Effect of transfected angiotensin Ⅱreceptor anti—sense nucleotide on the growth of cardiomyocytes in vitro

AsakeymoleculeinRenin-Angiotensin-System(RAS),AngiotensinⅡ(AngⅡ)playsanimportantroleinthepathogenesisofcongestiveheartfailurethroughitseffectoninducingcardiacmyocytehyper-trophyandmatrixfibrosisafteritiscombinedwithitsspecificreceptor(AT1)［1,2］.Regressionofthecardiomy-ocytichypertrophyhasbecomeanimportantproblemtostudy.Inthiswork,weconstructedaplasmidPAT1Acontaininganti-sensenucleotide,andtransfectedcar-diomyocyteswiththeplasmidtoobserveitsinfluenceonthecellgrowthinordertoacquiremorei…     

自体骨骼肌卫星细胞心肌移植对心肌梗死大鼠心肌纤维化的影响

目的了解自体骨骼肌卫星细胞(satellite cell,SC)心肌移植对心肌梗死(myocardial infarction,MI)大鼠心肌纤维化的影响及可能机制。方法45只Wistar大鼠随机分为假手术组(n=15)、对照组(n=15)及移植组(n=15),对照组及移植组大鼠经结扎冠状动脉前降支建立MI模型;假手术组除不结扎左前降支外,其余操作同对照组和移植组。将体外培养2周的大鼠自体SC以注射的方式移植到移植组大鼠梗死区周围,4周后测定各组大鼠缺血心肌VEGFmRNA的表达、VEGF蛋白质的表达、缺血心肌毛细血管密度的变化及缺血心肌的纤维化程度,同时观察移植细胞在梗死区的生长、增殖情况并探讨它们相互的关系。结果SC在梗死区中可增殖分化为横纹肌纤维;SC移植4周后,与假手术组比较,对照组大鼠缺血心肌中毛细血管密度明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),而移植组大鼠缺血心肌中毛细血管密度及VEGFmRNA、VEGF蛋白质的表达较之假手术组、对照组亦明显升高,差异有统计学意义(P<0.05或0.01或0.001)。移植组心肌梗死区域的纤维化被有效抑制,而对照组则呈现出明显的纤维化特征。结论SC在心肌梗死区中可增殖分化为具有弹性和收缩功能的横纹肌样细胞,并通过自分泌和旁分泌的形式分泌VEGF促使缺血心肌毛细血管增生,从而有效地抑制了缺血心肌的纤维化进程。     

骨骼肌卫星细胞的纯化、培养、鉴定及生物学特性的研究

目的 研究骨骼肌卫星细胞体外纯化、培养、鉴定的方法及其生物学特性。方法 采用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶两步消化法纯化出大鼠骨骼肌卫星细胞（SC）,进行体外原代和传代培养,借此观察SC的增殖、分化特点并进行免疫细胞化学染色鉴定。结果 两步消化法是获取SC可靠的方法。生长培养基促使细胞的增殖;延迟分瓶或分化培养基促使细胞分化形成肌管。骨骼肌肌球蛋白（myosin）单克隆抗体免疫细胞化学染色SC呈弱阳性,而肌管呈强阳性。结论 体外培养的大鼠SC在合适的培养条件和传代比例下能够增殖与分化并保持其生物学特性,为其在组织工程和基因治疗中的应用奠定了基础。     

bcl-2基因对血管内皮细胞保护作用的研究

目的探讨转染bcl-2基因对血管内皮细胞的保护作用。方法1.重组真核细胞表达载体:将含编码人bcl-2 cDNA完整开放阅读框的bcl-2 cDNA重组至逆转录病毒载体pLXSN的EcoR Ⅰ位点上,用脂质体包裹重组质粒导入PA317细胞株,并经G418筛选阳性克隆;收集含重组病毒的上清液。2.用含高滴度重组病毒的上清液感染内皮细胞;用PCR法检测转染细胞bcl-2基因和Neo基因,用免疫组织化学方法检测转染细胞bcl-2蛋白表达以证实转染成功。设pLXSN／s-bcl-2、pLXSN、未转染三组。3.观察各组血管内皮细胞在正常培养条件下的生长特征情况,以及在无血清、10％CO2以及10-7M的AngⅡ等不同刺激因素下各组培养血管内皮细胞的生存能力的变化。结果1.成功的重组含bcl-2的真核细胞表达质粒,并经碱基自动测序检测未发现重组的bcl-2基因有碱基丢失或错义配对;2.经PCR检测bcl-2片段和Neo基因片段以及免疫组织化学方法检测转染细胞的bcl-2蛋白表达证实转染成功并获得表达。3.在正常培养条件下各组血管内皮细胞间的形态和生存率无显著差异(p>0.05);4.转染bcl-2基因组血管内皮细胞在无血清、10％CO2以及10-7MAngⅡ等刺激因素下的存活率明显高于转染pLXSN组和未转染组(P<0.05)。结论转染bcl-2基因能显著提高血管内皮细胞的抗损伤能力。     

肾脏疾病白细胞介素2受体测定及其意义

探讨肾脏疾病患儿可溶性白细胞介素２受体和Ｔ细胞亚群改变及其临床意义。方法 间接酶联免疫吸附试验法检测３２例肾病综合征，２４例肾小球肾炎患儿及２４例健康对照儿童血清及尿液ｓｉｌ－２Ｒ浓度；单克隆抗体间接免疫荧光法检测Ｔ细胞亚群。结果．１、肾病及肾炎活动期组血清及尿液ｓＩＬ－２Ｒ浓度分别高于各自缓解期组和对照组，而肾病及肾炎缓解期组血清及尿液display status     

骨骼肌卫星细胞移植对心肌梗死大鼠心肌纤维化的影响

背景：现已发现心肌梗死后心肌纤维化是心室重构的重要机制,而相关干细胞心肌移植对这一过程的影响报道不多。 目的：观察自体骨骼肌卫星细胞移植对心肌梗死大鼠心肌纤维化的影响,并探讨其可能机制。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-07/09在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所第三研究室完成。 材料：Wistar大鼠45只,雌雄各半,体质量150~200 g,其中30只用于制备心肌梗死模型。 方法：45只大鼠按随机抽签法分为3组,每组15只。心肌梗死组：结扎冠状动脉左前降支造成心肌梗死,2周后沿梗死区与正常心肌交界处多点注射0.2 mL无血清M199培养液;移植组：造模后将体外培养2周的大鼠自体卫星细胞0.2 mL以注射的方式移植到大鼠梗死区周围。假手术组：不造模,仅在左前降支周围心前壁多点注射0.2 mL生理盐水。 主要观察指标：4周后测定各组大鼠缺血心肌血管内皮生长因子mRNA、血管内皮生长因子蛋白质的表达,缺血心肌毛细血管密度变化,苏木精-伊红染色观察各组心肌细胞在梗死区的生长、增殖情况。 结果：①卫星细胞移植4周后,假手术组和心肌梗死组血管内皮生长因子mRNA和血管内皮生长因子蛋白表达较移植组明显降低(P < 0.01);心肌梗死组大鼠毛细血管密度较假手术组升高(P < 0.05);移植组大鼠缺血心肌中毛细血管密度较假手术组、心肌梗死组亦明显升高(P < 0.01)。②苏木精-伊红染色显示假手术组大鼠心肌形态正常,结构清晰,心肌纤维排列整齐有序,肌纤维间无成纤维细胞聚集、增生现象。心肌梗死组大鼠心肌内可见成纤维细胞增生及胶原形成,心肌有序的基本结构发生紊乱。移植组大鼠其梗死区可见较多带有横纹且具有多核的肌细胞存在,组织排列较有序,纤维组织明显少于心肌梗死组。 结论：卫星细胞在心肌梗死区中可增殖分化为具有弹性和收缩功能的横纹肌样细胞,并通过自分泌和旁分泌的形式分泌血管内皮生长因子促使缺血心肌毛细血管增生,从而有效地抑制了缺血心肌的纤维化进程。     

高亲和力IgE受体α链cDNA的克隆及序列测定

目的：为获得编码高亲和力ＩｇＥ受体（ＦｃεＲ１）α链的ｃＤＮＡ序列。方法：从正常人外周血中富集嗜碱性粒细胞,提总ＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ,分子克隆,用自动测序及放射自显影测序。结果：分离并鉴定了该ｃＤＮＡ重组子,在１５９密码子及１８５密码子分别发现了ＣＡＣ→ＣＧＣ与ＴＡＴ→ＣＡＴ置换。结论：建立了一个编码ＦｃεＲ１膜外区α链的ｃＤＮＡ重组子克隆,它不含引导肽序列,可能是一个来自中国人的该基因的变异体     

糖耐量减低人群血清C反应蛋白、白介素6、肿瘤坏死因子α及瘦素水平变化及其相关因素研究

目的探讨糖耐量减轻人群血清C反应蛋白(CRP)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及瘦素水平变化及其相关因素。方法 2005年6月在四川省南充市顺庆区医学街社区募集符合条件的健康志愿者82例,其中糖耐量减低者27例(糖耐量减低组)、糖耐量正常者55例(正常对照组)。常规测量所有志愿者血压、体质量、身高、腰围、臀围,计算体质指数(BMI)、腰臀比,抽取空腹静脉血检测其空腹血糖、餐后2 h血糖、血脂、空腹胰岛素、C肽、CRP、IL-6、TNF-α及瘦素,采用稳态模型计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果糖耐量减低组志愿者年龄、BMI、收缩压、腰臀比、空腹血糖、餐后2 h血糖、TC、TG、LDL-C、空腹胰岛素、C肽、HOMA-IR、CRP及瘦素均高于正常对照组(P0.05);两组志愿者性别、舒张压、HDL-C、IL-6及TNF-α比较,差异无统计学意义(P0.05)。Pearson相关分析结果显示,糖耐量减低人群血清瘦素水平与血清TC水平(r=0.561,P=0.003)、HOMA-IR(r=0.435,P=0.016)呈正相关,血清CRP水平与HOMA-IR(r=0.578,P=0.002)呈正相关,血清IL-6、TNF-α水平与其他指标间无直线相关性(P0.05)。多元线性回归分析结果显示,以瘦素为因变量时,TC和HOMA-IR进入回归方程;以CRP为因变量时,HOMA-IR进入回归方程。结论糖耐量减低人群血清CRP、瘦素水平升高,并与胰岛素抵抗有关。     

钙激动剂对心肌肥大有关信号转导的作用

目的 探讨钙激动剂对心肌细胞丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性,ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ蛋白核转位表达,及蛋白核酸合成的影响。方法 应用血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ,１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ）刺激原代培养的心肌细胞钙内流,雷尼丁（ＲＹ,１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ）刺激胞内钙释放;刺激５ｍｉｎ时测ＭＡＰＫ活性,免疫组化方法检测刺激５、１０、２０、３０ｍｉｎ时ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ蛋白定位表达;＾３Ｈ－Ｌｅｕ和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测刺激２４ｈ心肌细胞蛋白核酸合成。结果 ＡｎｇⅡ和ＲＹ刺激心肌细胞５ｍｉｎ时ＭＡＰＫ活性均明显增高,与对照心肌细胞相比差异显著（Ｐ〈０．０１）。免疫组化结果显示,ＲＹ刺激心肌细胞ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ蛋白核转位表达早于ＡｎｇⅡ。ＡｎｇⅡ和ＲＹ刺激２４ｈ,心肌细胞蛋白核酸合成显著增高,与对照组心肌细胞相比差