胸腺素α1—硫氧还蛋白融合蛋白基因的表达及其生物学功能的初步研究

胸腺素α1（thymosin alpha1,Tα1)作为一种免疫增强剂,临床用途广泛。为了大量制备Tα1,按大肠杆菌惯用密码子用人工方法合成Tα1基因,克隆于pUC19的EcoRi和PstI位点,经测序证明序列正确后,串联为4串体（Tα1（4））,经再次确认后克隆入pThioHisA的EcoRI t PstI位点,转化大肠杆菌TOP10菌种,酶切鉴定证明正确后,经1mmol/L IPTG诱导4h,获得硫氧还蛋白与Tα1（4）的融合表达,并经Western blot分析证实,用离子交换柱层可纯化出硫氧还蛋白与Tα1（4）融合蛋白,利用3H－TdR掺入法证实,该融合蛋白具有刺激小鼠脾淋巴细胞的活性。α     

TNFHis-IL-11温度诱导融合表达载体的构建

目的构建TNFHis IL 11温度诱导融合表达载体。方法用EcoRI和PstI消化pGEMIL 11质粒后 ,回收IL 11基因片段 ,以同样的酶切位点克隆入TNFHis表达载体。将重组质粒转入大肠杆菌DH5α菌株 ,经 4 2℃温度诱导 4 .5h后做SDS PAGE和免疫活性鉴定。结果融合蛋白获得了表达 ,其分子量为 37kD ,其表达量占菌体总蛋白的 2 5 %。免疫印迹反应结果显示 ,表达的融合蛋白可与抗IL 11多克隆抗体产生阳性反应。该融合蛋白经盐酸羟胺裂解后可获得IL 11单体。结论TNFHis IL 11温度诱导融合表达载体构建成功。     

梅毒螺旋体 TpsAg-1抗原特性分析

梅毒是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum)感染所致的疾病，据估计世界上每年约有200万新感染的病例[1]。近年来，随着对外开放和旅游事业的发展，在许多城市又出现了梅毒患者，而且有逐年增多的趋势。因此，加强对梅毒螺旋体的研究具有必要性。本文中，我们采用SDS-PAGE、免疫荧光技术及免疫印迹技术，对梅毒螺旋体Tp-sAg-1抗原进行了特异性研究。     

17例阴茎折断的诊断与治疗

过去 ,阴茎折断的临床报道较少。我院自 1980 -2 0 0 0年共收治阴茎折断 17例 ,现报告如下 ,并对其诊断、治疗进行讨论。1　资料与方法1.1　临床资料　　本组 17例 ,年龄 16～ 47岁 ,平均 33 7岁。损伤原因为 :性交时 ,阴茎不慎撞击硬床板 7例 ,撞击女性会阴部 6例 ,性心理变态而自行手淫时用手强行弯曲致折断 2例 ,被女性用硬物猛击勃起阴茎 2例。损伤至治疗时间为 0 5～ 2 4ｈ ,平均为 4 5ｈ。所有伤后均突发疼痛 ,阴茎松软 ,肿胀 ,皮下血肿 ,阴茎侧弯畸形 ,其中 13例伤后能闻及有折断声。 3例出现不同程度血尿。 7例患者急诊接受超声检…     

胸腺素α1-硫氧还蛋白融合蛋白基因的表达及其生物学功能的初步研究

胸腺素α     

喉全切除术后患者嗅觉功能的分析与改善

目的测试评估喉全切除术后患者嗅觉功能的状况,试图找出一种能改善嗅觉的实用方法。方法采用T&T嗅觉计定量检查法对60例喉全切除术后患者的嗅觉进行测试评估,观察其残余嗅觉水平与术后时间、是否行发音重建手术的关系;并对其中4例志愿者的嗅上皮行活检,透射电镜下观察其超微结构改变。采用闭口鼻腔呼气法对喉全切除术后行气管食管裂隙状瘘发音重建术的患者进行干预,观察嗅觉功能改善情况。结果喉全切除术后患者嗅上皮超微结构观察可见嗅上皮细胞呈凋亡性改变。术后行发音重建组(30例)与未行发音重建组患者(30例)均有不同程度的嗅觉减退甚至丧失,两组患者同健康人组(30例)比较,P值均<0.01;行发音重建组的嗅觉优于未行发音重建组(P<0.01)。未行发音重建组患者5年内多已失嗅[平均嗅阈(x±s,下同)5.60±0.49];而行发音重建术后不足5年的患者多为嗅觉中度丧失(平均嗅阈3.44±1.50),术后5年以上患者多为失嗅(平均嗅阈5.56±0.31),以术后5年前后分组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。发音重建组患者采用闭口鼻腔呼气法训练后似可明显改善患者的嗅觉功能(训练前后嗅觉测试比较,P<0.01)。结论喉全切除术后患者的嗅觉减退可能与呼吸气流改道、鼻腔气流消失的解剖学因素及嗅上皮细胞凋亡性改变的病理学因素相关,喉全切除后及早地给予干预措施(如气管食管裂隙状瘘发音重建术、闭口鼻腔呼气法等),可能对维持患者的嗅觉功能或减缓嗅觉减退有作用。     

升血因子对小鼠骨髓多染性红细胞微核的影响

作者在环磷酰按所致小鼠骨髓多染性红细胞微核细胞率增高的模型上，研究了升血因子的防治效应。结果发现，升血因子可明显降低环磷酰胺对小鼠骨髓多染性红细胞微核细胞率的增高，连续４ｄ经腹腔分别注射６２．６０，２５．０４，１２．５２，６．２６和０．２５ｕ／ｋｇ剂量的升血因子，且第４ｄ同时注射５０ｍｇ／ｋｇ剂量的环磷酰胺，小鼠骨髓多染性红细胞微核细胞率分别为９．５０±１．３４．１２．１７±１．０３１３．５０±１．９２，１６．５８士１．９３和１９．６７±１．８９％，与阳性环磷酰胺对照组（２４．７５±１．４４‰）相比有显著性差异（Ｐ＜０．００１，０．００１．０．００１，０．００１和０．００１．ｎ＝６）。结果表明，升血因子对环磷酰胺所致小鼠骨髓多染性红细胞微核细胞率的增加有明显的防治作用，对骨髓多染性红细胞的遗传物质也有显著的保护作用。     

重组胸腺素α1的分离纯化和活性测定

目的：利用融合表达载体pThioHisA的重组质粒pThioHisA-Tα1④,转化大肠杆菌TOP10得到的工程菌,来分离纯化表达的胸腺素α1（thymosin alpha1,Tα1),方法将高效表达融合蛋白的工程菌用菌胞破碎器裂解,经80℃热处理,离心上清采用Q－SepharoseFF阴离子交换色色谱纯化Tα1单体,应用SDS－PAGE,2L－Tricine-SDS-PAGE和HPLC进行鉴定。结果SDS－PAGE分析表明菌体表达的融合蛋白牛菌体总蛋白的400g.kg^-1,经2L－Tricine-SDS-PAGE分析证实,融合蛋白可裂解出Tα1单体,裂解物经简单的离子色谱可以纯化出Tα1单体,HPLC鉴定纯化的Tα1纯度可达950g.kg^-1以上,利用^3H-TdR进行的生物活性测定表明,在致有丝分裂原ConA存在的条件下,融合蛋白和Tα1单体均具有刺激小鼠脾淋巴细胞分裂增殖的能力,与化学合成的Tα1相比具有相似的生活性。结论该方法是分离纯化Tα1简便易行,经济有效的方法,同时也为Tα1的分离纯化和大规模的开发生产奠定了基础。     

胸腺素α1的生化特性及生物学活性的分析

目的 :建立确定胸腺素α1纯度、分子量和等电点等生化特性和生物学活性检测的方法。方法 :应用高效液相色谱、三羟甲基甘氨酸 -SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦 -聚丙烯酰胺凝胶电泳和3H -TdR掺入法 ,在致有丝分裂原存在的条件下 ,刺激小鼠脾淋巴细胞分裂增殖的能力。结果 :胸腺素α1的纯度为 98% ,其相对分子质量为 3 15 3 ,等电点为3 93,在 1 5 6～ 12 5 μg·mL-1剂量范围内脾淋巴细胞的增殖率明显提高。结论 :本文所用检测方法能准确地测定胸腺素α1的纯度、相对分子质量和等电点 ,有效地测定其生物学活性 ,适用于胸腺素α1的质量鉴定