兔心肌缺血-再灌注后c-fos,PCNA,Bax和Bcl-2的表达及临床意义

目的研究新西兰大白兔心肌细胞缺血-再灌注后原癌基因（c-fos）、增殖细胞核抗原（PCNA），Bax基因，Bcl-2基因的表达及其临床意义。方法用18只新西兰大白兔建立心肌缺血-再灌注模型，按不同再灌注方法随机分为3组，每组6只。Ⅰ组，缺血15min，不灌注；Ⅱ组，缺血15min，再灌注15min；Ⅲ组，缺血15min，再灌注30min。术后分别取缺血-再灌注区及对照区（非缺血-再灌注区）心肌组织进行c-fos，PCNA，Bax，Bcl-2的免疫组织化学检测。结果3组心肌细胞缺血-再灌注后c-fos、PCNA、Bax和Bcl-2均有阳性表达，缺血-再灌注区均高于对照区（P〈0．01或〈0．05）；组间比较：缺血-再灌注区c-fos、Bax和Bcl-2阳性率Ⅱ组、Ⅲ组均高于Ⅰ组，且Ⅲ组高于Ⅱ组（P〈0．01），PCNA阳性率Ⅲ组高于Ⅰ组（P〈0．01）。3组缺血-再灌注区Bax／Bcl-2比值均较对照区增高。结论心肌缺血和再灌注显著诱导c-fos的表达，其增加与心肌再灌注损伤有关；心肌缺血-再灌注后诱发细胞促凋亡／抗凋亡相关基因Bax／Bcl-2的激活，存在着与增殖基因共同表达的特点。     

原发性松果体卵黄囊瘤1例

患者女性,39岁.间断头痛7年,加重7个月为主诉,2008年10月12日急诊入院.查体:直接和间接对光反射均消失,双眼失明,仅有光感,闭目难,立征(+).头颅CT示:松果体占位,脑积水.患者在2001年无诱因出现头痛症状,因既往有青光眼病史,口服治疗青光眼的药物后可缓解,但头痛症状仍间断发作,时好时坏.2006年在河南某医院做头颅CT:未见异常.2008年10月10日再次出现头痛症状,剧烈,同时伴有恶心、呕吐等症状,呕吐物为胃内容物,自行服药未见缓解,随后入院.MRI:松果体肿瘤征象,邻近结构明显受压,轻微脑积水,双侧侧脑室前、后角旁脱骨髓鞘改变,右额区引流导管手术后改变征象.术中所见:松果体区可见一大约2cm×3cm大小肿瘤,质软,与周围组织界限清,血供丰富.进行肿物切除术.     

475例外周血染色体核型分析

“随着医学的发展，原来威胁人类健康的一些疾病已得到控制，而遗传性疾病所占的比重日益突出外”。染色体病是遗传病的重要组成部分。现将475例外周血细胞染色体核型分析研究概况报告如下：     

一种石蜡包埋组织DNA抽提的方法

DNA抽提是分子生物学研究的基础工作，而从石蜡包埋组织中提取基因组DNA有一定的难度，传统的二甲苯脱蜡及苯酚氯仿抽提DNA，其弊端是过程长、得到的DNA量较少，如何避免DNA分子损失，保持DNA相对完整和纯度值得探讨。本实验室经过一段时间摸索，建立了一种简便有效的石蜡包埋组织DNA的抽提方法，具体操作如下。     

HPV16与新疆维吾尔族宫颈癌的相关性研究

目的 :探讨新疆维吾尔族宫颈癌患者中HPV16型的检出率。方法 :采用半巢式PCR技术检测 73例新疆维吾尔族宫颈癌活检组织、2 6例正常宫颈石蜡包埋组织中HPV16型 ,分析其与新疆维吾尔族宫颈癌发生的相关性。结果 :在宫颈癌组织中 ,HPV16检出率为 6 1.6 % (4 5 / 73) ,与对照组相比 (0 % ) ,存在显著性差异 (χ2 =2 9.38,P <0 .0 5 )。结论 :HPV16型感染与新疆维吾尔族宫颈癌的发生密切相关。     

石蜡包埋组织中3种DNA提取方法的比较及优化

近年来,分子病理学技术迅速从科研发展到常规的病理诊断.目前常规检测包括:细菌病毒的检测[1-3]、肿瘤相关基因的突变[4,5]、靶向药物的分子检测[6,7]等,存档的福尔马林固定-石蜡包埋组织(formalin fixed and paraffin embedded tissues,FFPET)常常是形态学研究的宝贵资源,回顾性基因的研究与患者的治疗和临床诊断密切相关.因此DNA提取的质量将直接影响所有以DNA为研究对象的分子生物学实验,对复杂的多重PCR如T/B细胞克隆评价[8]、应用Array-CGH[9]、MLAP-based测定[10]等DNA的质量和纯度提出更高的要求.但是从FFPET中提取DNA以及用DNA进行基因研究中存在检测成功率低、重复性差等问题,多数文献描述提取DNA方法成功率为60%～80%[11],因此提取DNA的质量、纯度、片段的长度决定后续实验的成功与否.同时,对石蜡组织提取DNA前样本的量在很多文献中描述不一,针对提取DNA的方法不同,选择最合适的组织样本量,本组研究通过比较不同抽提方法对肿瘤组织不同蜡膜用量所得DNA质量,总结3种提取DNA的方法对应最合适的蜡膜用量,建立标准化操作程序.     

P53、P21 ras、Ki-67 蛋白的表达及微血管密度与甲状腺癌转移关系的研究

目的探讨甲状腺癌中P53、P21ras、Ki-67基因的表达及微血管密度(MVD)与甲状腺癌转移的关系.方法用免疫组化SP法,检测45例甲状腺癌中P53、P21ras、Ki-67及血管标记物CD34蛋白的表达情况,并分析其与临床病理因素的关系.结果 45例甲状腺癌中P53和P21r~的阳性表达率分别为22.2%和35.5%,差异无统计学意义;在发生淋巴结转移的13例甲状腺癌中P53蛋白阳性表达率为46.2%,明显高于无转移者的12.5%(χ2=5.77,P＜0.05),其Ki-67分级指数有9例分布在Ⅱ～Ⅲ级;在复发病例中P53蛋白的阳性表达率为75%,明显高于未复发病例的10%(χ2=5.92,P＜0.05),复发病例的Ki-67分级指数均在Ⅱ级.微血管密度计数在滤泡癌中为79.1±18.4,明显高于乳头状癌的35.4±12.1(t=2.412,P＜0.05).结论P53蛋白阳性表达的甲状腺癌患者易发生淋巴结转移及复发,P21ras及Ki-67的高表达则提示甲状腺癌可能发生淋巴结转移,甲状腺癌组织中的微血管密度与癌组织学类型有关,而与淋巴结转移无关.     

甲状腺癌中ret/ptc癌基因表达的研究

目的探讨ret原癌基因活化形式ret/ptc癌基因在甲状腺癌发病机制中的作用和判断其生物学行为。方法应用RTnPCR方法检测了37例甲状腺癌ret/ptc癌基因的表达,包括乳头状癌为26例,滤泡癌8例,髓样癌2例,未分化癌1例。结果26例甲状腺乳状癌中有11例表达为阳性,阳性率为42.3%,8例滤泡癌、2例髓样癌和1例未分化癌均表达为阴性。组织学观察显示,ret/ptc阳性组病例多伴有淋巴细胞浸润(63.6%),显著高于阴性组病例(20.0%,P<0.05),临床病理资料显示,患者发病年龄平均为28.9岁,显著低于阴性组病例的45.9岁(P<0.05),而与患者性别,肿瘤大小,淋巴结转移无显著相关性,随访结果表明在复发病例中无ret/ptc阳性表达病例。结论我们认为ret原癌基因的活化与甲状腺乳头状癌的发生有关,具有ret/ptc癌基因阳性表达的患者一般发病年龄较小,肿瘤恶性程度不高,患者预后相对较好,可作为临床上诊断及判断其生物学行为的参考指标。     

体外转录法制备地高辛标记cx43cRNA探针

原位杂交常用探针种类较多。检测组织细胞中mRNA，首选cRNA探针。与DNA探针不同，它是单链探针，杂交时无需变性，也没有互补链的干扰，敏感度比cDNA探针要高；与寡脱氧核酸探针比较，其敏感度也要高出许多；并且cRNA探针杂交形成RNA-RNA双链核酸比RNA-DNA和DNA-DNA双链核酸更稳定，从而允许多次洗涤，提高杂交信号，降低背景染色。但也有一些缺点，探针要求条件高，严防RNA酶污染；粘性强，与组织有较高的非特异性结合，需要多次漂洗。用地高辛标记cRNA探针，既克服了同位素探针的一些缺点，如受半衰期的限制，污物处理困难等．又避免了生物素标记探针时受内源性生物素的干扰。所以我们制备地高辛标记的cRNA探针原位杂交检测宫颈组织中的connexin43(CX43)mRNA。     

TIP30蛋白在乳腺癌中的表达及与bax蛋白相关性研究

目的研究肿瘤转移抑制基因TIP30和促凋亡基因bax在乳腺癌中的表达,探讨它们之间的关系及其临床意义。方法应用免疫组织化学S-P法,检测88例乳腺癌病人TIP30蛋白和bax蛋白的表达,并与32例乳腺良性病变组织进行对照。结果①乳腺癌中TIP30蛋白的表达阳性率42％,明显低于在乳腺良性病变中的表达率75％（P〈0．05）,在Ⅲ级癌组织中TIP30蛋白的表达率比Ⅰ、Ⅱ级低（P〈0．05）,而与病人年龄、组织学分型、腋淋巴结转移无关。②bax蛋白在乳腺癌中的表达明显低于乳腺良性病变（P〈0．05）,Ⅲ级癌组织中bax蛋白的表达率比Ⅰ、Ⅱ级低（P〈0．05）,与乳腺癌腋淋巴结转移有关（P〈0．05）,而与病人年龄、组织学分型无关。结论TIP30蛋白的缺失表达与乳腺癌的发生发展有关,TIP30蛋白与bax蛋白成正相关,TIP30基因可能通过上调bax基因的表达促进细胞的凋亡。