应用巢式聚合酶链反应和测序检测肺炎支原体23S rRNA中点突变

目的 建立快速检测肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae,MP)耐药性的实验方法并应用于临床以了解MP耐药现状.方法 应用巢式PCR直接检测咽拭子标本MP-23S rRNA基因并对扩增产物进行电泳检测或DNA测序分析;通过MP培养及体外药物敏感性试验测定临床分离株的红霉素最小抑菌浓度,以验证23S rRNA基因检测结果的可靠性.结果 200例临床标本经MP-IgM抗体、咽拭子MP种特异性16S rRNA基因巢式PCR扩增和MP分离培养测定证实为MP 64例.应用巢式PCR技术扩增MP-23S rRNA基因,并对扩增产物进行测序,将基因序列与基因库中MP标准株基因序列进行比较,与标准株序列相同的共计26例,其余38例存在23S rRNA点突变:35例在2063位点发生了A到G的点突变,1例在2063位点有A到C的点突变,2例在2064位点有A到G的点突变;耐药率为59.4%.MP耐药基因检测方法灵敏度达102 ccu/ml,MP培养及药物敏感性试验证实23S rRNA基因检测结果可靠.结论 建立的MP耐药基因检测方法能直接检测临床标本中的MP耐药基因.59%的受检标本23S rRNA基因发生点突变.     

肺炎支原体感染与支气管哮喘的关系

肺炎支原体（MP）感染与支气管哮喘的关系是近年研究的热点之一,MP感染可导致呼吸道慢性炎症,进而导致呼吸道高反应性。MP直接损伤上皮细胞,影响细胞因子、炎症介质及IgE释放,调节黏液分泌;使呼吸道上皮内神经调节机制出现紊乱,对刺激因子呈高反应性。应用大环内酯类药物治疗支气管哮喘也取得一定疗效。本文就二者间关系的研究进展加以综述。     

荧光定量聚合酶链反应检测肺炎支原体方法的建立

目的建立检测肺炎支原体的荧光定量PCR法,并与市售试剂盒和传统巢式PCR法的检测性能进行比较。方法设计针对肺炎支原体社区获得性肺炎呼吸窘迫综合征毒素基因的特异性引物,构建含相应目的片段的质粒作为标准品,采用SYBR Green染料法进行实时定量PCR,并绘制标准曲线。通过检测其他细菌和170例儿童临床咽拭子样本,比较新建荧光定量PCR法、市售试剂盒和传统巢式PCR法在临床应用中的差异。结果新建荧光定量PCR法和巢式PCR法能够检出的肺炎支原体标准株DNA最低模板量为10拷贝,市售试剂盒检出最低模板量为102拷贝。在特异性实验中3种方法均可区分肺炎支原体和其他菌种。在检测的170例儿童临床咽试子样本中,新建荧光定量PCR法、市售试剂盒和传统巢式PCR法的阳性率分别为60.00%、50.00%和53.53%。新建荧光定量PCR法与市售试剂盒的结果具有高度相关性(r=0.953),2种方法的总符合率为86%,Kappa值为0.729。新建荧光定量PCR法与传统巢式PCR法的结果总符合率为90%,Kappa值为0.797。结论新建荧光定量PCR法与市售试剂盒相比灵敏性更高,特异性相同,成本低;与传统巢式PCR法相比操作简单,耗时短且污染少,具有良好的科研和临床应用前景。     

肺炎衣原体实验室诊断技术研究进展

肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,Cpn)是急性呼吸道感染最常见的非典型病原之一,可引起肺炎、支气管炎及咽炎等,也可能与动脉粥样硬化、心内膜炎及冠心病等肺外疾病有关,严重者可造成人体多系统、多器官的损伤。Cpn感染全球范围存在,可引起区域内暴发流行,但由于其临床表现无特征性,常须要结合实验室检测结果做出诊断。因此,国内外学者不断改良各种Cpn诊断技术,力求找到感染早期快速准确的诊断方法。本文拟综述近年来Cpn实验室诊断技术的研究进展及应用价值。     

新生儿解脲支原体肺炎临床分析

新生儿解脲支原体肺炎临床分析郭素琼，候金珍，方慧秋，辛德莉，李靖，李志敏，郭章概近年来支原体感染在小儿呼吸道疾病中的地位愈益受到人们的重视。解脲支原体（ＵＵ）又称为Ｔ支原体，与围产期感染症之联系也一直是人们注意的问题。为了解解脲支原体在新生儿肺炎的发...     

实时定量PCR检测流感嗜血杆菌感染实验室诊断方法的建立

目的建立SYBR-Green染料法实时定量聚合酶链反应(PCR)检测流感嗜血杆菌(Hi)感染的实验室诊断方法。方法设计合成针对Hi fucK基因的引物;扩增Hi fucK基因,构建质粒,10倍梯度稀释后,以10~108 copy/反应作为标准品绘制标准曲线,并检验新建实验室诊断方法的敏感度;采用实验室保存的肺炎支原体标准株、人型支原体标准株、阴沟肠杆菌标准株、金黄色葡萄球菌标准株、肺炎克雷伯菌标准株和大肠埃希菌标准株的DNA标本,检验新建实验室诊断方法的特异度;将新建立的实验室诊断方法,应用于临床标本的检验。结果新建实验室诊断方法敏感度较高,其可检测到拷贝数为10copy的Hi DNA;具有较高特异度,可成功区别于几种病原体DNA;将该方法应用于226份临床咽拭子标本的检测,检出Hi感染92份,阳性率为40.70%。结论该研究建立的实时定量PCR检测Hi感染的方法,具有较高的敏感度和特异度,操作简单,用时较短,可用于临床Hi感染的实验室诊断。     

肺炎支原体耐药机制、检测方法及控制策略

肺炎支原体(MP)是引起肺炎和肺外并发症的一种常见病原体.儿童MP感染的主要治疗药物是大环内酯类抗生素.近年来临床上分离到耐药MP株.现就MP的耐药机制、耐药检测方法和如何对耐药MP进行控制与治疗进行介绍.实用儿科临床杂志,2009,24(10):721-723     

儿童心肺复苏术的研究状况和对比

心肺复苏指南自1974年制定以来,多次修订改进。2005年心肺复苏和心血管病急诊科学治疗建议国际会议的召开,对心肺复苏指南再次进行了修订,并利用循证程序就心肺复苏的治疗推荐方案达成了一致性意见。本文主要对心肺复苏的程序进行简略介绍,并对历年的心肺复苏指南作以简单比较。     

健康儿童鼻咽部常见致病微生物携带状况及临床意义

目的：了解健康儿童鼻咽部常见致病微生物携带状况，探讨小儿呼吸道感染病原诊断中鼻咽分泌物检测的临床价值及依据。方法：对2294名健康儿童及患儿取咽拭子或抽吸鼻咽分泌物进行检测。其中1906名儿童之咽拭子标本用聚合酶链反应（PCR）法检测肺炎支原体（MP）；307名儿童取咽拭子行细菌培养，81名儿童取鼻咽分泌物（NPS）进行呼吸道合胞病毒（RSV）及腺病毒（ADV）分离。同期对患儿也进行了相应病原检测。结果：1906名健康儿童中肺炎支原体阳性者28名，占1．47％，而544例急性下呼吸道感染者中阳性者107例，占19．67％，P＜0．001，健康儿童中肺炎链球菌，流感嗜血杆菌，金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，A组乙型溶血性链球菌（GAS）的平均带菌阳性率分别为18．6％，6．5％，2．3％，2．0％，2．0％，未发现脑膜炎双球菌；34例急性扁桃炎患儿GAS阳性者26例，占76．5％，P＜0．001。81名健康婴幼儿呼吸道合胞病毒携带者3例，占3．7％，呼吸道3，7型腺病毒携带者1例占1．2％，而136例下呼吸道感染患儿RSV中阳性者51例，占37．5％，P＜0．001。结论：健康儿童鼻咽部肺炎支原体，腺病毒，呼吸道合胞病毒，A组乙型溶血性链球菌及脑膜炎双球菌的携带者均很少，检测阳性者，有重要诊断意义，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌等在健康人中的检出率较高，不能代表呼吸道感染的病原菌，但应密切结合临床分析，给予必要的重视。