肺炎支原体对大环内酯类抗生素的耐药机制

肺炎支原体(MP)是儿童和青少年社区获得性呼吸道感染的常见病原体,大环内酯类抗生素是治疗小儿MP感染的首选药物。然而,近年来MP对大环内酯类抗生素出现耐药,结合位点的基因突变是目前的研究热点,也是引起MP耐药的主要机制之一。对MP耐药性的研究可为抗生素的合理选择和应用提供理论指导。     

聚合酶链反应在肺炎支原体检测中的临床应用与研究

采用聚合酶链反应结合分子杂交技术对多种已知支原体、模似临床标本、临床标本，以及动物模型进行研究，建立了一套可在２小时内对肺炎支原体（ＭＰ）感染作出诊断的实验方法，结果表明，此方法对ＭＰ具有高度特异性，与其它支原体无交叉反应，检测灵敏度可达１ｃｃｕ（相当于１０～４０个ＭＰ）。检测了２００例临床病例标本，有３５例阳性，与血清学方法基本相符。此方法简便、快速、成本低廉，适合临床应用。     

荧光定量PCR检测卡他莫拉杆菌感染的实验室诊断方法学建立及应用

目的 建立荧光定量PCR检验卡他莫拉杆菌的实验室诊断方法并检验临床样本.方法 针对卡他莫拉杆菌外膜蛋白COPB设计引物及探针;构建含卡他莫拉杆菌目的基因片段的质粒,梯度稀释后作为标准品,绘制标准曲线;验证实验方法的敏感性;通过检测7种病原体标准株验证该方法的特异性.用新建荧光定量PCR检测321例诊断为哮喘的儿童患者咽拭子标本.结果 绘制新建荧光定量PCRTaqman探针法检测质粒标准品的标准曲线,新建实验室诊断方法的敏感性可达10拷贝/反应,研究方法可成功区分卡他莫拉杆菌与其他6种病原体DNA.检测321例临床咽拭子样本,卡他莫拉杆菌阳性25例,阳性检出率为7.79%.结论 新建荧光定量PCR法具有较高的灵敏度、特异性,能简单、快速、准确、灵敏地检测卡他莫拉杆菌,可以应用于临床样本的检测.     

加强临床能力培养 造就合格临床医生

临床教学是继医学基础教育之后的环节，是高等医学教育的重要组成部分，是医学人才培养的重要实践阶段。但目前存在诸多临床教育方面问题，造成很多本科毕业生毕业后不能胜任基本医疗任务。对临床教学进行改革符合全球化背景下的医学教育研究与改革的趋势。     

氯霉素、利福平对肺炎支原体的抗菌活性分析

目的探讨氯霉素、利福平对肺炎支原体(MP)的抗菌活性。方法对370例咽拭子标本进行MP分离培养,应用套式聚合酶链式反应(PCR)扩增MP种特异16SrRNA基因对临床分离株进行分子鉴定;通过药物敏感试验测定MP分离株的红霉素的最小抑菌质量浓度(MIC),应用套式扩增红霉素作用靶位23SrRNA基因,以鉴别敏感株和耐药株;应用药物敏感试验测定MP分离株的氯霉素、利福平的MIC。结果临床标本370例中分离MP50株。其中红霉素敏感株4株,耐药株46株。46株耐药株的红霉素作用靶位23SrRNA基因发生点突变,4株敏感株无点突变。所有MP分离株对氯霉素敏感,对利福平耐药。结论利福平对MP无效,氯霉素对MP红霉素敏感株及耐药株均有效。     

1例以呕吐为首发症状的儿童期糖尿病

1病例患儿，男，12岁。以呕吐、发热2天就诊。入院后查体：T36℃，P80次／分，R28次／分，BP120／80mmHg，神清，精神反应弱，呼吸深快，全身皮肤略干燥，弹性尚好，下肢皮肤发花。浅表淋巴结无肿大，眼窝下陷。心膈(-)腹软，不胀。剑下、右上腹压痛( )，肝脾肋下未及。颈软。辅助检查：血生化：葡萄糖378mg／dl，钾3．22mg／dl，二氧化碳3．6mmol／L，渗透压     

肺炎支原体对大环内酯类抗生素耐药性及耐药机制研究

目的 了解肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)对大环内酯类抗生素的耐药情况及耐药机制.方法 对370份咽拭子标本进行MP分离培养,应用套式PCR扩增MP种特异16S核蛋白体RNA(16SrRNA)基因对临床分离株进行分子鉴定;通过药物敏感实验测定MP分离株对大环内酯类药物的MIC并筛选出耐药株;设计套式PCR扩增红霉素作用靶位23S核蛋白体RNA(23SrRNA)基因,扩增产物进行全自动DNA测序,测得序列与NCBI已登录的MP标准株M129(登录号X68422)23SrRNA基因作比对.结果 370份临床标本中分离MP 50株,分离阳性率为13.5%.50株中敏感株4株,耐药株46株(占92%).耐药菌株的红霉素、阿奇霉素、交沙霉素MIC值均升高.4株敏感株和肺炎支原体国际标准株FH的23SrRNA基因序列与基因库的MP基因序列相同,46株耐药株的23SrRNA基因发生点突变,41株突变位点在23SrRNA V区中心环的2063位,其中40株发生了A→G的点突变,1株发生了A→C的点突变;另5株突变位点在2064位,A→G.结论 MP对大环内酯类抗生素耐药率高,耐药性的分子基础是23SrRNA基因的点突变,其中2063位点突变占主导地位.23SrRNA基因发生点突变的肺炎支原体对红霉素、阿奇霉素及交沙霉素的MIC值均升高.     

肺炎支原体肺炎患儿支气管肺泡灌洗液中肺炎支原体耐药基因和13种病原检测结果分析

目的了解肺炎支原体肺炎(MPP)患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺炎支原体(MP)耐药基因和13种呼吸道病原的分布情况。方法回顾性选择2018年1月至2019年1月北京大学第三医院和北京大学第一医院100例MPP患儿的BALF标本, 采用荧光定量PCR法检测MP核酸及其耐药基因, 采用多重PCR核酸检测技术测定甲型流感病毒、甲型流感病毒H1N1、甲型流感病毒H3N2、乙型流感病毒、人副流感病毒、腺病毒、人博卡病毒、人鼻病毒、肺炎衣原体、人偏肺病毒、MP、人冠状病毒和呼吸道合胞病毒核酸, 采用χ2检验进行分析。结果 100例BALF标本, 荧光定量PCR法检测MP及耐药基因, 83例(83.00%)MP阳性, 其中78例(93.98%)耐药, 均为23S rRNA结构域V区A2063G的点突变。多重PCR法检测13种呼吸道病原, 89例(89.00%)阳性。79例(79.00%)检测到MP, 其中74例(74.00%)仅检出MP, 5例(5.00%)同时检出MP合并其他病原。10例(10.00%)检测出其他病原。0～4岁组病毒检出率高于>4～6岁组(P=0.042)和>6岁...     

成人流感样病例13种病原体检测情况及多重PCR毛细电泳片段分析法检测的临床应用

目的 探究成人流感样病例中13种病原体分布情况及多重聚合酶链反应(PCR)毛细电泳片段分析法在病原体检测中的应用价值.方法 收集2019年12月至2020年2月北方地区189份流感样病例咽拭子标本,采用多重RT-PCR与毛细电泳片段分析法联用技术得到病原体的检测结果.检测病原体包括甲型流感病毒(InfA)、人腺病毒(H...     

应用巢式聚合酶链反应和测序检测肺炎支原体23S rRNA中点突变

目的 建立快速检测肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae,MP)耐药性的实验方法并应用于临床以了解MP耐药现状.方法 应用巢式PCR直接检测咽拭子标本MP-23S rRNA基因并对扩增产物进行电泳检测或DNA测序分析;通过MP培养及体外药物敏感性试验测定临床分离株的红霉素最小抑菌浓度,以验证23S rRNA基因检测结果的可靠性.结果 200例临床标本经MP-IgM抗体、咽拭子MP种特异性16S rRNA基因巢式PCR扩增和MP分离培养测定证实为MP 64例.应用巢式PCR技术扩增MP-23S rRNA基因,并对扩增产物进行测序,将基因序列与基因库中MP标准株基因序列进行比较,与标准株序列相同的共计26例,其余38例存在23S rRNA点突变:35例在2063位点发生了A到G的点突变,1例在2063位点有A到C的点突变,2例在2064位点有A到G的点突变;耐药率为59.4%.MP耐药基因检测方法灵敏度达102 ccu/ml,MP培养及药物敏感性试验证实23S rRNA基因检测结果可靠.结论 建立的MP耐药基因检测方法能直接检测临床标本中的MP耐药基因.59%的受检标本23S rRNA基因发生点突变.