蓬乱蛋白2对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响

目的:探讨蓬乱蛋白2(Dvl2)对血管紧张素II诱导心肌细胞肥大的影响。方法:用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)处理心肌细胞48h,Western Blot检测Dvl2的表达。用重组腺病毒Ad-GFP和Ad-Dvl2分别感染大鼠原代心肌细胞24h后用Ang II处理48h,利用免疫荧光技术检测心肌细胞面积,免疫印迹实验检测心肌肥大标志物-MHC和相关信号通路。结果:AngⅡ处理引起Dvl2表达增加;与对照组相比,Ad-Dvl2感染显著增强了AngⅡ诱导的心肌细胞肥大和-MHC表达增加,而Dvl2过表达引起蛋白激酶B(AKT)磷酸化的增加。结论:Dvl2能促进AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其作用机制可能与激活AKT信号通路相关。     

过氧化氢对NIH/3T3细胞蛋白磷酸酶2A催化亚基C甲基化的影响

目的探讨过氧化氢(H2O2)对NIH/3T3细胞中蛋白磷酸酶2A催化亚基C(PP2Ac)甲基化的影响。方法 1 H2O20,0.1,1,5,10和25 mmol·L-1刺激NIH/3T3细胞1 h,刃天青还原率检测细胞活性;2 Western蛋白印迹法检测H2O20,0.1,1和5 mmol·L-1作用1 h后细胞内去甲基PP2Ac的表达;3分别用羧基端甲基酯酶(PME-1)抑制剂AMZ30 0,0.1,0.5,1.0,5.0和10.0μmol·L-1和抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)0,0.5,1和5 mmol·L-1预处理细胞30 min,再用H2O21 mmol·L-1作用细胞1 h,Western蛋白印迹法检测细胞内去甲基PP2Ac的表达;4免疫荧光实验观察NIH/3T3细胞H2O21 mmol·L-1处理1 h、AMZ30 10.0μmol·L-1或NAC 1 mmol·L-1分别预处理30 min后再加H2O21 mmol·L-1处理1 h细胞内去甲基PP2Ac的表达。结果 1刃天青检测实验结果显示,H2O2对细胞增殖具有显著的抑制作用,浓度≥0.1 mmol·L-1细胞活性显著降低(P<0.01);2 Western蛋白印迹检测结果显示,H2O2可致NIH/3T3细胞内去甲基PP2Ac蛋白表达升高,H2O20.1,1和5 mmol·L-1组与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);3 Western蛋白印迹结果显示,AMZ30与NAC二者均可拮抗H2O2对细胞内PP2Ac去甲基的作用,与H2O21 mmol·L-1组相比,加入AMZ30 5.0和10.0μmol·L-1或NAC 1和5 mmol·L-1细胞内去甲基PP2Ac含量明显降低(P<0.01);4免疫荧光实验结果显示,加入H2O21 mmol·L-1刺激1 h后,细胞内去甲基PP2Ac的表达要高于正常细胞组,而用AMZ30 10.0μmol·L-1与NAC 1 mmol·L-1干预后,去甲基PP2Ac表达降低。结论 H2O2可诱导NIH/3T3细胞内PP2Ac去甲基,而PME-1抑制剂AMZ30和抗氧化剂NAC均能拮抗H2O2诱导的PP2Ac去甲基作用。     

电子烟气溶胶提取物细胞增殖毒性研究

目的探讨电子烟气溶胶提取物的体外急性毒性,为电子烟的评价提供依据。方法电子烟经吸烟机器人抽吸,产生的烟气气溶胶经A(含分子筛滤嘴)、B(不含分子筛滤嘴)不同传输装置后经剑桥滤片捕获,将MEM、DMSO提取剑桥滤片吸附的烟气气溶胶后所得的水、脂溶性气溶胶提取液及烟油原液分别与中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)、人支气管上皮样细胞(HBE)、人胚肺成纤维细胞(MRC-5)三株细胞共孵育24 h,以CCK-8检测细胞活性。结果烟油原液对各细胞增殖抑制呈浓度依赖性升高趋势,烟油浓度在21.620～108.1 mg/ml时对MRC-5和CHO-K1产生细胞增殖毒性,差异有统计学意义(P0.05),烟油浓度在10.810～108.1 mg/ml时对HBE产生细胞增殖毒性,差异有统计学意义(P0.05);各细胞的半数抑制浓度(IC_(50))依次为39.35 mg/ml(MRC-5)42.69 mg/ml(CHO-K1)55.91 mg/ml(HBE)。B传输装置水溶性提取剂1.31 mg/ml(用烟油浓度标定)时具有抑制作用,差异有统计学意义(P0.05);在检测浓度范围内,各细胞的IC_(50)依次为1.24 mg/ml(CHO-K1)1.91 mg/ml(MRC-5)2.08 mg/ml(HBE);IC_(50)比烟油原液低一个数量级,差异有统计学意义(P0.05)。A传输装置的水、脂提取物及B传输装置的脂提取物对细胞增殖无抑制作用。结论烟油原液可抑制细胞增殖,加热后产物(即电子烟气溶胶提取物)的细胞增殖抑制能力与传输装置的构造有关,含滤嘴的A装置产生的电子烟气溶胶未见细胞增殖毒性,普通滤嘴B装置的水溶性提取物表现出细胞增殖毒性,且比烟油原液高。3种细胞中,CHO-K1对电子烟气溶胶的毒性最敏感,MRC-5对烟油的毒性最敏感。     

叶酸对阿霉素诱导心脏毒性的拮抗作用研究

目的:探究叶酸对阿霉素(DOX)诱导心脏毒性的拮抗作用。方法:利用DOX(40μmol/L)与叶酸(75μmol/L)处理6hpf斑马鱼胚胎,72hpf时观察胚胎心包水肿情况,计录胚胎15s内心率,荧光显微镜下观察心脏结构,固兰染色观察心脏血细胞分布和量。利用DOX(5μmol/L)与叶酸(75μmol/L)共处理心肌细胞,免疫印迹试验检测切割后的半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)的水平。结果:DOX处理后胚胎表现出心包水肿、心率降低、心脏结构异常。叶酸与DOX共处理后胚胎心包水肿率降低至17%,低于DOX单处理组(P=0.0097)(n=25);心率恢复至37±1.6次/15s,高于DOX单处理组(P0.001)(n=10);叶酸抑制DOX引起的心脏结构异常,并且使固兰染色异常率降低至22.4%,低于DOX单处理组(P=0.0098)(n=35)。叶酸抑制DOX诱导的心肌细胞切割后的Caspase3水平升高。结论:叶酸对DOX诱导的心脏毒性具有一定的拮抗作用,其作用机制可能与抑制心肌细胞凋亡相关。     

锰对皮层神经元胞浆游离钙离子浓度的影响

目的探讨皮层神经元胞浆游离钙离子浓度在锰(Mn)神经毒性作用中的变化。方法分离新生Wistar乳大鼠的皮层神经细胞进行体外培养,细胞生长至最佳状态时,予以分组处理。实验分染锰组和未处理组,染锰组分别与含低、中、高浓度氯化锰(MnCl_2·4H_2O)的培养液共培养,氯化锰的浓度分别为0．2、0．6、1．0mmol/L。未处理组则为正常培养的皮层神经细胞。各组处理24h后终止培养,钙离子荧光探针Fluo-3/AM标记后上激光扫描共聚焦显微镜检测荧光强度,以表示游离钙离子浓度,并用图像分析技术进行处理。结果氯化锰处理后引起皮层神经元胞浆游离钙离子不同程度的超载,中、高浓度锰组神经元的胞浆游离钙离子浓度明显高于低浓度锰组及未处理组,细胞钙离子荧光像素荧光强度增高且呈剂量依赖性,中、高浓度锰组分别为(131．1±16．7)、(183．2±22．9)；低浓度锰组为(84．6±10．2),差异有统计学意义(P＜0．05)。结论钙离子超载与锰的神经毒性有关,且钙离子超载与锰浓度呈剂量-反应关系。     

锰及其神经毒性的研究进展

锰(manganese,Mn),一种银灰色的黑色金属,相对分子质量为54.91,化学性质活泼,是机体必需的微量元素,在体内发挥着重要作用.但长期接触高浓度锰烟尘会产生慢性锰中毒(manganism),其临床表现与病理及神经生化都酷似神经退行性疾病--帕金森病(Parkinson's disease,PD),表现为中枢神经系统锥体外系受损和震颤麻痹症状,病变部位位于基底神经节的纹状体(豆状核、尾状核)、苍白球、丘脑和脑干神经节.     

牛磺酸影响人外周血T淋巴细胞增殖及分化功能的体外研究

目的：研究牛磺酸（Tau）对人外周血T淋巴细胞体外活化增殖及分化的影响及其作用机制。方法：无菌分离健康志愿者外周血淋巴细胞,建立植物凝集素（PHA）刺激T细胞体外活化增殖模型。实验设置对照组（control组）、PHA刺激组（PHA5μg/mL组）及Tau处理组（PHA+Tau 80 mmol/L组、PHA+Tau 160 mmol/L组）。细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测T淋巴细胞增殖率;瑞—吉染色法观察细胞形态及计算转化率;实时荧光定量PCR检测T细胞增殖标志物Ki67,Th1转录因子T-bet及细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),Th2转录因子GATA-3及白介素-4/6(IL-4/6),凋亡相关因子Fas、FasL基因表达水平;活性氧（ROS）试剂盒检测细胞内ROS水平。结果：与control组相比,PHA 5μg/mL组T淋巴细胞转化率、增殖率、增殖标志物Ki67、Th1相关因子T-bet、IFN-γ、TNF-α、凋亡相关因子Fas基因表达及胞内ROS水平升高（P<0.05）,凋亡相关因子FasL基因,Th2相关因子GATA-3、IL-6...     

牛磺酸对染锰大鼠海马神经毒性的影响

目的探讨牛磺酸对锰致大鼠海马神经毒性的影响。方法无特定病原体级SD雄性大鼠36只随机平均分成3个组:对照组、染锰组、牛磺酸预防性干预组(牛磺酸组)。对照组腹腔注射0.9%的生理氯化钠溶液;染锰组每天腹腔注射氯化锰溶液15 mg/kg,连续12周;牛磺酸组染锰的同时给予牛磺酸干预,染锰剂量和方法与染锰组一致,牛磺酸剂量为200 mg/kg,每周3次,连续12周。最后一次注射后24 h处死大鼠,切取海马,透射电镜观察各组神经元超微结构并检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果①从第4周开始到实验结束,染锰组、牛磺酸组同期体重均比对照组低,差异具有统计学意义(P<0.05);染锰组与牛磺酸组相比,从实验第10周后染锰组体重显著低于牛磺酸组(P<0.05),各组动物同期平均进食量无明显差异;②透射电镜观察,对照组海马神经元形态规则,染锰组海马神经元发生凋亡的形态学变化,线粒体等细胞器严重受损。牛磺酸组接近正常海马神经元的形态,胞质内各细胞器形态、结构基本正常;③染锰组MDA含量比对照组明显增加(P<0.05),SOD活力显著下降(P<0.05)。牛磺酸组MDA含量与对照组比差异无显著性,且比染锰组显著下降(P<0.05);SOD活力比对照组低(P<0.05),与染锰组相比有所恢复,但差异无统计学意义。结论牛磺酸可以抵抗锰致海马神经元的凋亡,降低MDA产量,并使SOD活力有所恢复。     

葡萄籽原花青素对2型糖尿病大鼠血清中SOD GSH MDA及NO表达的影响

目的观察葡萄籽原花青素(GSPE)对2型糖尿病大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)表达的影响。方法选取SPF级雄性SD大鼠30只,出生180d,体质量180～220g,高脂饲料喂养4周后再小剂量腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病模型,随机分为糖尿病对照组,GSPE250mg·kg-1·d-1、50mg·kg-1·d-1剂量干预组;另设6只为普食对照组。检测各组喂养第6周、10周后的血糖水平,并检测第10周后大鼠血清中SOD、MDA、GSH及NO的变化。结果GSPE能降低血糖,但效果不明显。在抗氧化指标的检测中,与糖尿病对照组相比,GSPE250mg·kg-1·d-1剂量干预组SOD、GSH明显升高(P<0.05),MDA、NO明显降低(P<0.05);50mg·kg-1·d-1剂量干预组SOD、GSH有所升高,MDA、NO有所降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论较高剂量的GSPE能有效改善2型糖尿病大鼠的抗氧化能力,对其作用机制的进一步研究,可为GSPE对糖尿病及其并发症的营养干预治疗提供新的思路和依据。