停经29周,发现肝占位性病变20余天

1病例摘要患者27岁,福建籍人,农民。G1P0。因停经29周,发现肝占位性病变20余天,于2005年11月17日入院。患者平素月经欠规律。LMP:2005年4月26日,停经40天,测尿HCG(+),孕早期无明显恶心、呕吐、乏力等不适。停经4+月开始感胎动持续至今。未行常规产前检查。停经26周左右自觉乏力、剑突下及右上腹疼痛不适,遂就诊当地医院,B超检查提示“肝内巨大占位性病变,脾大,胆囊结石”,予以保肝治疗(具体用药不详),但症状无缓解。患者要求继续妊娠及肝脏病变治疗,转来我院,拟“宫内妊娠29周,原发性肝癌?”收入院做进一步处理。自发病以来,精神、胃纳…     

人卵巢组织两种超低温冻存方法的研究

【目的】探索两种人卵巢组织冷冻方案用于生殖细胞保存的效果。【方法】活检卵巢组织来自15名经知情同意的手术患者。组织被随机分配到新鲜组、玻璃化冷冻组和慢速冷冻组。观察和比较各组卵巢组织冻融后的原始卵泡形态完整率,并通过体外培养系统测定培养液中的雌二醇和孕酮水平,观察和比较冻融后卵巢组织内分泌功能。【结果】本研究中新鲜组、慢速冻融组和玻璃化冻融组的原始卵泡形态完整率分别是97.6%、72.6%和80.3%。两冻融组与新鲜组相比明显下降(P<0.001),而在两冻融组间差异并无统计学意义(P=0.237)。在体外组织培养期间,两种冻融卵巢组织都能持续分泌雌二醇和孕酮,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】本研究中两种人类卵巢组织超低温冷存的方法是可行的,可适应不同需要。     

肠道子宫内膜异位症的诊治分析(附16例报告)

回顾性分析16例肠道子宫内膜异位症的临床资料。术前6例误诊为直肠肿瘤，误诊率为37.5％。7例未孕患中确诊为不孕4例（占57.14％）。均行手术治疗，其中6例行局部病灶切除，10例行直肠前切除术（Dixon术），术后无并发症发生。4例不孕患术后2例妊娠，妊娠率为50％。随访0.5-7年，全组病例肠道病变无复发。腹腔镜能有效提高肠道子宫内膜异位症的诊断率，行手术切除肠道病灶，术后结合激素治疗能避免肠道病变复发，并可提高妊娠率。     

人体外受精低质量胚胎单卵裂球发育潜能研究

目的探讨人低质量胚胎来源的单个卵裂球继续发育能力,并尝试建立人胚胎干细胞系。方法采用透明带溶解法将人低质量胚胎分离成单个卵裂球,再行体外培养,观察卵裂球的生长发育情况。结果 62个正常受精的人低质量胚胎经分离后共获取252个单卵裂球。卵裂球经体外培养继续卵裂率为47.6%,致密化率为28.6%,早期囊胚形成率为20.2%,晚期囊胚形成率为13.1%,滋养层细胞样生长物形成率为9.1%,无人胚胎干细胞系建立。结论人低质量胚胎的单个卵裂球通过体外培养可发育到囊胚阶段,而建立人胚胎干细胞系的方法需进一步改进。该研究提示需根据不同的培养条件来审视卵裂球全能性,为建立低质量胚胎单个卵裂球来源的人胚胎干细胞系提供了新的思路。     

正常月经周期IVF-ET患者助孕情况与睾酮水平的关系

目的：探讨正常月经周期女性在进行体外受精（IVF）周期中其卵巢基础内分泌及助孕周期情况与血清睾酮水平的关系。方法：按一定标准收集2011年3月—2011年7月在中山大学附属第一医院生殖中心行IVF-胚胎移植（ET）治疗的、具有正常月经周期的495例妇女资料。比较患者不同年龄、基础促性腺激素、基础黄体生成激素（LH）、基础卵泡刺激素（FSH）/LH比值、基础雌二醇（E2）分组间的睾酮浓度差别;比较不同血清睾酮水平患者的IVF周期情况。结果：不同年龄、基础FSH/LH比值分组间睾酮差别有统计学意义（均P＜0.05）;而基础促性腺激素、基础LH、基础E2不同分组间睾酮差别无统计学意义（均P＞0.05）。不同睾酮水平组间IVF周期取卵数以及可移植胚胎数差别有统计学意义（均P＜0.05）。结论：血清睾酮水平与年龄、FSH/LH比值以及超促排卵取卵数等卵巢储备评估指标有关联。血清睾酮水平对有正常月经周期的女性IVF周期助孕结局也有影响。     

人类卵巢组织条厚度对超低温冷冻效果影响的研究

目的 探索不同卵巢组织条厚度对超低温冷冻效果的影响,同时评估卵巢组织的凋亡情况.方法 卵巢组织取自10例手术的妇女.冷冻前行卵巢组织切片,按最小厚度随机分成1.0、0.5、0.25 mm 3组.采用二甲基亚砜（DMSO）为冷冻保护剂的程序慢速冷冻法进行超低温冷冻保存.冻融后进行卵泡计数及各组间正常卵泡形态学分析比较,使用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）进行组织细胞凋亡检测.上述结果与新鲜卵巢组织进行比较.结果新鲜卵巢组中97.6%原始卵泡保持形态学正常,切片厚度为1.0、0.5、0.25 mm三组形态正常率分别为71.1%、73.9%和72.7%,与新鲜组比较,三实验组下降明显,差别有统计学意义（χ2=15.66,P〈0.001）;而三冷冻组间相比差别无统计学意义（χ2=0.153,P=0.926）.TUNEL原位杂交显示窦前卵泡颗粒细胞中未见凋亡阳性信号,窦卵泡中可见散在阳性信号细胞,卵巢间质细胞亦有散在凋亡信号.结论 0.5～1.0 mm厚度卵巢组织为行超低温冷冻保存是较合理厚度,卵泡闭锁的机理值得进一步研究.     

建立植入前遗传学检测人胚胎来源的无动物源性干细胞系

【目的】在无动物源性的干细胞培养体系中建立植入前遗传学检测（PGT）胚胎来源的人胚胎干细胞系,为医学研究提供疾病模型。【方法】在我们的研究中,对无动物源性的人类包皮成纤维细胞饲养层（XF-HFF）与成分确定的培养基（CDM）构建的无动物源性培养体系进行了评估。在该培养体系中,利用染色体平衡易位患者PGT来源的废弃胚胎建立一个新的人胚干细胞（hESC）细胞系。【结果】新建立的人胚胎干细胞系在无动物源性培养系统中可长期培养传代（>45个代次）。核型分析显示,在传代45代次后,新建立的人胚胎干细胞仍保持一致的核型。XF-HFF/CDM中的hESC仍保持多能性。通过荧光免疫染色检测到SSEA-3、SSEA-4、SSEA-1、TRA-1-60、TRA-1-81等多能标志物的表达;RT-PCR分析显示,在XF-HFF/CDM培养体系上生长的hESC中存在干细胞标记。小鼠体内实验也证实了hESC在体内维持其多能性。【结论】本研究建立了PGT来源的人胚胎干细胞系,为进一步建立携带遗传疾病基因的hESC系并为临床研究和治疗提供疾病模型打下了基础。     

一种高效的β地中海贫血CD17（A>T）点突变293T细胞系的建立

目的 建立一种高效构建β-地中海贫血CD17（A>T）点突变基因型HEK293T细胞系的方法。 方法 利用改良的CRISPR/Cas9基因编辑技术,即无痕基因组编辑（consecutive re-Guide or re-Cas steps to erase CRISPR/Cas-blocked targets, CORRECT）,通过电转染CRISPR/Cas9质粒诱导HEK293T细胞HBB基因切割,同时以引入有CD17（A>T）点突变和同义突变碱基（G>T）的单链寡核苷酸（single-stranded oligo DNA nucleotides, ssODNs）作为同源模板进行重组,经单克隆筛选、测序验证获得β-珠蛋白基因（HBB）点突变CD17（A>T）基因型HEK293T细胞系。 结果 利用“CORRECT”技术成功获得一株β-地贫CD17（A>T）基因型点突变的HEK293T细胞系,同义突变的引入减少Cas9蛋白对靶点不准确的再编辑,提高单碱基突变效率。 结论 通过“CORRECT”技术可以高效获得点突变的293T细胞系,对单碱基突变疾病模型的细胞系及动物模型的建立具有重要意义。     

G蛋白偶联受体抑制剂与成人卵巢组织体外共培养通过抑制HIPPO-YAP信号通路促进始基卵泡募集

目的 本研究观察G蛋白偶联受体抑制剂溶血磷脂酸（LPA）及1-磷酸硝氨醇（S1P）与成人卵巢组织共培养后Hippo-YAP信号通路各元件及下游蛋白因子的表达及卵巢组织中卵泡发育相关标记的变化,探讨其通过Hippo-YAP信号通路调控始基卵泡募集的作用。方法 收集中山大学附属第一医院2017年3月-2017年11月妇科手术切除的正常成人卵巢组织,通过WB、ELISA等方法检测分别经GPCRs抑制剂共培养、机械卵巢组织碎片化及其与Akt通路激活剂共培养结合使用后组织中通路各元件及下游蛋白因子的表达及培养液中卵泡发育相关指标的浓度,观察不同处理方式对Hippo-YAP通路抑制效应及对卵巢内卵泡募集的效果。结果 (1)成人卵巢皮质组织使用5μmol/L LPA及5μmol/L S1P联合培养体系共培养8h左右可获得较明显的Hippo-YAP通路效应因子CCN2的表达促进效果（P<0.01）;(2)正常成人卵巢皮质组织中,AKT信号通路激活剂共培养48 h后与LPA及S1P共培养8 h可获得与目前体外卵泡激活标准的“机械碎片化HIPPO-YAP信号通路抑制法+AKT信号通路激活剂共培养48...     

高龄妇女卵母细胞发育和取卵技巧现况

我国高龄妇女群体对辅助生殖技术的需求极大。随着年龄增长,女性生殖功能衰退,对高龄妇女应用辅助生殖技术时亟需相应的调整。目前对高龄女性生殖功能的研究在生殖医学学术界仍为焦点话题之一,众多科研工作者的成果不断为我们揭示高龄女性生殖系统的变化机制及临床应对措施。本文通过对现有成果的摘要介绍,简述高龄妇女卵母细胞发育时的特点,且通过调整扳机(trigger)及取卵时机,临床医生有望在高龄妇女的辅助生殖周期中帮助患者获得更佳结局。