苦参碱在调节Bax和Bcl-2蛋白表达诱导Hep G2细胞凋亡中的作用

目的：探讨Bax和Bcl-2蛋白在苦参碱诱导Hep G2细胞凋亡中的作用。方法：采用MTT法和细胞凋亡ELISA试剂盒检测细胞活力和凋亡；用蛋白印迹试验（Western blotting）检测细胞内Bax，Bcl-2，Caspase-9和Caspase-3蛋白的表达情况。结果：苦参碱诱导Hep G2细胞凋亡，呈时间和剂量依赖性。苦参碱随时间进行性降低Bcl-2蛋白的表达，相应地稳步提高Bax蛋白的表达。而且苦参碱还促进Bax从胞浆内向线粒体移位，紧接着降解Caspase-3，-9蛋白。结论：苦参碱通过调节细胞内Bax和Bcl-2蛋白的表达经线粒体信号转导途径诱导HepG2细胞的凋亡。     

苦参碱对人肝癌Hep G2细胞内GSH水平调节和细胞杀伤作用

[目的]探讨苦参碱对人肝癌Hep G2细胞内GSH水平的调节以及诱导细胞死亡的机制。[方法]采用MTT法和ELISA试剂盒检测不同浓度不同作用时间苦参碱处理的Hep G2细胞活力；用谷胱甘肽还原酶检测谷胱甘肽（GSH）水平；用蛋白印迹试验（Western-blotting）检测细胞内细胞色素c和caspase-9的表达。[结果]用不同浓度（0．1、0．2、0.3、0．4和0．5mg／ml）苦参碱处理细胞24h和48h后Hep G2细胞存活率分别为95．24％±7．91％、85.32％±8．02％、64．79％±4．74％、53．91％±4.34％、49．00％±5．62％和68．59％±8．27％、56．55％±7．19％、34．79％±4．94％、23.31％±4．30％、18．27％±2．53％．提不苦参碱对人肝癌细胞具有明显的抑制作用，并呈时间和剂量依赖性。用0．1、0-3和0．5mg／ml苦参碱处理Hep G2细胞24h后其细胞凋亡率分别为27．77％、50.31％和71．26％，提示呈剂量依赖性。Western-blotting分析提示苦参碱能促进细胞色素c向胞浆内释放．进而使caspase-9水解。[结论]苦参碱通过线粒体信号转导途径诱导Hep G2细胞凋亡，并且通过消耗细胞内GSH产生氧自由基直接参与凋亡过程。     

LTQ和SELDI-TOF质谱对弱阳离子磁珠捕获的血清多肽和蛋白的鉴定

[目的]鉴定弱阳离子磁珠捕获的血清多肽和蛋白峰。[方法]收集经弱阳离子磁珠从人血清中捕获后洗脱下来的蛋白,然后经过HPLC分离,各组分的一部分跑SDS-PAGE胶并用LTQ质谱鉴定,另一部分采用SELDI-TOF检测,最后结合参考文献信息初步确定部分峰的鉴定结果。[结果]通过SELDI-TOF检测结果发现5个组分有比较明显的峰,基于LTQ质谱鉴定了这5个组分分子量在30kD以下的蛋白,数据库搜索结果显示评分在100分以上共鉴定出66个单一蛋白。并初步确定了13个SELDI-TOF上峰的蛋白结果。[结论]HPLC分离富集结合SELDI-TOF和LTQ质谱能比较有效地鉴定丰度比较高的差异峰,是各种差异峰鉴定策略的有益补充。     

术前消化道恶性肿瘤患者外周血Th1/Th2细胞外因子漂移分析

目的探讨术前消化道肿瘤患者血清中Th1/Th2细胞因子的漂移情况。方法收集食管癌患者163例,胃癌患者24例,肠癌患者80例,另选取70例健康体检者（对照组）进行试验。流式细胞小球微阵列术（CBA）检测两组血清中Th1类细胞因子[干扰素γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-2（IL-2）]与Th2类细胞因子[（白介素-10（IL-10）、白介素-5（IL-5）、白介素-4（IL-4）]的水平。结果食管癌组的IL-5水平与对照组差异有统计学意义（P〈0.05）;胃癌组的IFN-γ水平与对照组差异有统计学意义（P〈0.05）,IL-4水平与对照组差异有统计学意义（P〈0.05）;肠癌组的IL-5水平与对照组差异有统计学意义（P〈0.05）,IL-4水平与对照组差异有统计学意义（P〈0.05）。食管癌和肠癌患者为Th2上漂,胃癌患者为Th1、Th2双上漂。结论分析细胞因子漂移变化特点,以了解患者Th1/Th2类细胞因子的免疫调节功能状况,能为术前消化道肿瘤患者的免疫治疗提供依据。     

mir-183在食管鳞癌中的表达水平及其与临床病理、预后的关系

目的:探讨原发性食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中mir-183的表达状况及其与食管鳞癌临床病理特征之间的关系.方法:应用实时RT-PCR方法及2-△△CT分析法分别检测ESCC患者癌组织及癌旁正常组织中mir-183的表达状况及其与临床病理特征的相关性.结果:在53例标本中,有22例(41.51%)mir-183高表达(2-6411倍),mir-183的高表达分别与患者的淋巴结转移情况及不良预后有显著统计学意义(P<0.05).结论:mir-183的高表达在ESCC的发生发展中发挥重要作用.     

WCX纳米磁珠在宫颈鳞癌血清蛋白质组中的应用及其临床意义

目的　研究宫颈鳞癌患者血清蛋白，筛选差异蛋白并建立诊断模型，并探讨其临床意义。 方法　用WCX纳米磁珠联合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱检测77例宫颈鳞癌，13例宫颈上皮内瘤变Ⅲ级患者和52名健康人的血清。用Biomarker Wizard 软件分析并找出差异蛋白，再用Biomarker Patterns软件建立诊断模型。同时与SCC-Ag作比较。 结果 建立了由3974、3398和13732等差异蛋白峰组成的宫颈癌诊断模型，其敏感性为100%（32/32），特异性为93.8%（30/32）。扩大样本验证，其敏感性为77.8%（35/45），特异性为75%（15/20）。另外13例CINⅢ级患者有11例被检出，34例SCC-Ag阴性的患者中有30例被检出。结论 由3974、3398和13732三个差异蛋白组成的诊断模型有助于区分宫颈鳞癌，CINⅢ级患者与健康人。同时也能检出SCC-Ag阴性的宫颈鳞癌患者。     

3144m／z蛋白峰在胃癌患者血清中的表达及其临床意义

目的探讨3144m／z蛋白峰在胃癌患者血清中的表达及其与胃癌临床病理特征和预后的关系。方法收集2006年2月至2008年10月间浙江省肿瘤医院收治的、具有完整随访资料的327例胃癌患者的临床资料。将所有患者术前血清标本利用表面加强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI．TOF．MS）技术检测3144m／z蛋白峰的表达。结果3144m／z蛋白峰阳性率为33．9％（111／327）,明显高于CEA阳性率（21．1％,69／327）,差异有统计学意义（P〈0．01）;两者联合检测的阳性率为45．6％（149／327）。3144m／z蛋白峰表达与肿瘤临床分期（P〈0．01）、神经浸润（P〈0．01）、肿瘤大小（P〈0．01）、脉管瘤栓（P〈0．05）、淋巴结转移（P〈0．05）、CEA表达（P〈0．05）及浸润深度（P〈0．05）有关。3144m／z蛋白峰阳性与阴性表达患者术后3年生存率分别为44．7％和64．4％．差异有统计学意义（P〈0．01）;但经Cox比例风险模型进行多因素预后分析,3144m／z蛋白峰表达并未被证实为胃癌患者的独立预后因素（P=0．057）。结论3144m／z蛋白峰有可能成为胃癌患者的诊断及预后标记物。     

院所融合发展模式下浙江省肿瘤医院科研管理的实践与探索

在推进公立医院高质量发展背景下，浙江省肿瘤医院的科研管理工作逐步形成了院所深度融合发展模式下，以科研项目驱动、科研平台引领、国际合作助力、生物样本支撑的全方位、一体化的管理模式，为浙江省肿瘤医院向研究型肿瘤中心的转型升级提供科研创新助力。     

血清多肽谱预测乳腺癌新辅助化疗疗效的应用

目的 用纳米磁珠结合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术检测乳腺癌新辅助化疗患者治疗前血清蛋白指纹图谱,筛选有疗效预测价值的相关蛋白,并建立疗效预测模型,探讨其在预测新辅助化疗疗效中的应用价值.方法 用MALDI-TOF-MS技术检测50例临床分期Ⅱ～Ⅲ期的浸润性导管癌患者治疗前血清标本,获得血清蛋白指纹图谱,患者行新辅助化疗2～4个周期后,根据RECIST标准评价疗效,分为新辅助化疗有效组(CR+PR,31例)和无效组(SD+PD,19例).用Biomarker Wizard软件分析比较两组间的血清蛋白图谱,找出差异蛋白,分别采用k最近邻分类器(KNN)和支持向量机(SVM)两种分类器对筛选出来的蛋白位点进行分类.建立疗效预测模型,并进行盲法验证.结果 在相对分子质量1000～15000范围内,共检测到145个蛋白峰,化疗有效组与无效组比较,有3个蛋白质峰差异有统计学意义(P＜0.01),m/z分别为2651、3452、2176.使用KNN分类器,由9个蛋白质峰(m/z为:2651、3452、2176、1585、1682、1908、10700、3014、8426)构建的预测模型,在预测疗效的准确率上达到84%,敏感性为100%,特异性为56%.结论 应用MALDI-TOF-MS技术可以筛选出乳腺癌化疗敏感相关的血清蛋白指纹图谱.

Abstract：

Objective To analyze the serum proteomic patterns in the breast cancer patients using matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS) before neoadjuvant chemotherapy, build predictive model and evaluate its clinic significance. Methods Fifty patients with clinical stage Ⅱ -Ⅲ of invasive ductal carcinoma were included in this study. Serum samples were prospectively collected before 2-4 cycles of neoadjuvant chemotherapy, and were analyzed using MAL-DI-TOF-MS. According to the response evaluation criteria in solid tumors ( RECIST), patients were divided into 2 groups: drug susceptible group (31 cases, CR + PR) and drug resistant group ( 19 cases, SD +PD). Biomarker Wizard software was used to detect protein peaks significantly different between these two groups. The rule was built using two different supervised classification algorithms: K-Nearest Neighbor Clustering (KNN) and Support Vector Machines (SVM). The method with the highest accuracy was selected as the optimal predicting algorithm. Results 145 major protein peaks were detected at the molecular range of 1000 to 15 000, and 3 major protein peaks were detected significantly different between drug susceptible group and drug resistant group ( P ＜ 0. 01 ), with Mass/Charge (m/z) values being 2651,3452, 2176 respectively. In the validation set, the supervised classification with the KNN model correctly classified most tumor responses with an accuracy rate of 84%, and sensitivity of 100%, specificity of 56%. The predictive model consisted of 9 protein peaks at Mass/Charge(m/z) 2651,3452, 2176, 1585,1682, 1908, 10 700, 3014, 8426 respectively. Conclusion MALDI-TOF-MS technique could screen related proteomic fingerprints in estimating the therapeutic effect of neoadjuvant chemotherapy.     

血清蛋白质谱检测在子宫颈癌手术前后的临床应用价值初步分析

Objective To investigate the value of serum proteomic profiling in cervical cancer detected pre-surgery and post-surgery. Methods Magnetic bead and matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry (MALDI-TOF-MS) were used to detect the serum samples from 54 cases with cervical cancer before and after surgery and 53 serum samples from healthy women. The results of spectra were analyzed by Biomarker Wizard software. Results Significant variation of proteomic profiling between pre-surgery and post-surgery were analyzed. There were 22 proteins with different mass/charge (M/Z) values significantly different (P<0.01) at the M/Z value range from 1500 to 50 000, among of which relative content of proteins with M/Z 3981, 4290, and 28 066 in pre-surgery cervical cancer patients were higher than those in health women [(1.51±1.78)% vs (0.83±0.38)%, (2.70±2.19)% vs (1.72±0.91)%, (1.99±1.70)% vs (0.92±0.95)%; P<0.01], while in the post-surgery patients, relative content of these three proteins significantly decreased to (0.59±0.45)%, (1.01±0.64)%, (0.54±0.37)%, respectively. But the relative content of another three proteins with M/Z 11 487, 11 529, and 11 678 were significantly increased in post-surgery patients [(0.38±1.41)% vs (2.74±3.67)%, (0.16±0.46)% vs (2.00±1.76)%, (1.02±1.67)% vs (7.71±9.46)%; P<0.01]. Conclusion Serum proteomic profiling could screen out the proteins which had significant variation between pre-surgery and post-surgery serum, of which with M/Z 3981, 4290, and 28 066 may be related with tumor burden, while with M/Z 11 487, 11 529, and 11 678 may be response to surgical stress.