密度变化趋势平缓,在45岁后急剧下降;在45～55岁年龄段,瑶族女性的BQI和T值显著大于毛南族、仫佬族和苗族女性(P<0.05);在45～55岁年龄段,瑶族女性的POP显著低于毛南族、仫佬族和苗族女性,而其他3个民族女性间的POP差异无统计学意义。 结论 广西成年女性的骨密度和骨质疏松症患病率各民族间的差异存在显著的统计学意义,瑶族女性的骨质状况较好。