肝癌细胞冻融抗原制备树突状细胞瘤苗的研究

目的探讨获得高效肝癌树突状细胞瘤苗(Dendritic Cells,DCs瘤苗)的优化方法.方法取健康人新鲜血,Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞(PBMC),诱导DCs.A组用重组人粒巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)诱导DCs,B组用GM-CSF和IL-4诱导,肝癌细胞冻融抗原冲击,C组用GM-CSF、IL-4和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导,D组用GM-CSF、IL-4和TNF-α诱导,肝癌细胞冻融抗原冲击.结果荧光抗体CD11c和CD54均高表达,各组间无显著性差异(P＞0.05),TNF-α可明显上调CD86和CD80表达(P＜0.01),肝癌细胞冻融抗原可进一步激活不同条件下诱导的DCs,促进CD86、CD80和人类白细胞抗原-DR(HLA-DR)表达.结论经GM-CSF、IL-4加TNF-α诱导的DCs可有效的摄取肝癌细胞冻融抗原,促进DCs的成熟,可制备高效的肝癌DCs瘤苗,用于肝癌过继性免疫治疗.     

环磷酰胺对小鼠骨髓造血干/祖细胞作用及机制研究

目的探讨环磷酰胺(CY)对小鼠骨髓造血干/祖细胞损伤的作用特点与机制。方法分别以大(380mg/kg)、中(200mg/kg)、小(100mg/kg)三种剂量CY腹腔注射BALB/C小鼠,注射后一周内动态检测外周血白细胞(WBC)、骨髓及外周血CD34+细胞含量、骨髓有核细胞数(NC)与细胞凋亡及病理学改变。结果①在CY处理后3～4d内,骨髓病理损伤逐渐加重,外周血WBC和骨髓NC逐渐下降直至最低值,受抑程度与CY剂量呈显著正相关。②外周血CD34+细胞与骨髓CD34+细胞水平变化基本一致,均在CY注射后1～3d进行性降低,随后中、小剂量组先一过性迅速上升至高出正常水平,然后再下降,而大剂量组则一直处于缓慢回升。③CY处理后1～3d内骨髓细胞凋亡明显增加。结论CY短期内对小鼠造血干/祖细胞损伤存在剂量—时间效应关系,中、小剂量起“动员”作用,大剂量起“摧毁”作用,诱导细胞凋亡是造血损伤的机制之一。     

放射状视神经切开手术机制的初步研究

目的:观察猫眼行放射状视神经切开术 (radial opticneurotomy,RON) 后视盘结构的改变,探讨 RON 的临床机制。方法:健康成年猫共 18 只,为术后 1d 组、术后 15d 组、术后 30d 组和术后 90d 组。术后 1d 组为 6 只。单眼行放射状视神经切开术。分别于术后 1,15,30,90d 取材,组织切片特染检查。结果:RON 术后 1d 巩膜切口呈“一”型裂开,手术间隙与蛛网膜下腔相通,伴少量出血及炎细胞浸润;15～30d 切口呈“枣核”型,神经胶质细胞增殖,胶原纤维沿切口缘环形增生,增生胶原以 III型为主,筛孔呈长裂隙状;90d 瘢痕组织将筛板和巩膜切口完全填充,I 型和 III 型胶原排列不规则,边缘的筛孔形态恢复。结论:手术可将视盘周围的巩膜环及视神经眼内段软脑膜锐性切开,切口在巩膜环处呈逐渐扩宽趋势并与蛛网膜下腔相通,这可能是 RON 减轻临床症状机制之一。     

肝细胞生长因子诱导骨髓间质干细胞分化为心肌细胞

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)体外诱导骨髓间质干细胞(MSC)定向分化心肌细胞的一种新方法。方法: 分离SD大鼠骨髓MSC,培养至4-6代后,添加HGF(终浓度10 μg/L)持续培养30 d,倒置显微镜下动态观察分化细胞的自律性搏动和对0.1%异丙肾上腺素和无Ca²⁺孵育液的反应,并行心肌肌凝蛋白表达鉴定。结果: 分化第14-20 d骨髓间质干细胞增殖形成集落,10%-50%克隆中开始出现持续节律收缩的细胞群体,节律频率为70-90次/min,异丙肾上腺素加快其搏动速率,无Ca²⁺孵育液则抑制之。细胞心肌肌凝蛋白表达鉴定为心肌细胞。结论: HGF可诱导骨髓间质干细胞分化为心肌细胞,且有较高的诱导效率。