基质金属蛋白酶-2活性与成釉细胞瘤增殖生长关系的研究

目的 探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）活性与成釉细胞瘤增殖生长的关系及其在成釉细胞瘤侵袭中的作用。方法 通过MMP-2抑制剂Ro31-9790抑制MMP-2活性进行干预处理,采用成釉细胞瘤细胞原代培养、瘤组织块裸鼠肾包膜下移植、MTT、流式细胞术、瘤体积测量和组织学检查等方法,观察MMP-2活性与成釉细胞瘤增殖生长的关系。结果 实验各组之间在同一时间点的细胞增殖活性均无显著性差异（P＞0.05）。G0/G1、G2/M期细胞比率以及凋亡细胞比率不随Ro31-9790浓度增加而增加,S期细胞比率也不随Ro31-9790浓度增加而减少。Ro31-9790治疗组瘤体积明显小于对照组（P＜0.05）,瘤体积增加也明显少于对照组（P＜0.01）。结论 Ro31-9790对成釉细胞瘤细胞的体外增殖活性无影响,但可抑制体内移植瘤的生长,MMP-2活性与成釉细胞瘤细胞的增殖活性无关,但与成釉细胞瘤的生长密切相关,可能是成釉细胞瘤局部侵袭的机制之一。     

糖皮质激素吸入对哮喘患儿外周血CD4+CD25+ 调节性T细胞水平的影响

目的： 探讨糖皮质激素吸入对哮喘患儿外周血CD4+CD25+ 调节性T细胞（Tr）水平的影响。方法：采用糖皮质激素吸入治疗70例发作期哮喘患儿,应用流式细胞术检测患儿外周血的Tr细胞数。结果：糖皮质激素规则治疗后患儿外周血CD4+CD25+Tr水平（7.05%±1.61%）明显高于治疗前（5.62%±1.29%）,P<0.01。完全控制组患儿外周血CD4+CD25+Tr水平最高（7.56%±1.88%）,部分控制组患儿次之（7.09%±1.23%）,控制不佳组患儿最低（6.11%±1.96%）,差异均显著,P<0.05。经激素规则治疗的患儿外周血Tr水平（7.05%±1.61%）明显高于不规则治疗组患儿（5.91%±1.76%）,P<0.01。结论：规则使用糖皮质激素吸入疗法可明显提高哮喘患儿外周血Tr水平,Tr水平与哮喘的激素治疗效果有关。     

阻断CD40-CD40L共刺激途径对T细胞表型及细胞因子分泌的作用研究

目的探讨应用抗CD40L单克隆抗体阻断CD40-CD40L共刺激途径后对T细胞表型及其分泌的细胞因子的影响,为体外阻断该共刺激途径诱导T细胞对异体移植抗原的免疫耐受提供实验依据.方法供鼠(C57BL/6H-2b)脾T细胞作为反应细胞,受鼠(BALB/CH-2d)脾细胞作为刺激细胞,设单抗组(加抗CD40L单抗)和对照组(不加单抗),初次混合淋巴细胞培养(MLR)7天,在不同时间点采用3H-TdR掺入法检测细胞增殖率,以ELISA法测定培养上清液中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10等的水平,第5天采用流式细胞仪检测CD4+T和CD8+T细胞上CD25、CD69、CD40L和CD45RA的表达.再次MLR 5天,第1、3、5天采用3H-TdR掺入法测定细胞的增殖情况和ELISA法测定培养上清液中的上述细胞因子的水平.结果初次和再次MLR结果均显示,单抗组细胞增殖反应率明显低于对照组.初次MLR单抗组中CD4+T和CD8+T细胞比例明显低于对照组(P＜0.05);单抗组中CD4+CD25+T、CD4+CD69+T、CD8+CD25+T、 CD4+CD40L+T和CD8+CD69+T细胞比例明显低于对照组(P＜0.05),而CD8+CD40L+T和CD4+CD45RA+T细胞的比例与对照组相比无明显差异(P＞0.05).初次MLR中单抗组和对照组培养上清中IL-4和IL-10几乎无法测出,而单抗组培养上清中IFN-γ和IL-2的水平均明显低于对照组(P＜0.01);再次MLR后培养上清中单抗组IFN-γ、IL-2和IL-4和IL-10的分泌水平明显低于对照组(P＜0.05),但处于低水平,仍明显低于对照组.结论在体外MLR体系中,应用抗CD40L单抗孵育供鼠脾T细胞,可同时作用于CD4+T和CD8+T细胞,使CD40L+,CD25+和CD69+表达下降,引起T细胞早期的活化和成熟障碍,T细胞增殖能力减低,抑制了Th1类细胞因子IFN-γ和IL-2及Th2类细胞因子IL-4和IL-10的分泌水平,可诱导供者T细胞免疫耐受.     

淤胆血清“病理微环境”诱导胚胎干细胞向肝细胞分化

目的:探讨淤胆血清"病理微环境"培养体系诱导胚胎干细胞(ESC)向肝细胞分化的可行性。方法:将小鼠ESC细胞系E14在无白血病抑制因子培养基中培养,使其自发分化为拟胚体,加入FGF-4和HGF初步诱导,然后置于5％淤胆鼠血清"病理微环境"筛选培养液中继续培养2周,然后进行细胞形态学观察,白蛋白和CK8/18免疫组化染色,白蛋白与转甲状腺蛋白RT-PCR检测,细胞糖原染色及尿素合成功能分析。结果: 经初步诱导分化的ESC置于5％淤胆血清"病理微环境"筛选培养液中培养,初期细胞生长受抑制,2周后分化为肝细胞样细胞,细胞呈现良好的均质性;免疫组化染色显示白蛋白和CK8/18表达;RT-PCR显示有白蛋白、转甲状腺蛋白等的mRNA转录;细胞有糖原和尿素合成功能。结论:采用含淤胆血清的病理微环境培养体系从经FGF-4和HGF初步诱导的胚胎干细胞中有效筛选出了具有功能的肝细胞,细胞有较好的均质性,为临床肝细胞替代治疗、获取丰富供体细胞来源提供了新思路。     

热休克蛋白对树突状细胞成熟的影响研究

目的:探讨热休克蛋白(HSP)对树突状细胞(DCs)成熟的影响,同时对其形态学动态变化进行研究。方法:从肝癌组织中提取HSP(gp96 )抗原肽复合物;肝癌细胞进行热休克处理诱导其表面表达HSP,再用DiI荧光标记;将两种HSP与DCs混合培养,动态观察DCs捕获抗原和成熟过程中的形态学变化。流式细胞仪检测不同情况下热休克蛋白对DCs成熟表型的影响。结果:使用DiI标记的方法良好地显示了DCs摄取抗原的形态学变化;DCs通过直接接触、包绕、形成囊泡和伸出伪足且末端形成囊泡4种方式摄取抗原;热休克蛋白可促进DCs成熟表型的表达。结论:DiI是适合DCs形态学研究的良好的荧光标记物;DCs捕获抗原有4种不同方式;不同热休克蛋白均可促进DCs成熟,但提取的热休克蛋白作用更显著。     

人脐血、外周血及骨髓植入辅助细胞含量的流式细胞术检测及意义

目的：了解人脐血（CB）、外周血（PB）及骨髓（BM）植入辅助细胞（FCs）的分布规律。方法：不同来源的标本共分A、B、C、D4组，A组为CB，B组为正常成人骨髓（ABM），C组为正常学龄前儿童外周血（CPB），D组为正常成人外周血（APB）；通过流式细胞术检测各组标本中CD8^＋CD3^＋α，J3TCR^-γ，STCR^-植入FCs的比例，比较上述细胞分布的差异性。结果：A组FCs的比例为（0．78±0．45）％，显著低于B、C和D组（P〈0．01）；而B、C和D组FCs的比例分别为（2．85±1．03）％、（2．73±1.08）％和（3，47±1．26）％，3组间差异无显著性（P〉0．05）。结论：ABM、CPB和APB中的FCs比例显著高于CB。     

高血压患者认知功能及危险因素的分析

目的 探讨原发性高血压患者认知功能情况及其危险因素.方法 选择2002年3月至2006年3月在瑞金医院特需医疗中心就诊的轻中度原发性高血压患者(病程5年以上)368例,排除颈动脉粥样斑块形成患者、2型糖尿病患者、痴呆症患者及脑血管病患者,并选取健康人群300例作对照.对选择对象采用上海市精神卫生中心编制的<中国成人智力量表>及中国科学院心理研究所编制的<临床记忆量表>评定认知功能,对两组人群采用对照分析的方法.结果 (1)高血压组与正常对照组间智商无显著性差异(P＞0.05).(2)高血压组患者记忆商显著低于正常对照组,有显著性差异(P＜0.05).(3)高血压组患者的智商与服糖后2 h血糖呈负相关;记忆商与高血压病程、收缩压、舒张压,低密度脂蛋白呈负相关.结论 (1)高血压(病程5年以上)未合并脑血管疾病患者已存在明显的认知功能减退,主要表现在记忆、注意功能.(2)认知功能减退与血糖、高血压病程、血压和低密度脂蛋白等危险因素相关.     

流式细胞仪快速优化大鼠原代培养肝细胞基因转染

【目的】用流式细胞仪(FCM)快速检测外源性血管内皮生长因子基因(VEGF基因)在大鼠原代培养肝细胞转染表达，根据结果优化其转染表达条件。【方法】以加强型黄色荧光素蛋白(EYFP)为标记，用FCM快速检测重组质粒pIRES-EYFP／VEGF121在大鼠原代培养肝细胞中转染表达，根据结果优化pIRES-EYFP／VEGF121转染表达条件。【结果】pIRES-EYFP／VEGF121得以成功构建，并转染大鼠原代培养肝细胞；优化的转染表达条件：在细胞数密度O．1xl0^6／mL，质粒孵育时间30min，质粒与脂质体混合物孵育时间15min，质粒与脂质体比例为1：1O，转染时间2h，NAIR-1作转染培养液时，转染效率达17．5％。【结论】以EYFP为标记，FCM可简便快捷地检测并优化外源性VEGF基因在大鼠原代培养肝细胞转染表达，可为研究VEGF基因修饰大鼠原代培养肝细胞移植和肝基因治疗打基础。     

高效液相色谱法测定人子宫、输卵管及血清中氧氟沙星浓度

目的建立人组织及血清中氧氟沙星含量的HPLC测定方法。方法采用Hypersil C₁₈柱分离,流动相为乙腈-0.01 moL·L^-1磷酸盐缓冲液-0.5 moL·L^-1四丁基溴化铵(9∶91∶4, pH 2.5),流速1.0 mL·min^-1,在UV 294 nm处测定；样品经匀浆或用液氮冷冻研磨至粉末状，用1%曲拉通-100溶解，乙酸乙酯-异丙醇（9∶1）提取，HPLC测定。结果 氧氟沙星浓度在0.2～8.0 μg·mL^-1与峰高比呈线性关系,最小检测限40 ng·mL^-1,用本法对20例妇产科病人进行药物浓度测定,取得了满意的结果。结论此方法适用于人体组织中氧氟沙星浓度的测定，口服后氧氟沙星在人体组织中有良好的分布。     

人脐血及外周血CIK、NKT及NK细胞含量及意义

[目的]了解人脐血(CB)及不同来源外周血(PB)CIK细胞、NKT细胞和NK细胞的分布规律.[方法]通过流式细胞术检测不同来源标本中CD3 CD56 CIK细胞、Vα24 CD161 NKT细胞和CD3-CD56 NK细胞的比例,比较上述细胞分布的差异性.[结果]CB中CIK细胞、NK细胞的比例分别为1.37%±0.51%、7.07%±3.63%,均显著低于正常学龄前儿童外周血(C阳)及成人外周血(APB)(P＜0.01);而NKT细胞在CB、CPB和APB中比例均低,且三组间无显著性差异.[结论]CB中的抗肿瘤免疫效应细胞CIK细胞、NKT细胞及NK细胞含量均低,其中CIK细胞、NK细胞比例显著低于PB.