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10个DMD/BMD家系的基因诊断及其中3个家系的产前基因诊断分析 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:对杜氏/贝氏肌营养不良症(DMD/BMD)家系进行基因诊断和产前基因诊断。方法:抽提DMD家系成员外周血及胎儿羊水或脐静脉血全基因组DNA,采用PCR技术和聚丙稀酰胺凝胶银染法对DMD/BMD基因3端及基因内的45、50内含子的(CA)n短串联重复序列(STR)多态性进行连锁分析。 结果:结果显示,7个家系可提供遗传连锁诊断信息,完成了其中3个家系的产前基因诊断并出生了一例健康的男性婴儿;3个家系不能提供遗传连锁诊断信息。可诊断率达70%。 结论:STR多态连锁分析适用于常见缺失突变检测未发现缺失的DMD/BMD患者,是一种快速、有效、准确、易于普及的基因诊断方法,能有效地提高DMD/BMD家系基因诊断和产前基因诊断的可诊断率。 相似文献
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【目的】探讨单细胞水平诊断β地中海贫血(β-thalassemia)的可靠性,为开展β地中海贫血的胚胎植入前遗传学诊断(preimplantationgeneticdiagnosis,PGD)打下基础。【方法】采用二重巢式PCR并结合扩增特异的突变系统检测技术(amplificationrefractorymutationsystem,ARMS)扩增含有CD41-42突变位点的β地中海贫血患者的单淋巴细胞及正常人单淋巴细胞和单卵裂球的β-珠蛋白基因的5个常见突变位点(CD41-42、IVS-Ⅱ-654、CD17、CD71-72和nt.-28位点),扩增产物经过2%的琼脂糖凝胶电泳检测。【结果】患者的88个单淋巴细胞的扩增成功率为95.5%,等位基因脱扣的发生率为4.8%,诊断准确率为95.2%;正常人的41个单淋巴细胞的扩增成功率均为95.1%,假阳性率为0;正常人的34个单卵裂球细胞的PCR扩增成功率为88.2%;35管细胞洗脱液空白对照组假阳性扩增率为0。【结论】单细胞二重巢式PCR并结合ARMS技术诊断β地中海贫血是稳定的、可靠的,适用于β地中海贫血的PGD。 相似文献
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目的: 对影响单细胞二重巢式PCR扩增的因素进行初步探讨.方法:针对β-珠蛋白基因CD41-42、IVS-Ⅱ654突变位点区域采用二重巢式PCR,分别以不同的引物浓度组合、不同的Taq DNA聚合酶、不同的中和缓冲液、PCR反应前采用或不采用98 ℃预变性扩增单个淋巴细胞和/或单卵裂球,了解这些因素对PCR扩增效率的影响.结果: 不同的引物浓度组中,终浓度为0.25 μmol/L R1 F1引物对与 0.3 μmol/L R2 F2引物对配对扩增效率最高;不同的Taq DNA聚合酶中TaKaRa EX Taq的扩增效率最高;中和缓冲液-1(200 mmol/L Tricine)的扩增效率显著高于中和缓冲液-2(900 mmol/L Tris·HCl, pH 8.3/300 mmol/L KCl/200 mmol/L HCl)的扩增效率(P<0.05);单细胞PCR反应前采用98 ℃预变性与不采用98 ℃预变性的扩增效率间差异无统计学意义.结论:不同引物浓度组合、不同的Taq DNA聚合酶、不同的中和缓冲液对单细胞的二重巢式PCR的扩增效率存在明显差异,而PCR反应前采用98 ℃预变性不能提高PCR扩增效率. 相似文献
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单基因遗传病的植入前遗传学诊断研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
近十多年来,单基因遗传病的植入前遗传学诊断(PGD)已取得了显著的成绩,其基本技术包括胚胎活检,PCR和FISH。本文就PGD的研究概况,活检标本来源,以PCR技术为基础的各类诊断技术的研究进展,影响PGE准确性的原因及未来的发展作一综述。 相似文献
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单基因遗传病的植入前遗传学诊断研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
近十多年来 ,单基因遗传病的植入前遗传学诊断 (PGD)已取得了显著的成绩 ,其基本技术包括胚胎活检、PCR和FISH。本文就 PGD的研究概况、活检标本来源、以 PCR技术为基础的各类诊断技术的研究进展、影响 PGD准确性的原因及未来的发展作一综述 相似文献
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粘多糖贮积症Ⅱ型患者艾杜糖-2-硫酸酯酶基因常见突变的检测 总被引:4,自引:1,他引:4
目的 探讨并建立粘多糖贮积症Ⅱ型(mucopolysaccharidosis Ⅱ,MPSⅡ)患者艾杜糖-2-硫酸酯酶(iduronate-2-sulphatase,IDS)基因常见突变的检测方法。方法 应用聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)对IDS基因突变热点外显子3、8和9进行点突变检测;应用DNA测序对PCR-SSCP检出的突变进行序列分析;应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)对DNA测序的结果进行检测。结果 以PCR-SSCP发现该患者的IDS基因外显子9有明显异常泳动的条带;DNA测序发现患儿的外显子9发生点突变(C1672T),从而导致患者艾杜糖-2-硫酸酯酶蛋白发生氨基酸替换(R468W);PCR-RFLP电泳检测结果显示粘多糖贮积症Ⅱ型患者仅出现554bp 1条带,而患儿父母出现257bp和297bp 2条带,进一步验证了序列分析的结果。结论 PCR-SSCP分析、DNA序列分析和PCR-RFLP分析是诊断MPSⅡ的有效方法,三者联合使用可以相互验证、互为补充,提高基因诊断的准确率和成功率。 相似文献
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目的 探讨单细胞水平诊断软骨发育不全(achondroplasia,ACH)的可靠性,为开展ACH的胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)打下基础。方法 采用巢式PCR扩增单淋巴细胞及单卵裂球的成纤维细胞生长因子受体3基因的高发突变位点G380R区域,用限制酶Bfm I消化PCR产物,10%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。结果 单淋巴细胞的PCR扩增成功率为90.4%,等位基因脱扣发生率为8.2%,诊断准确率为91.8%;单卵裂球的扩增成功率为75.4%。结论 单细胞巢式PCR诊断ACH是比较稳定、可靠的。 相似文献