靶向性非病毒载体介导p21WAF-1基因对人肝癌抑制效应的研究

肝癌是我国的一种常见肿瘤,对于该病的治疗,目前除了手术、化疗等尚无很好的治疗方法,而且除根治性切除有可能根治肝癌外,多数患者在确诊以后的生存时间较短.所以,国内外都在寻找一些新的方法,与传统的疗法进行综合治疗,这些方法主要是一些生物疗法,如免疫治疗,基因治疗等.其中,基因治疗有较大的发展潜力.我们实验室开发了靶向性非病毒载体GE7基因导入系统,该系统包括可与受体特异性结合的配体寡肽GE7和内吞小体释放寡肽HA20(其成份为流感病毒血凝素氨基末端20个氨基酸残基,用来使内吞小泡释放内容物,防止进入细胞内的外源基因被溶酶体酶系降解).GE7基因导入系统的特点是可以靶向性的介导外源基因进入EGF受体高表达的细胞,并具有较高的转导效率.     

肿瘤中血管内皮生长因子受体的表达

血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)是肿瘤血管生长的最主要调节者.VEGF通过与VEGF受体的结合,介导其生物学功能.flt-1与flk-1/KDR是VEGF的两个高亲和的受体,不同的受体可介导VEGF不同的生物学功能.本文对VEGF受体的结构与特性,VEGF受体在肿瘤标本、肿瘤细胞系、内皮细胞与裸鼠皮下接种肿瘤动物模型中的表达以及VEGF受体表达的调控等方面作一综述.     

靶向性基因导入系统介导p16基因对喉鳞状细胞癌抑制作用

目的 探讨一种新的靶向性非病毒型基因导入系统GE7-HA20介导P16基因对喉鳞状细胞癌的抑制作用。方法 建立喉癌裸鼠移植瘤模型;构建外源性基因(β-半乳糖苷酶报道基因及P16基因)和多肽载体系统复合物;在体内外观察P16基因对喉癌的抑制情况;LSAB法观察Hep-2细胞转染前后的P16表达。结果 靶向性多肽基因导入系统可将β-gal导入裸鼠移植瘤内呈阳性反应呈蓝染,LSAB显示转染后P16基因的表达明显升高,P16基因具有抑制肿瘤生长作用并有统计学意义(P<0.05)。结论 GE7-HA20系统借助于表皮生长因子受体(epidermal growth factorreceptor,EGFR)可靶向性将目的基因导入喉癌中并得到高效表达;体内外导入p16基因后可显著抑制喉鳞状细胞癌。     

表皮生长因子受体为靶向的多肽基因导入系统介导 p21 WAF1对人喉癌的基因治疗

目的：评价靶向性非病毒载体系统介导的p21^WAF1对人喉癌基因治疗的可行性和有效性。方法：利用组建的表皮生长因子受体(EGF-R)介导的多肽基因导入系统与p21^WAF1基因构成基因载体复元物，分别体外转染人喉癌Hep-2细胞，通过荧光显微镜观察和通过转染喉癌细胞生长曲线及流式细胞仪检测等方法观察新的受体介导多肽基因导入系统对外源基因的导入和导入后对人喉癌细胞的抑制作用。结果：荧光显微镜观察到标记基因的表达产物绿色荧光蛋白，转染后48h呈弱阳性，72h呈强阳性；p21^WAF1基因转染后喉癌细胞生长受到明显抑制，第4天抑制率为79％；流式细胞仪检测到p21^WAF1转染的Hep-2细胞发生了明显的凋亡。结论：EGF-R介导的多肽基因导入系统可靶向性地将治疗基因导入Hep-2人喉癌细胞，p21^WAF1基因可明显抑制Hep-2细胞的生长并有效诱导基因凋亡。     

抗人小细胞肺癌单克隆抗体基因文库的构建

抗人小细胞肺癌单克隆抗体基因文库的构建田培坤，王斌，胡江琴，刘健上海市肿瘤研究所（上海２０００３２）自１９７５年淋巴细胞杂交瘤技术的出现，免疫学界研制出了大量的特异性强，灵敏度高的单克隆抗体，并很快应用于临床。但随之也出现了一个仍待解决的鼠源性单克隆...     

抗人小细胞肺癌单克隆抗体基因文库的筛选

在引气浮选中，影响除油效率的因素主要是油粒直径、气泡直径和油粒表面的化学性质。加入表面活性剂、聚合物及无机物凝聚剂，可以降低气泡直径、增大油粒直径、降低油粒表面的电位，从而提高除油效率。     

多聚阳离子对非病毒载体转移效率的影响*

目的：制备Ｔ淋巴瘤ＴＣＲＶβ核酸疫苗。方法：利用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出人Ｔ淋巴瘤细胞Ｊｕｒｋａｔ的ＴＣＲ　Ｖβ基因片段,并将其重组入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３。用重组表达载体转染ＳＰ２／０细胞,在ｍＲＮＡ水平上检测其表达。再用ｐｃＤＮＡ３和重组载体分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,收集抗血清,用免疫组化技术检测抗体产生情况。结果：扩增出ＴＣＲ Ｖβ的基因片段,测序结果证实其序列与已发表的一致。并构建出重组表达载体ｐｃＤＮＡ３－ＴＣＲ Ｖβ。该质粒转染到 ＳＰ２／０细胞,可在ｍＲＮＡ水平上检测到其表达。在用ｐｃＤＮＡ３－ＴＣＲＶβ免疫的小鼠抗血清中检测到抗Ｊｕｒｋａｔ细胞 ＴＣＲ Ｖβ的抗体。免疫组化结果表明,该血清不与表达 ＴＣＲγδ的人Ｔ淋巴瘤细胞发生反应,而与转染该基因的ＳＰ２／０细胞产生强阳性反应。正常小鼠血清与ｐｃＤＮＡ３免疫的小鼠血清与Ｊｕｒｋａｔ细胞不产生显色反应。结论：所制备的Ｔ淋巴瘤ＴＣＶβ核酸疫苗能有效地诱导机体产生体液兔疫反应。     

基因治疗中的病毒载体

近十年来,基因治疗研究进展迅猛[1],部分基因治疗方案已进入临床试验阶段。基因治疗是运用分子生物学技术将目的基因(治疗基因)导入体内治疗疾病,可用于遗传性疾病,也适用于其他非遗传性疾病。基因导入途径主要有两种:exvivo和invivo。exvivo,即离体试验,是将病人自体细胞...     

人原发性肝癌转化基因——N-ras的研究

近三年内已有报道从10余种人体恶性肿瘤应用DNA转染和分子生物学技术鉴定和分离癌基因,例如从膀胱癌、肺癌分离出Ha-ras;从肺癌、结肠癌、胆囊癌、胰腺癌卵巢癌、某些软组织肉瘤中分离出Ki-ras;从纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤、髓细胞性白血病和T细胞淋巴瘤等分离出N-ras等。但关于我国常见的原发性肝癌的转化基因尚未见正式报道。本文描述从原发性肝癌、肝癌7402细     

Effect of preS2 antisense RNA on hepatocellular carcinoma with a novel delivery system

HepatitisBvirus (HBV)infectioniswidelyprevalentinChina ,andthereisnoefficientwaytocureit Antisensetechnique,blockingthetargetgeneandinhibitingitsexpressionatthemolecularlevel,hasshownpotentialantiviralandantitumoreffects 1 3 　Choosingthetargetsiteonthe 3 2kbHBVgenomeisthekeytotheantisensetechnique Inpreviousresearch ,wefoundthatanantisenseoligonucleotidecomplementarytopreS2 (as preS2 )hadthestrongestinhibitoryeffectonHBVantigenexpressioninvitroamongfourpiecesofHBVantisenseoligonucleoti…