中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症研究进展

中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MCADD)是脂肪酸氧化缺陷病中最常见的一种，其发病率与苯丙酮尿症相当，临床表现主要为低酮性低血糖、呕吐和肌无力。串联质谱方法能检测出无症状的MCADD新生儿血浆中升高的酰基肉碱，兼有敏感度高、特异性高、自动化程度高、高通量等特点。约24％病人第一次发作即导致死亡，32％存活者有心理行为问题或神经功能障碍。若经新生儿疾病筛查得到诊断，现有的预防和治疗效果均较满意。MCADD符合新生儿筛查病种入选标准，部分发达国家已将此病列入新生儿疾病常规筛查项目。     

对脐血和产妇血清α_1-抗胰蛋白酶水平的观察

α_1-抗胰蛋白酶(简称α_1-AT)是血清中数量最多的蛋白酶抑制剂,具有抑制血清中90%以上胰蛋白酶的能力。遗传性α_1-AT缺乏症患者易产生蛋白酶活性升高的一系列疾病,如新生儿肝炎综合征、婴幼儿肝硬化、弥漫性肺气肿、关节炎、肾脏疾病和某些恶性     

四氢生物蝶呤负荷试验在高苯丙氨酸血症鉴别诊断中的价值

目的 对高苯丙氨酸血症患者进行口服四氢生物蝶呤（tetrahydrobiopterin，BH4）负荷试验，了解该方法在高苯丙氨酸血症中的鉴别诊断价值。方法 新生儿筛查阳性以及临床诊断的高苯丙氨酸血症患儿73例（男47例、女26例），中位数年龄1．93月，进行口服BH4负荷试验（20mg／kg）。对其中血苯丙氨酸（phenylalanine Phe）浓度〈600／μmol／L者给予口服Phe—BH4联合负荷试验，同时进行尿蝶呤谱分析，红细胞二氢生物蝶啶还原酶测定。结果 在BH4负荷试验或Phe－BH4联合负荷试验中，经典型苯丙酮尿症（phenylketonuria，PKU）的血Phe对BH4无反应；苯丙氨酸羟化酶缺乏引起的中度PKU的血Phe 24 h下降32．8％；BH4缺乏症患者服BH4后血Phe表现出特征性的快速下降，4 h降至正常水平，并且维持至24h。结合其他检测结果，22例诊断为经典型PKU，39例中度PKU，12例BH4缺乏症。结论 高苯丙氨酸血症是由苯丙氨酸羟化酶缺乏或者BH4缺乏所引起，早期鉴别诊断十分重要。BH4负荷试验是快速、简便的体内诊断试验，安全可靠，有较高的鉴别诊断价值。     

粘多糖贮积症Ⅰ型IDUA基因的一个新突变

目的研究粘多糖贮积症Ⅰ型（mucopolysaccharidosis type Ⅰ，MPS Ⅰ）患者发病的分子遗传学机理。方法采用聚合酶链产物直接测序的方法对患者的α-L-艾杜糖醛酸酶（alpha-L-iduronidase，IDUA）基因（仍删）外显子进行突变检测，并对发现的突变进行限制性酶切和等位基因特异性寡核苷酸杂交分析验证；同时，采集50名健康体检者血样，针对新发现的突变位点进行测序分析，以排除多态性位点的可能性。结果患者／DUA基因第2外显子和第6外显子分别出现杂合突变Q60X（178C〉T）和D203N（607G〉A），前者为已报道的无义突变，后者为新发现的错义突变。限制性酶切分析证实患者母亲是Q60X突变携带者，等位基因特异性寡核苷酸杂交分析证实患者父亲是D203N突变携带者。另外，在对50名正常人的测序分析中，未检测到D203N突变。结论筛查所得的两个点突变可能是患者的致病原因。     

127例PKU患者PAH基因第12外显子点突变及其频率研究

目的　了解中国人苯丙酮尿症 ( phenylketonuria,PKU)患者的苯丙氨酸羟化酶( phenylalanine hydroxylase,PAH)基因第 12外显子点突变种类和频率。方法　应用单链构象多态性( single strand conformation polymorphism,SSCP)、变性梯度凝胶电泳 ( denaturing gradient gelelectrophoresis,DGGE)、DNA测序分析了 12 7例 PKU患者的 PAH基因第 12外显子点突变种类及频率。结果　 DNA测序分析显示 10例患者存在 R4 13P、S4 11X、R4 0 8W、R4 0 8Q 4种杂合突变 ,其突变频率分别为 2 .76 %、0 .39%、0 .39%、0 .39% ,S4 11X突变为中国人中首次报道。 SSCP分析仅发现 2例 R4 13P杂合突变 ,DGGE分析显示 10例出现 3种类型的异常电泳带型。R4 13P突变在南北方人之间、在经典型 PKU和高苯丙氨酸血症之间的分布差异无显著性。结论　 DGGE对 PAH基因第 12外显子点突变检出率明显高于 SSCP。 DGGE结合 DNA测序是明确 PAH基因第 12外显子点突变种类和频率较好的方法。 R4 13P突变在南北方人中分布无明显差异     

串联质谱仪在新生儿遗传代谢病筛查中的应用

Theideaofimplementingtandemmassspectrometry(TMS)tonewbornscreeningwasfirstproposedbyMillington,etal.[1]in1990aftertheTMSmethodbecameavailabletodetectacylcar nitineandaminoacidsinphysiologicalfluids.ApplicationofelectrosprayionizationtechniquetointerphasewithTMSby Rashed,etal.[2]in1995hasmadethismethodtechnicallyfea sibleforpopulationnewbornscreening,asthisionizationtech niqueallowscontinuousandautomatedsampleinjectionandsig nificantlyincreasedsensitivity.UsingtraditionalBIAassaysandotherf…     

甲基丙二酸血症伴同型半胱氨酸血症患儿基因突变分析

目的 检测甲基丙二酸血症伴同型半胱氨酸血症患儿的MMACHC基因突变类型及突变频率.方法 依据串联质谱检测血中的酰基肉碱、气相色谱-质谱检测尿甲基丙二酸、血清同型半胱氨酸测定及维生素B12负荷试验等,对28例甲基丙二酸血症伴同型半胱氨酸血症患儿进行诊断;应用聚合酶链反应(PCR)对这些患儿及其部分直系亲属、健康对照组的MMACHC基因外显子进行扩增,通过DNA直接测序进行基因突变分析.结果 在28例患儿中27例检测到突变,共10种,其中2例仪检测到1个杂合突变,3例仅检测到多态性.突变集中在外显子3和4上(91.3%),以609G>A(W203X)最常见,突变频率为53.6%,其中10例为纯合突变,10例为杂合突变,其次为658_660delAAG(K220del),突变频率为8.9%,均为杂合突变.另外检测到6种未报道突变,分别为1A>G、365A>T、658_del660AAG、301-3_327del 30、567_568insT和625_626insT.3种基因多态性分别为-302T>G(rs3748643)、-234A>G(rs3728644)和321G>A(rs2275276).结论 揭示了中国甲基丙二酸血症伴同型半胱氨酸血症患儿的部分基因突变谱,其中609G>A(W203X)可能为热点突变.     

鸡胚圆锥动脉干缺损相关基因差异表达的研究

目的 通过检测剔除心脏神经嵴的异常鸡胚心脏组织与正常心脏组织之间在发育过程中存在差异表达的基因,探索心脏圆锥动脉干缺损（CTD）发生的相关基因。方法 用电极刺激方法在鸡胚发育早期破坏心脏神经嵴,建立圆锥动脉干缺损模型。应用抑制消减杂交法（SSH）筛选出在正常心脏组织表达,但在异常心脏组织中表达减少或不表达的原因,构建减数杂交文库,用cDNA芯片技术验证,并进行测序。结果 建立了含261个克隆的cDNA减数文库,经验证有83个克隆在实验组与对照组之间存在明显的表达差异（31．8％)。随机选15个克隆测序,最后确定7种基因。经Genebank查询发现有一cDNA片段与鸡（Gallus)DEAD-box解旋酶mRNA基因序列100％同源。结论 在剔除心脏神经嵴造成圆锥动脉干缺损畸形的过程中,有多个基因参与和调节。DEAD－box解旋酶基因的缺失可能是造成心脏CTD畸形的原因之一。     

p19细胞神经分化研究进展

神经细胞的分化、发育及成熟是现代生命科学研究的热点之一 ,目前认为 p19胚胎癌细胞系是一个研究神经发育机制的理想细胞模型 ,本文对 p19细胞、其所分化来的神经元以及参与该细胞神经分化的相关因素作一综述。     

高苯丙氨酸血症患儿尿中代谢物水平分析

目的通过检测高苯丙氨酸血症(HPA)患儿血苯丙氨酸(Phe)及尿苯丙酮酸、苯乙酸及苯乳酸水平,探讨其血Phe水平与尿代谢产物的关系。方法研究对象为55例HPA患儿,其中20例为轻度HPA(血Phe浓度<360 mmol/L)、35例为苯丙酮尿症(PKU,血Phe浓度360~1 200 mmol/L);血Phe水平检测采用串联质谱干血滤纸片法;尿苯丙酮酸、苯乙酸及苯乳酸水平检测采用尿素酶预处理气相色谱-质谱法。结果 HPA患儿血Phe水平与尿苯丙酮酸、苯乙酸及苯乳酸水平呈正相关(r=0.61~0.84,P均<0.01)。轻度HPA与PKU患儿尿苯丙酮酸、苯乙酸及苯乳酸水平差异有统计学意义(P均<0.01);70%轻度HPA患儿及5.71%PKU患儿的尿苯丙酮酸、苯乙酸及苯乳酸水平正常。结论 HPA患儿尿中苯丙酮酸、苯乙酸及苯乳酸水平的变化与血Phe浓度密切相关,单纯检测尿苯丙酮酸、苯乙酸及苯乳酸可能导致假阴性。