脂质体介导骨保护素基因转染大鼠骨髓基质干细胞及其表达*

背景：基因修饰骨组织工程种子细胞,可提高对骨缺损的修复能力。 目的：构建含有骨保护素的真核表达载体并检测转染骨髓基质干细胞后的表达。 方法：取4周龄SD大鼠胫骨和股骨行骨髓基质干细胞的分离和培养,分为载体组、空载体组、对照组。空载体组转染plRES2-EGFP载体,载体组转染plRES2-EGFP-OPG。 结果与结论：转染后激光扫描共聚焦显微镜观察可见骨髓基质干细胞内绿色荧光蛋白表达;RT-PCR检测结果可见质粒载体组在1 200 bp有明显条带,空载体组及对照组未见表达;免疫细胞化学检测骨髓基质干细胞内骨保护素蛋白呈阳性;MTT法检测各组细胞增殖活力无明显改变(P > 0.05)。证实应用plRES2-EGFP-骨保护素质粒转染大鼠骨髓基质干细胞,可获得外源性骨保护素的基因及蛋白表达。     

两种不同培养体系对卵母细胞体外受精及胚胎体外发育的影响

目的　挑选出一种较为理想的体外受精(IVF)培养体系。方法　90例(91个周期)接受IVF/单精子胞浆内注射(ICSI)技术治疗的患者,卵母细胞的IVF及胚胎的体外培养分别采用GⅢ体系(A组, 51周期, )和Quinn体系(B组,40周期)。结果　A组和B组分别获得683枚和652枚卵母细胞,IVF后,受精率分别为63 .25% ( 432 /683 )及66 41%(433 /652),无显著性差异(P>0. 05)。体外培养24h后,A组414枚受精卵发生卵裂,卵裂率为95. 83% ( 414 /432 );B组397枚受精卵发生卵裂,卵裂率为91 69% (397 /433) ,无显著性差异(P>0 .05)。继续培养,行第3天胚胎移植,A、B两组分别获得优质胚胎220及140枚(53. 14%和35. 26% )。最终,A组共有26例获得临床妊娠,B组15例获得临床妊娠,妊娠率为50. 98%和37. 5%,两者之间有显著性差异(P<0 .05)。另外,B组中受精率、卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率方面,IVF周期与ICSI周期之间无显著性差异(P>0. 05),而A组中优质胚胎率及临床妊娠率方面,有显著性差异(48. 97%和63 .11%, 45 .71%和56 25%,P<0 05),受精率和卵裂率方面两周期之间无显著性差异(P>0. 05 )。结论　Quinn系列似乎有助于卵母细胞的体外受精,而GⅢ体系更有利于胚胎的早期发育及后期的着床方面。对于GⅢ系列采取ICSI授精方式似乎更能提高试管婴儿的     

卵泡发育速度对胚胎发育及体外受精-胚胎移植结局的影响

目的探讨促排卵过程中卵泡发育速度与卵母细胞质量间的相关性。方法154名患者共159个体外受精-胚胎移植（IVF-ET）周期,按卵泡发育速度（v,mm／d）的分布分为A组（v〈1）、B组（1≤v≤1．59）、C组（v〉1．59）,比较各组卵母细胞成熟度指标。结果A、B、C3组卵细胞成熟率分别为89．56％、92．45％和94．76％,优质胚胎率分别为40．85％、36．37％和37．11％,妊娠率分别为42．1％、43．1％和35．3％,卵母细胞成熟率C组高于A、B组。优质胚胎率A组高于B、C两组,但组间差异均无显著性（P〉0．05）,而妊娠率A、B两组明显高于C组,且B、C两组间差异有显著性（P〈0．05）。结论促排卵过程中卵泡的生长速度应控制在一个最佳的范围内,因其与卵子质量和后期优质胚胎率及妊娠结局密切相关,且卵泡发育速度又可作为衡量卵泡发育潜能的一项重要指标。     

纤维结肠镜检查下消化道出血752例分析

下消化道出血病因及部位的诊断,以往主要依懒于X线钡剂造影检查,常有一定的困难。纤维结肠镜的应用及插入技术的进步,提高了下消化道出血的诊断率。我院自1979年至今对下消化道出血752例(除外内、外痔引起的出血)进行了纤维结肠镜检查。现总结如下。     

人成熟卵泡液在卵母细胞体外成熟培养基中的作用

目的 探讨人成熟卵泡液、血清替代物对人未成熟卵母细胞体外成熟及发育的影响。方法 在基本培养液中加入人成熟卵泡液（human follicle fluids,HFF）（A组）、或血清替代物（serum subtitute supplement,SSS）（B组）用于未成熟卵母细胞的体外培养（in vitro maturation,IVM）,观察成熟率及进一步发育能力。结果 两组之间成熟率、受精率差异无显著性,A组的卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率明显高于B组。结论 卵母细胞在两种培养液中均能完成核成熟,但人成熟卵泡液能同时促进卵母细胞的胞质成熟,两者相比HFF效果更好。     

脂质体介导骨保护素基因转染大鼠骨髓基质干细胞及其表达

背景:基因修饰骨组织工程种子细胞,可提高对骨缺损的修复能力.目的:构建含有骨保护素的真核表达载体并检测转染骨髓基质干细胞后的表达.方法:取4周龄SD大鼠胫骨和股骨行骨髓基质干细胞的分离和培养,分为载体组、空载体组、对照组.空载体组转染plRES2-EGFP载体,载体组转染plRES2-EGFP-OPG.结果与结论:转染后激光扫描共聚焦显微镜观察可见骨髓基质干细胞内绿色荧光蛋白表达;RT-PCR检测结果可见质粒载体组在1 200 bp有明显条带,空载体组及对照组未见表达;免疫细胞化学检测骨髓基质干细胞内骨保护素蛋白呈阳性;MTT法检测各组细胞增殖活力无明显改变(P > 0.05).证实应用plRES2-EGFP-骨保护素质粒转染大鼠骨髓基质干细胞,可获得外源性骨保护素的基因及蛋白表达.     

脂质体介导骨保护素基因转染大鼠骨髓基质干细胞及其表达

背景：基因修饰骨组织工程种子细胞,可提高对骨缺损的修复能力。目的：构建含有骨保护素的真核表达载体并检测转染骨髓基质干细胞后的表达。方法：取4周龄SD大鼠胫骨和股骨行骨髓基质干细胞的分离和培养,分为载体组、空载体组、对照组。空载体组转染plRES2-EGFP载体,载体组转染plRES2-EGFP-OPG。结果与结论：转染后激光扫描共聚焦显微镜观察可见骨髓基质干细胞内绿色荧光蛋白表达;RT-PCR检测结果可见质粒载体组在1200bp有明显条带,空载体组及对照组未见表达;免疫细胞化学检测骨髓基质干细胞内骨保护素蛋白呈阳性;MTT法检测各组细胞增殖活力无明显改变（P〉0.05）。证实应用plRES2-EGFP-骨保护素质粒转染大鼠骨髓基质干细胞,可获得外源性骨保护素的基因及蛋白表达。     

冻融人早孕蜕膜单层细胞对小鼠胚胎发育的影响

目的　探讨冻融的人早孕蜕膜单层细胞对小鼠胚胎发育的影响。方法　蜕膜单层细胞解冻后接种获得冻融蜕膜单层细胞;观察昆明白小鼠单细胞受精卵与传代的、冻融的人早孕蜕膜单层细胞共培养 (A、B组)及仅用培养液培养(C组)的胚胎发育情况。分析A、B组与C组各期鼠胚的发育情况及 8 细胞期A类胚胎形成情况。结果　A、B、C组的2 细胞期形成率差异无显著性,A组在 4 细胞形成率上高于B、C组。A、B组 8 细胞期、桑椹期、早期囊胚形成率和囊胚孵出率高于C组(P<0 05)。而A、B组之间差异无显著性。A、B组在 8 细胞阶段A、B类胚胎形成率与C组相比,差异有显著性(P<0 05)。同样A、B组之间差异无显著性。共培养 20d的培养液经检查,细菌及真菌均阴性。结论　冻融的人蜕膜单层细胞与传代细胞一样在小鼠胚胎的发育中起到了促进作用,该结果说明了人胚胎与其冻融的自体子宫增殖晚期-分泌早期的内膜单层细胞共培养的可行性。     

人早孕蜕膜单层细胞与鼠胚共培养系统的建立

目的　获得鼠胚与人早孕蜕膜单层细胞的共培养系统。方法　经过细胞培养、传代获得蜕膜单层细胞 ;冻融后接种获得冻融蜕膜单层细胞 ;对单层细胞作免疫组织化学检查其雌、孕激素受体的表达。结果　人早孕蜕膜细胞有良好的体外培养活力 ,易于获得培养及传代。将获得的冻融蜕膜单层细胞进行雌、孕激素受体检查 ,见阳性表达。获得昆明白小鼠超促排卵后的单细胞受精卵 ,分别与传代及冻融的蜕膜细胞共培养获得囊胚孵出。结论　人早孕蜕膜单层细胞与鼠胚共培养系统的建立为人胚胎与其冻融的自体子宫内膜单层细胞共培养的研究提供了可行性分析。     

获单卵周期体外受精和单精子胞浆内注射对IVF-ET结局的影响

目的取卵日仅获单卵周期常规体外受精（IVF）和单精子胞浆内注射（ICSI）两种受精方式对的IVF—ET结局的影响。方法本研究对92个获单卵周期进行比较，分析了在年龄、激素和子宫内膜厚度无差别的情况下ICSI和IVF的结局。就不同年龄段及不同精液质量时，ICSI和IVF受精率、卵裂率及妊娠率进行比较。结果年龄、激素和子宫内膜厚度无差别时，ICSI的受精率和妊娠率分别为81．6％和12.2％，明显高于IVF组的69．8％和4．7％。不同年龄组，当精子正常时，ICSI组和IVF组受精率和卵裂率无统计学差别，但妊娠率在前者高；精子未达正常标准时，ICSI组的受精率、卵裂率及妊娠率均显著高于IVF组。结论精子质量对选用ICSI还是IVF是重要影响因素，未迭正常标准的精子选用ICSI更好。总体说来，对于获单卵周期，ICSI似乎是更好的受精方式。这次结果也为我们在自然周期选择何种受精方式提供了参考。